张伟
- 作品数：30 被引量：39H指数：3
- 供职机构：第四军医大学药学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- T7噬菌体展示人肝癌cDNA文库筛选人CD8^+T淋巴细胞特异结合分子被引量：2
- 2017年
- 目的:利用噬菌体表面展示技术从人肝癌T7 cDNA文库中筛选出能与人CD8^+T淋巴细胞特异结合的蛋白分子。方法:以人CD8^+T淋巴细胞为筛选靶标,对人肝癌T7 cDNA噬菌体肽库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"生物淘选与富集,ELISA鉴定特异结合的噬菌体单克隆;对获得的阳性克隆裂解液进行PCR扩增及DNA测序,然后进行生物信息学分析,确定所编码的结合蛋白。结果:经过4轮筛选,结合人CD8^+T淋巴细胞的噬菌体克隆得到富集,通过测序与同源性比对分析获得17个特异性结合的多肽序列;生物信息学分析发现阳性噬菌体克隆的同源蛋白中,可能与肝癌免疫逃逸相关的分子有Unc-51样自噬活化激酶1(ULK1)、一般受体磷酸肌醇相关支架蛋白1(GRASP)、中间α球蛋白抑制因子H1(ITIH1)、富含亮氨酸重复8家族成员D(LRRC8D)和CD164等。结论:从人肝癌T7 cDNA噬菌体肽库中筛选获得了能与人CD8^+T淋巴细胞特异结合的分子,为阐明人肝癌发生发展过程中肿瘤免疫逃逸相关机制奠定了基础。
- 高凯丽李维娜薛晓畅张存郝强张伟张伟
- 关键词：噬菌体展示技术肝癌CD8^+T淋巴细胞
- 胸腺素α1二聚体蛋白的初步毒理学研究
- 2017年
- 目的:对胸腺素α1二聚体蛋白开展初步的毒理学研究,为后续系统地进行临床前研究提供依据。方法:将BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组和胸腺素α1二聚体蛋白高、中、低剂量组,观察胸腺素α1二聚体蛋白给药后小鼠的一般行为,进行血液生化学指征及组织病理学检测。结果:动物未见明显的中毒症状和死亡,与对照组相比,高、中、低各剂量胸腺素α1二聚体蛋白注射组的动物行为、活动、体重、进食量等与对照组无显著差异,血液生化指标与主要脏器组织形态学检查也均未见异常。结论:未发现胸腺素α1二聚体对小鼠有明显的毒性作用。
- 牛东武都都高凯丽王昭维张存张英起张伟张伟
- 关键词：胸腺素Α1二聚体毒理学小鼠
- 抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 舒震侯登勇李晶侯健伟徐玉金陈琳张伟张英起
- 关键词：杂交瘤细胞单克隆抗体
- 抗人白细胞介素15中和抗体识别抗原表位的噬菌体肽库筛选与鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的:用噬菌体呈现随机七肽库筛选能与抗人白细胞介素15(h IL-15)中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽,并初步鉴定其免疫原性。方法:以抗h IL-15中和抗体为靶分子,用生物淘洗法从噬菌体呈现线性七肽库中筛选与之结合的噬菌体克隆,用噬菌体ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆;化学合成筛选得到的多肽,并与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联免疫BALB/c小鼠,检测其免疫原性。结果:经过3轮体外筛选后随机挑取50个阳性噬菌体克隆,ELISA检测结果显示其中15个克隆与抗h IL-15抗体有较强的结合能力,DNA测序结果得到的结构相似群为MTPFWQK、MSPFNQK、MIPYWQK和MIPFHQK;竞争性ELISA结果显示4个序列均能与IL-15竞争性地结合抗IL-15单抗;小鼠免疫实验结果显示4组多肽均能诱导IL-15特异性免疫反应。结论:筛选得到能与抗h IL-15中和抗体特异性结合,且具有免疫原性的模拟抗原7肽序列,为进一步开发h IL-15相关的多肽疫苗提供了依据。
- 高源郝强王舒宁张伟张伟
- 关键词：噬菌体随机肽库白细胞介素15单克隆抗体表位
- miR-10b对滑膜成纤维细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及分子机制被引量：4
- 2018年
- 目的:探讨miR-10b对类风湿性关节滑膜成纤维细胞(RA-FLS)炎性因子分泌、增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法:首先,分离原代培养FLS细胞并进行microarray,筛选RA和OA中差异表达的miRNA分子。然后,用real-time PCR对筛选得到的结果进行验证,进而通过生物信息学分析、细胞转染等方法明确miR-10b在FLS细胞中下调的分子机制。最后,采用MTT比色法、划痕实验和Transwell实验等检测miR-10b对其FLS细胞增殖、侵袭和迁移水平的影响。结果:与OA FLS相比,芯片筛选发现176条miRNA在RA-FLS中上调,204条下调;其中,miR-10b在RA-FLS细胞中受肿瘤坏死因子(TNF-α)等多种炎性因子以NF-κB依赖的方式进行调控;miR-10b的下游靶基因为TAK1和TLR4,通过对这两个靶基因的调控,miR-10b一方面可以促进TNF-α的分泌和NF-κB的活化入核,从而激发TNF-α→NF-κB→miR-10b→TNF-α/NF-κB环路;另一方面促进FLS表面TLR4的表达以及LPS对于FLS的刺激作用,激发LPS→NF-κB→miR-10b→TLR4环路。此外,miR-10b的下调可促进FLS细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:miR-10b在RA-FLS细胞中显著下调,其通过参与信号环路的调节可影响FLS细胞的炎性细胞因子分泌及其增殖、侵袭和迁移。
