张波
- 作品数：34 被引量：32H指数：4
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- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 荧光定量实时PCR方法分析柞蚕核型多角体病毒对不同昆虫细胞的感染性
- 柞蚕核型多角体病毒(ApMNPV)通常只感染柞蚕、樗蚕等少数昆虫及所属细胞,具有较高的宿主专一性。我们曾发现ApNPVΔph/egfp~+在感染不同昆虫细胞后,绿色荧光蛋白有不同程度表达。为进一步了解ApNPVΔph/e...
- 赵振军王林美岳冬梅叶博张波范琦
- 关键词：柞蚕核型多角体病毒昆虫细胞
- 文献传递
- 柞蚕核型多角体病毒对Tn-Hi5细胞的感染性及抗细胞凋亡分析被引量：1
- 2015年
- 细胞凋亡是昆虫宿主细胞抗病毒感染及控制病毒复制增殖的一个复杂的分子生物学机制。前期研究发现柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)的重组病毒Ap NPV-Δph/egfp+能够感染非特异性宿主细胞Tn-Hi5,并表达EGFP蛋白。利用实时荧光定量PCR方法进一步检测分析Ap NPV-Δph/egfp+在Tn-Hi5细胞中的复制增殖特点以及子代病毒的感染性;通过检测细胞凋亡信号通路中类caspase-3蛋白酶活性,分析Ap NPV-Δph/egfp+感染Tn-Hi5细胞后对抗细胞凋亡的作用途径。结果显示,随着病毒感染时间的延长,Ap NPV-Δph/egfp+在Tn-Hi5细胞中的DNA拷贝数增加,被感染的Tn-Hi5细胞能够产生子代病毒,但病毒DNA拷贝数逐代减少;Ap NPV-Δph/egfp+感染Tn-Hi5细胞后可抑制放线菌素D诱导的细胞类caspase-3蛋白酶活性。研究结果证实Ap NPV能够在Tn-Hi5细胞中复制增殖,并具有抑制由放线菌素D诱导的细胞凋亡的作用。
- 赵振军王林美叶博岳冬梅张波李树英都兴范范琦
- 关键词：柞蚕核型多角体病毒细胞凋亡
- 一种蛋白酶、该蛋白酶的制备方法及其应用和药用剂型
- 本发明涉及一种蛋白酶、该蛋白酶的制备方法及其应用和药用剂型，从具有吐丝结茧能力的昆虫在羽化前分泌的吐出液中分离、提取出一种蛋白酶。这种具有纤溶活性的蛋白酶，具备生物活性高、稳定性良好等特点。该蛋白具有强烈的精氨酸酯酶活力...
- 李树英李文利范琦耿鹏李亚洁赵振军张波
- 柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法的研究
- 研究柞蚕蛹卵巢原代细胞制作、培养。以卵巢组织为材料,采用机械分散法、胰酶消化法及螯合剂分散法,选取Grace、TC-100、MGM-448三种培养基体外培养2个月观察细胞生长变化。机械分散法对细胞无损伤;胰酶消化法有轻微...
- 王林美范琦张波叶博赵振军李树英
- 关键词：柞蚕卵巢原代培养
- 文献传递
- 柞蚕核型多角体病毒对柞蚕蛹卵巢细胞感染性研究被引量：1
- 2013年
- 研究柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)与宿主细胞相互作用及形态发生机制,以便更好地开发利用杆状病毒表达系统。体外培养柞蚕蛹卵巢原代细胞,ApNPV病毒悬液感染细胞,测定细胞感染率及半数组织培养感染剂量,应用倒置相差显微镜和电子显微镜观察ApNPV感染后细胞的形态学变化。结果显示,ApNPV感染柞蚕蛹卵巢细胞5 d,倒置相差显微镜下观察即可发现细胞胀大,细胞内有多角体病毒出现;感染7 d,细胞内多角体病毒数量增多,细胞感染率为40.2%,细胞上清液中无包涵体病毒(NOV)效价滴度为6.95×105TCID50/mL。电子显微镜下观察到受病毒感染的细胞早期表现为细胞核膨大,而后核内出现病毒发生基质和核衣壳,核衣壳获得套膜形成病毒束,发育为成熟的病毒粒子,众多病毒粒子同时封存在一个折光性强,具有蛋白质性质、直径在0.7-10μm的多角体中。得出结论,ApNPV对柞蚕蛹卵巢细胞高度敏感,其在柞蚕蛹卵巢细胞内复制为典型的杆状病毒非同步复制。
- 王林美岳冬梅李树英范琦叶博赵振军张波
- 关键词：柞蚕核型多角体病毒卵巢细胞
