缪竞诚
- 作品数：197 被引量：513H指数：11
- 供职机构：苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国防科技工业技术基础科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 表达人IL-17F重组腺病毒载体的构建及其表达产物的功能研究被引量：3
- 2013年
- 目的构建表达人白细胞介素IL-17F （hIL-17F）的重组腺病毒载体（Ad-hIL-17F），为进行hIL-17F基因表达抑制血管形成和抑瘤效应的研究奠定基础。方法以pUCm-T/hIL-17F重组质粒为模板PCR扩增hIL-17F，酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV转移质粒上，PmeⅠ线性化重组质粒pAdTrack-CMV-hIL-17F，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌，经同源重组，获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-hIL-17F经PacⅠ线性化后转染QBI-293A细胞，收获Ad-hIL-17F，用RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定人IL-17F基因表达。 MTT法检测hIL-17F基因表达对ECV304细胞的生长抑制作用， ELISA法检测人血管内皮生长因子（ VEGF）和血管生成素（ Ang-1）基因在293A细胞、ECV304细胞中的表达水平；实时定量RT-PCR检测Ad-hIL-17F对293A细胞中人VEGF转录的影响。结果测序显示hIL-17F序列正确，RT-PCR和间接免疫荧光法检测到了IL-17 F基因的表达。 Ad-hIL-17 F能显著抑制ECV304细胞的生长，抑制人VEGF和Ang-1基因在293 A细胞、ECV304细胞中的表达。结论成功构建和获得了hIL-17F的重组腺病毒载体（Ad-hIL-17F）， Ad-hIL-17 F可通过下调VEGF和Ang-1的分泌而抑制血管形成。
- 盛伟华任苏勤谢宇锋缪竞诚刘铁连杨吉成
- 关键词：腺病毒载体
- Ad-Ang-1转基因成纤维细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及其分子机制研究
- 2011年
- 目的研究经腺病毒介导的人血管生成素-1（Ad-Ang-1）转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法将Ad-Ang-1腺病毒病毒子感染再生丝素膜上培养的wI-38人胚肺成纤维细胞，通过ELISA法检测再生丝素膜对成纤维细胞目的基因表达的影响，将Ad—Ang-1转基因WI-38细胞修饰的丝素材料进行鸡胚尿囊膜血管形成实验（CAM）和兔角膜层间植入诱导角膜新生血管试验，并用ELISA法检测其对血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（FGF2）、血小板衍化生长因子（PDGF）表达的影响。结果Ad—Ang-1可感染再生丝素膜上培养的成纤维细胞，ELISA法检测结果表明sF组Ad．Ang．1转基因W1．38细胞可以成功表达目的基因（P〈0．05）。CAM实验表明Ad-Ang-l转基因wI-38细胞修饰的再生丝素膜具有促进CAM血管生成的活性，并通过兔角膜层间植入实验进一步证明Ad-Ang-1转基因细胞修饰的丝素材料具有诱导角膜组织血管生成的作用．其机制可能与再生丝素膜对Ad-Ang-l转基因的WI-38成纤维细胞中不仅可以成功表达目的Ang-1，而且还可使与血管生成和组织损伤修复相关的VEGF、FGF2、PDGF基因表达水平明显提高有关。结论Ad-Ang-I转基因细胞修饰的丝素材料具有诱导血管生成的作用，为今后进一步采用转基因技术对生物材料进行修饰或改性、研制出具诱导性的医用生物膜材料创造了条件。
- 钱丽娟刘铁连张晓峰谢宇锋盛伟华缪竞诚韩亚丽杨吉成
- 关键词：血管生成素腺病毒
- 特异性抗原幽门螺杆菌尿素酶B的体外表达被引量：4
- 2005年
- 目的:建立自患者体内分离的幽门螺杆菌菌株及其抗原尿素酶B(ureB)体外表达的方法。方法:分离培养胃病患者感染的幽门螺杆菌,采用基因体外重组技术分离ureB基因,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Westernblot进行鉴定。结果:测序结果证实克隆的基因与GeneBank中的序列相符,经Westernblot证实获得ureB的重组蛋白。结论:获得了高表达的重组抗原蛋白,为ureB检测及Hp感染的诊断提供了物质基础。
- 白艳艳王兆钺白霞缪竞诚苏健顾冠彬阮长耿
- 关键词：抗原幽门螺杆菌尿素酶B
- 血小板抗体及淋巴细胞亚群检测在特发性血小板减少性紫癜中的诊断意义被引量：3
- 2005年
- 目的比较抗血小板特异性抗体、PAIgG及淋巴细胞亚群在特发性血小板减少性紫癜(ITP)及非免疫性血小板减少症中的水平,以评价其在ITP中的诊断价值。方法用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原法(MAIPA)检测患者血浆中抗血小板膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb和P-选择素)的特异性抗体。利用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中PAIgG及淋巴细胞亚群。结果ITP组MAIPA的阳性率为63.3%,非免疫性血小板减少组为阴性;PAIgG分别为73.3%、45%。淋巴细胞亚群中,ITP组CD3、CD4、CD4/CD8显著高于正常对照组,CD8、CD19则显著低于正常对照组。结论抗血小板特异性自身抗体抗体对提高ITP的诊断有一定的实用价值,淋巴细胞亚群的变化能较好地反映ITP的病理机制。
- 戴兰缪竞诚范磊沈文红韩悦白霞王兆钺阮长耿
