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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的构建被引量：11: 2007年; 目的确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机制,以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础。方法根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分5段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到pBlueScriptⅡSK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接成JX143株的全长cDNA克隆pJX143和含有遗传标记MluⅠ限制性内切酶的基因组全长cDNA克隆pJX143-M。结果全长cDNA克隆经体外合成RNA后转染MA-104细胞,均获得稳定的拯救病毒。通过比较亲本病毒与拯救病毒的病毒滴度、多步生长曲线和利用拯救病毒vJX143进行动物回归试验,结果发现病毒学及生物学特性没有显著差异。结论PRRSV的JX143株病毒确实是引起"猪高热综合征"的主要病原;建立了首个高致病性PRRSV的感染性cDNA克隆,证明拯救病毒与亲本病毒生物学特性相同。; 吕健孙志张建武刘维全袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆高致病性动物回归试验

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建: 近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传操作,本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增,将得到的...; 吕健袁世山; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建: 近年来在全国范围广泛流行的“猪无名高热”的主要病原之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物，分五段扩增了高致病性猪蓝耳病病毒JX0612株的全长cDNA，将各cDNA片段克...; 吕健孙志张建武刘维全袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆猪蓝耳病发病机理; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用被引量：5: 2008年; 高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。; 李祥健张建武吕健余丹丹姚火春袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征高致病性猪蓝耳病感染性克隆嵌合病毒候选疫苗

猪繁殖与呼吸综合征防控专利技术现状与发展趋势被引量：1: 2014年; 以中国专利文献检索系统(CPRS)和德温特世界专利索引数据库(WPI)为文献来源,对国内外猪繁殖与呼吸综合征防控领域的专利申请状况进行了检索和分析,主要分析了专利申请的整体趋势、国家和地区分布、申请人、技术主题等方面,并提出如何提高我国猪繁殖与呼吸综合征领域专利申请质量和科研转化的建议。我国申请人可以通过分析结果调整技术研发方向,着重应用性研究成果转化。同时,应放眼全球,在世界范围进行合理的专利布局、合理利用优先权制度、形成自主知识产权。; 吕健高飞袁世山童光志; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征

猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定: 2012年; 查明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)致病性大幅增高的机制,进而研制用于防治流行PRRSV变异株的高效疫苗无疑是兽医工作者的当务之急。在弱毒株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS以及我室构建的高致病性HP PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,构建了nsp2替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆。将构建的嵌合克隆转染MA104,4d后观察到典型的CPE。通过RT-PCR和免疫荧光证明获得了一系列强弱毒株之间的嵌合病毒。这些嵌合病毒的构建成功和相应反向遗传操作平台的建立及应用,为研发预防HP PRRSV的高效嵌合疫苗奠定了基础。该类嵌合感染性cDNA克隆也为解析目前流行的HP PRRSV毒力因子和高致病力机制奠定了基础。; 吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征 NSP2 感染性克隆嵌合病毒

高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒和遗传工程疫苗: 本发明提供了一种高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的遗传工程疫苗及构建方法。根据蓝耳病病毒基因相对保守区的序列设计多对引物，分段扩增蓝耳病病毒基因序列，并依次连接到合适的载体中，获得猪蓝耳病病...; 袁世山吕健李祥健张建武余丹丹孙志高飞韦祖樟庄金山谭涛郑海红谭菲菲刘长龙陆嘉琦丛雁芳王小敏郑浩; 文献传递

PRRSV强弱病毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定被引量：4: 2013年; 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)与致弱PRRSV的重组病毒,本研究在PRRSV致弱株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS与HP-PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,利用SOE-PCR技术将强弱毒的nsp2区域进行互换,构建了nsp2基因替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆。将构建的嵌合克隆转染MA104细胞,4 d后观察到典型的细胞病变。通过RT-PCR和间接免疫荧光证明获得了强弱病毒株之间nsp2基因互换的嵌合病毒。这些嵌合病毒的构建和相应反向遗传操作平台的建立,为进一步研究HP-PRRSV的致病机制及相关疫苗的研发奠定了基础。; 吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山; 关键词：PRRSV 感染性克隆嵌合病毒病毒株 PCR技术间接免疫荧光

猪链球菌病防控专利技术现状与发展趋势: 2014年; 以中国专利文献检索系统(CPRS)和德温特世界专利索引数据库(WPI)为文献来源,对国内外猪链球菌防控领域的专利申请状况进行了检索和分析,主要分析了专利申请的整体趋势、国家和地区分布、申请人、技术主题等方面,并提出如何提高我国猪链球菌领域专利申请质量和科研转化的建议。我国申请人可以通过分析结果调整技术研发方向,着重应用性研究成果转化;同时,应放眼全球,在世界范围进行合理的专利布局、合理利用优先权制度、形成自主知识产权。; 吕健高飞袁世山童光志; 关键词：猪链球菌

非结构蛋白2高变区在PRRSV复制中的作用: 2012年; 为了研究nsp2的非必需区在动脉炎病毒复制中的作用,采用定点突变PCR(site direct PCR)法对PRRSV全长感染性克隆pAPRRS的nsp2进行了系列缺失。结果显示,通过病毒拯救发现,nsp2部分区段可以忍受一定程度的缺失,但大幅度的缺失影响了病毒的复制、RNA合成翻译甚至病毒颗粒的成熟过程。结果表明,nsp2中多个氨基酸的变化可能影响PRRSV中多聚蛋白的水解、加工、成熟或RTC的组装。; 吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒跨膜区病毒复制

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