- 高通量DNA快速提取方法及其在柞蚕微孢子虫分子诊断中的应用
- 2019年
- 针对柞蚕微孢子虫分子检测受限于繁琐的DNA提取而局限于实验室使用的瓶颈问题,以成本较低的碱裂解法结合磁珠抽提,建立了一种全程在96孔板上使用排枪操作的高通量DNA提取方法(HT提取),对比HT-冻融法和HT-SDS法2种裂解方法获得的DNA在常规PCR与荧光定量PCR(qPCR)中的检测下限,并进行微粒子病筛查的应用。结果表明,HT提取法与传统方法相比,无繁琐预处理,操作快速、通量高,污染低、抗干扰、提取DNA品质好,主要耗材能重复使用,可自动化,人力物力成本较低;HT-SDS法具有更稳定的裂解效果,获得的DNA用于常规PCR、qPCR检测下限可达45和0045个/μL;HT-冻融法在常规PCR与qPCR中的检测下限为45和045个/μL,而传统抽提方法的常规PCR检测下限仅为110个/μL。结合HT-SDS法和qPCR,对3 000个样品进行微粒子病筛查,结果显示,其检测灵敏度显著高于现行镜检技术,最高高出近11倍,且对低带毒品种优势尤为显著,有望实现在柞蚕种茧微粒子病检疫及柞蚕种质资源保护中的应用,促进柞蚕业发展。
- 李佩佩李佩佩徐亮岳冬梅徐亮何龙米锐叶博王林美赵振军李树英米锐
- 关键词：高通量DNA提取柞蚕微孢子虫分子诊断高灵敏度
- 柞蚕溶菌酶的基因序列及其表达产物的制备方法
- 柞蚕溶菌酶基因是用大肠杆菌诱导柞蚕蛹，取柞蚕蛹脂肪体，提取总RNA，反转录成cDNA。根据已知溶菌酶基因的序列，设计简并引物，用RLM-RACE方法分别获得柞蚕溶菌酶基因5’端和3’端非编码区基因片段，并进行序列分析。根...
- 范琦张波王林美李树英叶博
- 文献传递
- 柞蚕溶菌酶基因的克隆和序列分析被引量：9
- 2009年
- 采用cDNA末端扩增(RACE)方法及简并引物克隆了柞蚕溶菌酶(Antheraea pernyilysozyme)基因(Gen-Bank登录号:DQ353869)。该基因cDNA序列全长675 bp,由3个外显子和2个内含子组成,其开放读码框(ORF)长420 bp,编码140个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白的1-20位氨基酸为信号肽序列,21-140位氨基酸为柞蚕溶菌酶成熟蛋白(分子质量14 kD,等电点8.46)。柞蚕溶菌酶氨基酸序列中含有c型溶菌酶分子所特有的活性中心Glu32、Asp50以及8个半胱氨酸残基,与鳞翅目昆虫溶菌酶的氨基酸序列同源性较高,属非钙结合型c型溶菌酶。柞蚕溶菌酶的模拟三级结构与印度柞蚕(Antheraea mylitta)溶菌酶的三级结构十分相似。
- 张波王林美叶博赵振军范琦李树英
- 关键词：生物信息学分析
- 一种柞蚕微孢子虫株（系）的分离、培养及保存的方法
- 本发明公开了一种柞蚕微孢子虫株(系)分离、培养及保存的方法。利用柞蚕精巢或卵巢组织制备原代细胞，分离、培养柞蚕微孢子虫；利用柞蚕蛹期滞育可以长期储存的特点，将柞蚕原代细胞分离、培养的柞蚕微孢子虫经发芽后注射入健康柞蚕蛹体...
- 岳冬梅范琦王林美李佩佩叶博赵振军张波
- 文献传递
- 无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)植酸酶基因的克隆及序列分析
- 2010年
- 以无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增植酸酶基因(phyA)。将PCR产物克隆到pMD 18-T质粒中,用于DNA测序。DNA序列分析结果表明,基因全长1 509 bp,其中包括一个长105 bp的内含子。编码467个氨基酸,第1-19氨基酸为信号肽序列,成熟的植酸酶由448个氨基酸组成。与黑曲霉(Aspergillus niger)植酸酶(GenBank Accession:M94550)的氨基酸同源性为95.7%,与无花果曲霉(Aspergillus ficuum3.324)植酸酶(GenBank Accession:AY013315)的氨基酸同源性为98.9%,显示了植酸酶基因在不同菌株中的差异。
- 张波王林美叶博赵振军李树英
- 关键词：无花果曲霉植酸酶基因克隆
