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叶博: 作品数：36 被引量：64H指数：5; 供职机构：辽宁省农业科学院更多>>; 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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柞蚕溶菌酶的基因序列及其表达产物的制备方法: 柞蚕溶菌酶基因是用大肠杆菌诱导柞蚕蛹，取柞蚕蛹脂肪体，提取总RNA，反转录成cDNA。根据已知溶菌酶基因的序列，设计简并引物，用RLM-RACE方法分别获得柞蚕溶菌酶基因5’端和3’端非编码区基因片段，并进行序列分析。根...; 范琦张波王林美李树英叶博; 文献传递

柞蚕溶菌酶基因的克隆和序列分析被引量：9: 2009年; 采用cDNA末端扩增(RACE)方法及简并引物克隆了柞蚕溶菌酶(Antheraea pernyilysozyme)基因(Gen-Bank登录号:DQ353869)。该基因cDNA序列全长675 bp,由3个外显子和2个内含子组成,其开放读码框(ORF)长420 bp,编码140个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白的1-20位氨基酸为信号肽序列,21-140位氨基酸为柞蚕溶菌酶成熟蛋白(分子质量14 kD,等电点8.46)。柞蚕溶菌酶氨基酸序列中含有c型溶菌酶分子所特有的活性中心Glu32、Asp50以及8个半胱氨酸残基,与鳞翅目昆虫溶菌酶的氨基酸序列同源性较高,属非钙结合型c型溶菌酶。柞蚕溶菌酶的模拟三级结构与印度柞蚕(Antheraea mylitta)溶菌酶的三级结构十分相似。; 张波王林美叶博赵振军范琦李树英; 关键词：生物信息学分析

一种柞蚕微孢子虫株（系）的分离、培养及保存的方法: 本发明公开了一种柞蚕微孢子虫株(系)分离、培养及保存的方法。利用柞蚕精巢或卵巢组织制备原代细胞，分离、培养柞蚕微孢子虫；利用柞蚕蛹期滞育可以长期储存的特点，将柞蚕原代细胞分离、培养的柞蚕微孢子虫经发芽后注射入健康柞蚕蛹体...; 岳冬梅范琦王林美李佩佩叶博赵振军张波; 文献传递

无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)植酸酶基因的克隆及序列分析: 2010年; 以无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增植酸酶基因(phyA)。将PCR产物克隆到pMD 18-T质粒中,用于DNA测序。DNA序列分析结果表明,基因全长1 509 bp,其中包括一个长105 bp的内含子。编码467个氨基酸,第1-19氨基酸为信号肽序列,成熟的植酸酶由448个氨基酸组成。与黑曲霉(Aspergillus niger)植酸酶(GenBank Accession:M94550)的氨基酸同源性为95.7%,与无花果曲霉(Aspergillus ficuum3.324)植酸酶(GenBank Accession:AY013315)的氨基酸同源性为98.9%,显示了植酸酶基因在不同菌株中的差异。; 张波王林美叶博赵振军李树英; 关键词：无花果曲霉植酸酶基因克隆

荧光定量实时PCR方法分析柞蚕核型多角体病毒对不同昆虫细胞的感染性: 柞蚕核型多角体病毒(ApMNPV)通常只感染柞蚕、樗蚕等少数昆虫及所属细胞,具有较高的宿主专一性。我们曾发现ApNPVΔph/egfp~+在感染不同昆虫细胞后,绿色荧光蛋白有不同程度表达。为进一步了解ApNPVΔph/e...; 赵振军王林美岳冬梅叶博张波范琦; 关键词：柞蚕核型多角体病毒昆虫细胞; 文献传递

柞蚕核型多角体病毒对Tn-Hi5细胞的感染性及抗细胞凋亡分析被引量：1: 2015年; 细胞凋亡是昆虫宿主细胞抗病毒感染及控制病毒复制增殖的一个复杂的分子生物学机制。前期研究发现柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)的重组病毒Ap NPV-Δph/egfp+能够感染非特异性宿主细胞Tn-Hi5,并表达EGFP蛋白。利用实时荧光定量PCR方法进一步检测分析Ap NPV-Δph/egfp+在Tn-Hi5细胞中的复制增殖特点以及子代病毒的感染性;通过检测细胞凋亡信号通路中类caspase-3蛋白酶活性,分析Ap NPV-Δph/egfp+感染Tn-Hi5细胞后对抗细胞凋亡的作用途径。结果显示,随着病毒感染时间的延长,Ap NPV-Δph/egfp+在Tn-Hi5细胞中的DNA拷贝数增加,被感染的Tn-Hi5细胞能够产生子代病毒,但病毒DNA拷贝数逐代减少;Ap NPV-Δph/egfp+感染Tn-Hi5细胞后可抑制放线菌素D诱导的细胞类caspase-3蛋白酶活性。研究结果证实Ap NPV能够在Tn-Hi5细胞中复制增殖,并具有抑制由放线菌素D诱导的细胞凋亡的作用。; 赵振军王林美叶博岳冬梅张波李树英都兴范范琦; 关键词：柞蚕核型多角体病毒细胞凋亡

柞蚕核型多角体病毒感染离体细胞的研究被引量：1: 2006年; 柞蚕核型多角体病毒(Antheraea Pernyi Nuclear Polyhedrosis Virus简称ApNPV)对樗蚕蛹精细胞和草地贪夜蛾Sf9细胞的感染是非同源昆虫细胞的感染。运用昆虫细胞培养、病毒感染及电子显微镜等病毒学技术研究了ApNPV在体外培养的樗蚕蛹精巢细胞中的感染情况,初步探明了ApNPV在体外培养昆虫细胞中的形态发生过程,表明它是典型的杆状病毒复制。并用该病毒以一定浓度感染草地贪夜蛾Sf9细胞,说明ApN-PV不能在Sf9细胞中复制。; 王林美范琦张波叶博赵振军; 关键词：樗蚕柞蚕核型多角体病毒昆虫细胞培养

高通量柞蚕微孢子虫快速诊断方法研究: 【背景】柞蚕微粒子病严重困扰柞蚕产业发展,对其病原微孢子虫进行准确诊断,是切断胚种传播、控制微粒子病的有效手段。分子诊断技术通过特异性扩增靶标基因达到诊断目的,灵敏度高,特异性好,广泛应用于病原微生物的检测。然而,现行柞...; 李佩佩米锐岳冬梅叶博赵振军张波王林美范琦; 关键词：柞蚕微孢子虫分子诊断灵敏度 DNA提取荧光定量PCR; 文献传递

柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法及培养基的选择试验被引量：4: 2010年; 采用机械分散法和胰酶消化法,分别选取MGM-448、Grace、TC-100等3种培养基进行柞蚕蛹卵巢组织细胞的体外培养。在2个月的原代细胞培养期间,机械分散法获得的培养物在MGM-448培养基中贴壁效果好,细胞健康且生长旺盛;而在Grace和TC-100培养基中,细胞虽能贴壁,但生长较缓慢。胰酶消化法分散细胞的效果好,但在3种培养基中的细胞会出现轻微损伤而影响活力。综上认为,柞蚕蛹卵巢原代细胞的最佳培养方法为机械分散法,最佳培养基为MGM-448。; 王林美范琦张波叶博赵振军李树英; 关键词：柞蚕卵巢细胞原代培养