田丽娜
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国防科技工业技术基础科研项目江苏省卫生厅面上基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 基因转染饲养细胞对造血干/祖细胞体外增殖和自我更新的影响及分子机制的研究
- 目的：
比较人白血病抑制因子(hLIF)的不同添加方式对脐血造血干/祖细胞体外增殖过程中自我更新和归巢潜能的影响，并研究hLIF对JAK/STAT信号通路的激活作用及其在维持造血干细胞增殖和自我更新过程中的分子机制...
- 田丽娜
- 关键词：自我更新基因转染体外增殖
- 文献传递
- 基因转染饲养细胞对造血干/细胞体外增殖和自我更新的影响及分子机制的研究
- 田丽娜
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- IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因表达效率的对比分析被引量：2
- 2010年
- 目的：构建IRES及polyA-promoter介导人血管生成素-1（Angiogenin-1,Ang-1）和人血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor165,VEGF165）双基因共表达的腺病毒载体,比较IRES与polyA-promoter不同表达模式及其对位于二者前后基因的表达效率和诱导兔角膜新生血管的形成功能,为今后构建双基因或多基因高效共表达载体提供实验依据。方法：以pAdTrack-CMV-Ang-1-IRES-VEGF165质粒为模板,PCR扩增人VEGF165及Ang-1基因片段,分别将其亚克隆至改建的pAdTrack-CMV-PolyA-promoter及pAdTrack-CMV-IRES转移质粒中,构建pTrack-CMV-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165、pTrack-CMV-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1、pTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1基因重组转移质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中同源重组,然后经PacI线性化后转染QBI-293A人胚肾成纤维细胞（简称293A细胞）,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165及Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165在QBI-293A细胞中的转录,ELISA法分别检测不同腺病毒载体目的基因的表达量,比较分析Ang-1与VEGF165基因在IRES和polyA-promoter介导的不同腺病毒表达载体中的表达能力,及在同一腺病毒表达载体中前后不同位置的表达效率。并进一步于兔角膜缘注射Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165,Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,Ad-Ang-1-IRES-VEGF165,检测角膜新生血管的面积,并比较其诱导血管形成能力的差异。结果：测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,不同重组腺病毒载体均获得成功包装,病毒效价可达2~5×1010pfu/m l,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165均能有效转录,ELISA法检测结果表明Ang-1、VEGF165基因不仅均能在细胞中有效表达,而且IRES介导的Ang-1及VEGF165基因,无论在IRES上游或下游,其表达量均低于polyA-promoter相同位置的Ang-1及VEGF165基因表达量,大约降低60%~70%左右,同时Ang-1/VEGF165在同一载体上、下�
- 陈瑶缪竞诚韩亚丽盛伟华包婉蓉田丽娜张凤娟吕海涛杨吉成
- 关键词：血管生成素-1血管内皮生长因子IRES
- 转白血病抑制因子基因人胚肺成纤维细胞对脐血CD34^+细胞体外扩增的影响
- 2012年
- 背景:单份脐血的造血细胞数量有限,难以满足成人的需要,如何有效地扩增脐血造血干/祖细胞是目前研究的热点。目的:构建人白血病抑制因子基因修饰的人胚肺成纤维细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响。方法:建立转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞,用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验检测自发迁移率和基质细胞衍生因子1诱导迁移试验以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力。结果与结论:成功建立转基因饲养层细胞,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,与人白血病抑制因子转基因饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干/祖细胞可大量扩增,同时表面黏附分子的表达量仍较高。体外迁移实验显示与转基因饲养层细胞共培养的造血细胞的诱导迁移率明显高于对照组,可以较好地保持其归巢能力。因此转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力。
- 夏卫郁心姜健田丽娜陈瑶缪竞诚
- 关键词：饲养层CD34+细胞体外扩增
- Ad-hOSM转基因饲养层细胞对脐血CD34^+造血干/祖细胞增殖及归巢能力的影响
- 2011年
- 目的:建立转人抑瘤素M(hOSM)基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞扩增的影响,比较扩增前、后造血干/祖细胞体外迁移能力的变化。方法:建立转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术(FCM)检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,FCM检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验(Transwell实验)检测自发迁移率和SDF-1诱导迁移率以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力。结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达(96.8±2.28)%,与Ad-hOSM转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可扩增15.73倍,表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,培养后的细胞用Tran-swell板做体外迁移实验,与转基因饲养层细胞共培养的干细胞,其诱导迁移率为(40.68±1.35)%,明显高于对照组,可以较好的保持其归巢能力。结论:转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力。
- 田丽娜郁心包婉蓉陈瑶韩亚丽张凤娟缪竞诚
- 关键词：腺病毒载体
- 干细胞维持多潜能性的能力与机制被引量：1
- 2010年
- 背景:近年研究发现,成体细胞能够重新编程回到胚胎状态,这为利用成体干细胞治疗疾病提供了可能。现在虽然有不少关于干细胞增殖能力及自我更新的研究报道,但对其机制还缺乏深入的了解。目的:对国内外关于干细胞维持多潜能性的能力与机制研究作一综述。方法:应用计算机检索PubMed数据库中1993-01/2010-03关于干细胞维持多潜能性能力机制的文章,在标题和摘要中以"stemcells,pluripotency,mechanism"为检索词进行检索。选择文章内容与干细胞多潜能性能力维持机制有关者,同一领域文献则选择择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到122篇文献,根据纳入标准选择33篇文献进行综述。结果与结论:干细胞主要通过一些主要的转录因子的表达、表观遗传学的调控和一些microRNAs(miRNAs)的作用来维持其多潜能性和自我更新能力。转录因子调节网络中的主要成员Oct4、Nanog及Sox2和一些表观遗传学修饰如组蛋白和DNA的甲基化以及miRNAs共同作用来抑制那些促进干细胞分化的基因表达和激活那些有助于维持干细胞多能性维持的基因表达,进而形成一个相互调控和依存的网络来维持干细胞的多能性和自我更新。
- 田丽娜缪竞诚
- 关键词：多潜能性自我更新干细胞转录因子表观遗传学
