张存
- 作品数：29 被引量：32H指数：3
- 供职机构：第四军医大学药学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌高密度发酵
- 为实现重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌E.coli DH5/pKKH-BLyS的高密度、高表达发酵,首先进行了培养条件的摸索,确定了该工程菌的最佳培养pH值、诱导剂IPTG的浓度、诱导的最佳时间段、溶氧范围以及补料的流加方...
- 薛晓畅包春杰韩苇秦鑫张存曹筑荣李维娜赵玉红张英起
- 关键词：B淋巴细胞刺激因子重组大肠杆菌高密度发酵
- 文献传递
- 《现代生物技术药物》教学的优化探索
- 2017年
- 目的探讨《现代生物技术药物》教学内容和模式的改进方法。方法突出课程的"时效性",采用新的"自探共研"的教学模式,加强实验课教学。结果上述方法优化了教学内容,加强了教学互动,提高学生的实践能力。结论通过对《现代生物技术药物》现有教学内容和模式的优化,能够解决教学中存在的问题,从而提高该课程教学质量。
- 郝强张伟薛晓畅张存李维娜张英起
- 关键词：教学方法实验课教学教学体会
- HER-2蛋白疫苗的制备及在小鼠中诱导的抗体应答
- 2009年
- 目的:制备HER-2抗原疫苗.方法:采用RT-PCR方法从HER-2+SKBR3细胞株中获得HER-2基因胞外段编码区cDNA,构建pQE-30-HER-2原核表达载体,在大肠杆菌中表达HER-2胞外区蛋白.Ni-NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,Western Blot鉴定.用获得的蛋白免疫小鼠,检测重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答.结果:构建的pQE-30-HER-2质粒经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因的序列与设计的序列完全相同.构建的质粒转化DH5α后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,该重组蛋白以包涵体形式表达,且与mAb Herceptin有较好的结合活性.包涵体用Ni-NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,最大限度的获得了可溶性的HER-2胞外区蛋白.用重组蛋白免疫小鼠,得到了较高的抗体滴度.结论:成功制备了HER-2蛋白疫苗并诱导出较高抗体滴度,为下一步工作打下基础.
- 贺丽清张存吴守振李维娜张英起
- 关键词：HER-2蛋白蛋白纯化包涵体
- 人生长分化因子15的原核表达、纯化与多克隆抗体制备被引量：1
- 2015年
- 目的:原核表达并纯化、鉴定人生长分化因子15(GDF-15),制备其多克隆抗体。方法:从人结肠癌细胞系HT29的cDNA扩增出GDF-15基因片段并插入pET-32a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达重组GDF-15,用镍亲和柱纯化,SDS-PAGE、Western印迹鉴定重组蛋白。用纯化的重组GDF-15免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,鉴定并检测其效价。结果:制备了pET-32a(+)-GDF-15表达载体;经IPTG诱导重组蛋白表达后,采用Ni亲和柱纯化蛋白,并经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定;免疫BALB/c小鼠后获得了GDF-15多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1∶100000,并应用于肿瘤细胞的GDF-15检测中。结论:用基因工程和免疫学方法制备了重组人GDF-15及其多克隆抗体,为后续的分子机制和靶向治疗研究奠定了基础。
- 田钰茜张阔郝强李维娜张存张英起张伟
- 关键词：融合蛋白基因工程表达纯化多克隆抗体
- HER2基因真核表达载体的构建及其抑瘤效应研究
- 目的构建HER2基因真核表达载体,研究其对肿瘤生长的抑制作用。方法通过RT-PCR方法从HER-2+SKBR3细胞株中获得HER-2基因胞外段编码区cDNA,构建pRC-CMV-信号肽-hHER2-ECD真核载体,于大肠...