- 褚楚穆楠顾锦涛黄同列舒震赵金康郑朝晖张伟薛晓畅
- 关键词：类风湿性关节炎MICRORNAMIR-10B成纤维样滑膜细胞
- 重组人B7-H1 IgV疫苗的初步毒理学研究
- 2015年
- 目的:对重组人B7-H1 Ig V疫苗进行重复给药毒性研究,为后续系统临床前研究提供依据。方法:常规免疫BALB/c小鼠,检测疫苗及佐剂对小鼠一般毒理学指标的影响及疫苗的免疫毒性。结果:B7-H1疫苗及氢氧化铝佐剂对小鼠的进食、体重等一般状况,血液学和血清生化学指标,重要脏器组织的大体病理学,组织病理学情况及相对重量均无显著性影响;B7-H1组小鼠的CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+T细胞比值明显增高。结论:B7-H1疫苗及氢氧化铝佐剂对小鼠一般毒理学指标未见显著影响;疫苗组小鼠的CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+T细胞比值明显增高,提示该疫苗诱导了明显的免疫应答;该研究为重组人B7-H1 Ig V疫苗的进一步临床应用提供了重要证据。
- 曹正聪张存吴守振张旺倩张英起张伟
- 关键词：IG毒理学免疫毒性
- 含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。
- 李曼黄晨张伟王增禄李晶杜锐孙世仁张鹏张英起
- 关键词：蛋白转导域原核表达纯化生物学活性
- 类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞中膜联蛋白A2磷酸化修饰增强基质金属蛋白酶9的活性被引量：3
- 2015年
- 目的研究膜联蛋白A2(ANXA2)磷酸化修饰对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RAFLS)基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9水平及活性的影响。方法原代培养RAFLS,构建包装ANXA2干涉慢病毒,制备ANXA2显著下调的FLS(si ANXA2/FLS)及同型对照作为细胞模型,采用2型胶原蛋白刺激法间接磷酸化RAFLS中的ANXA2。实时定量PCR(qRT-PCR)分析ANXA2磷酸化对RAFLS细胞中MMP-2和MMP-9表达的影响,明胶酶谱实验观察ANXA2活化对RAFLS中MMP-2和MMP-9活性的影响。结果 qRT-PCR结果提示ANXA2磷酸化修饰对RAFLS中MMP-2和MMP-9的水平无显著影响,明胶酶谱实验显示ANXA2磷酸化修饰能够增强MMP-9的活性。结论通过胶原蛋白刺激法间接促进RAFLS中ANXA2的磷酸化修饰,显著增强MMP-9的活性。
- 赵薇穆楠舒震张昭张伟
- 关键词：类风湿性关节炎膜联蛋白A2基质金属蛋白酶9明胶酶谱
- 《现代生物技术药物》教学的优化探索
- 2017年
- 目的探讨《现代生物技术药物》教学内容和模式的改进方法。方法突出课程的"时效性",采用新的"自探共研"的教学模式,加强实验课教学。结果上述方法优化了教学内容,加强了教学互动,提高学生的实践能力。结论通过对《现代生物技术药物》现有教学内容和模式的优化,能够解决教学中存在的问题,从而提高该课程教学质量。
- 郝强张伟薛晓畅张存李维娜张英起
- 关键词：教学方法实验课教学教学体会
- 防疫期间生物制药学实验课程在线教学实践及效果评估被引量：1
- 2021年
- 生物制药学实验是药学专业本科生的一门专业必修课程,它在药学专业本科生的培养中处于关键环节,对学生的专业素质培养极其重要。2020年初,新型冠状病毒肺炎爆发,导致全国各类院校推迟开学,并开始线上授课教学,生物制药学实验课程作为本科生必修课也开始线上授课,不同于其它理论课程,实验课程的线上授课具有其特殊性和限制性。教学组经讨论之后,采取PPT录屏配音制作视频展示实验原理及方法内容,再由教师亲自演示示范,录制实验演示视频,后将视频剪辑合成为网络视频课程上传至学习通软件,学生线上观看视频、教师在线讲解答疑完成实验课教学。虽然在线教学不能让学生亲自操作,但是在线授课也存在很多优势,在一定程度上提高了学生的学习效率,加强了学生对于实验原理及方法的理解。同时,鉴于这次录制视频课程的契机,本教学组拓展完善了生物制药学实验的视频资料,提升了教学组的多媒体授课技术,也为实验课程的线下教学提供补充。
- 何磊张阔张旺倩王舒宁张伟张英起
- 关键词：实验课在线教学