- 贺丽清张存李维娜张路张英起
- 关键词：真核表达载体转染肿瘤
- 文献传递
- 重组人白细胞介素15融合蛋白的表达、纯化及免疫原性检测被引量：2
- 2014年
- 目的:以白细胞介素15(IL-15)为靶点,研制类风湿性关节炎免疫治疗蛋白疫苗。方法:将N端融合破伤风类毒素(TT)表位的人IL-15基因克隆至带有His标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,获得重组人TT-IL-15融合蛋白(简称rtIL-15);目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后,用Western印迹和HPLC进行鉴定;将rtIL-15与氢氧化铝佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫原性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明重组融合表达质粒pQE-30-TT-IL-15构建正确,重组蛋白的表达量达到菌体总蛋白的20%,主要以包涵体形式表达,经过纯化、复性后,目的蛋白纯度达到95%以上;蛋白疫苗免疫小鼠后,能诱导高滴度的特异性的IL-15抗体。结论:在大肠杆菌中表达了重组人IL-15融合蛋白疫苗,并具有良好的免疫原性。
- 李佳林张存高源郝强王舒宁张伟张伟
- 关键词：疫苗原核表达类风湿性关节炎
- 应用酵母双杂交系统筛选Foxp3△2相互作用蛋白被引量：1
- 2010年
- 目的：应用酵母双杂交系统从人外周血白细胞cDNA文库中筛选与转录因子Foxp3相互作用的蛋白，为进一步研究Foxp3的转录调控机制奠定基础。方法：首先构建pG—BKT7／-Foxp3△2酵母双杂交诱饵载体，转化AH109酵母细胞，检测其毒性及自激活作用；然后将诱饵质粒与人外周血白细胞eDNA文库共转AH109酵母细胞，筛选了与Foxp3△2存在相互作用的蛋白。结果：成功构建了pGBKT7-Foxp3△2酵母表达载体，经转染AHl09酵母细胞，无有毒性，无自激活作用。获得了40个阳性克隆，经生物信息学分析，其中9个具有开放读框。结论：应用酵母双杂交技术筛选出一组可与Foxp3△2相互作用的候选蛋白，为进一步研究Foxp3△2功能奠定了基础。
- 徐玉金姜昌丽张存秦鑫李萌郝强李维娜张伟张英起
- 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白
- GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建及其体外活性和体内分布研究被引量：1
- 2013年
- 目的:构建GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α(rmhTNF-α)融合蛋白(GFE-1-rmhTNF),研究该融合蛋白的体外活性和体内分布。方法:利用基因工程方法,将人工合成的编码GFE-1的寡核苷酸片段连接在rmhTNF-α序列的3'端,转入大肠杆菌中诱导表达,采用Q-Sepharose FF阴离子层析柱和SP-Sepharose FF阳离子层析柱纯化蛋白,SDS-PAGE和Western印迹鉴定,测定该融合蛋白的体外活性,观察其在小鼠体内的分布情况。结果:构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF,并在大肠杆菌中获得高效表达。体外活性实验显示,GFE-1-rmhTNF对L929细胞有明显的杀伤活性;体内分布实验证实,GFE-1-rmhTNF在小鼠肺组织的富集远高于肝肾组织。结论:构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF,可显著杀伤L929细胞并特异性富集于小鼠肺组织。
- 周治中李维娜张存刘楠楠张伟张伟
- 关键词：人肿瘤坏死因子融合蛋白体外活性
- 重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌高密度发酵
- 为实现重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌E.coli DH5/pKKH-BLyS的高密度、高表达发酵，首先进行了培养条件的摸索，确定了该工程菌的最佳培养pH值、诱导剂IPTG的浓度、诱导的最佳时间段、溶氧范围以及补料的流加方...
- 薛晓畅包春杰韩苇秦鑫张存曹筑荣李维娜赵玉红张英起
- 关键词：B淋巴细胞刺激因子重组大肠杆菌高密度发酵
- 文献传递
- 重组人B7-H1IgV蛋白疫苗的表达、纯化及活性鉴定
- 目的：表达、纯化重组人B7-H1IgV融合蛋白,并检测其活性.
方法：将人B7-H1胞外片段IgV区基因插入pET22b原核表达载体,转化大肠杆菌,诱导表达,表达产物经凝胶柱纯化,复性.用纯化的rhB7-H1I...
- 张存张旺倩王增禄吴守振陈霖张伟张英起
- 关键词：肿瘤疫苗蛋白表达分离纯化活性鉴定
- 文献传递