- 关键词：血小板抗体淋巴细胞特发性血小板减少性紫癜
- ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究被引量：8
- 2013年
- 目的用人肿瘤生长抑制因子(mING4)及人白介素24(IL-24)基因构建腺病毒双基因共表达载体(Ad-ING4-IL-24),并设Ad-ING4和Ad-IL-24单基因对照,研究双基因共表达载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用.方法首先将已构建成功的Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4及Ad-IL-24腺病毒感染QBI-293A细胞,经多轮扩增后获得高滴度的病毒子,测病毒效价后分别以100 MOI剂量感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING-4及IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法检测ING-4及IL-24基因表达对MG-63细胞的生长抑制效应;半定量RT-PCR法检测ING4及IL-24基因表达对MG-63细胞中的Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34等相关基因表达的影响.结果获得了高滴度的重组腺病毒Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4,Ad-IL-24和Ad-GFP;治疗后MG-63细胞中ING-4及IL-24双基因表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,ING-4及IL-24基因表达可通过上调细胞中Bax,Caspase3,p21和下调Bcl-2,CD34基因表达诱导细胞凋亡.在病毒子剂量为100 MOI时,Ad-ING4-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑制作用比对Ad-ING4和Ad-IL-24抑制效果更为显著.结论腺病毒介导的ING4或/和IL-24基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,且Ad-ING4-IL-24双基因比Ad-ING4和Ad-IL-24单基因的抑制效果更为显著,该现象可能是通过改变Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34基因表达水平来发挥抗肿瘤作用的.
- 王家融韩亚丽缪竞诚盛伟华杨吉成
- 关键词：ING4基因IL-24基因腺病毒载体
- 精神分裂症和免疫系统之间关系的研究概述被引量：3
- 2009年
- 张少丽董继承缪竞诚
- 关键词：精神分裂症免疫系统
- LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血细胞体外培养的影响被引量：5
- 2008年
- 目的观察经LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血干/祖细胞(HSC/HPC)体外培养的影响。方法用脂质体转染法将pcDNA3.0-LIF真核表达质粒导入ECV-304人脐静脉内皮细胞,并通过G418筛选获得能稳定表达LIF的ECV-304转基因细胞。用LIF基因修饰的ECV-304细胞与脐血CD34+细胞共培养,检测培养前后CD54+细胞、CD34+CD54+细胞和CD34+CD62L+细胞数量的变化,观察转LIF基因的ECV-304细胞对脐血造血细胞的影响。结果成功获得经LIF基因修饰的ECV-304转基因细胞,该细胞能支持脐血CD34+细胞的扩增,且能维持细胞表面与归巢有关的黏附分子的表达,培养后CD34+CD54+和CD34+CD62L+细胞亚群数量显著增加。结论经LIF基因修饰的ECV-304细胞可改善脐血造血细胞体外培养的微环境,有助于抑制HSC/HPC的分化并保持其归巢能力。
- 郁心苗莉缪竞诚
- 关键词：黏附分子L选择素CD34^+细胞
- 人腺病毒介导白细胞介素24对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能影响的研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究腺病毒介导白细胞介素24(Ad-hIL-24)基因对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对免疫功能的影响。方法取16只BALB/C小鼠,其中4只未致瘤,12只BALB/C小鼠致瘤后随机分为3组:PBS组、5-氟脲嘧啶(5-Fu)组和Ad-hIL-24组。PBS组和Ad-hIL-24组(1×107pfu)隔日用药,共注射5次;5-Fu组注射5-Fu,20μg/kg,连续注射5d,停药2d后,再连续注射5d。2周后,称质量,眼眶取血,处死后取瘤体、脾脏、胸腺,检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、白细胞总数及淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞数。结果Ad-hIL-24组与5-Fu组的抑瘤率分别为45.08%和52.11%,两者抑瘤效果差异无统计学意义(P>0.05),而与PBS组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与5-Fu组相比,Ad-hIL-24组的胸腺指数、脾脏指数、外周血白细胞总数、淋巴细胞及单核细胞数均增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常未致瘤组比较,Ad-hIL-24组中性粒细胞显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ad-hIL-24可以抑制小鼠H22肝癌的生长,并对机体免疫功能无抑制作用。
- 汪小华缪竞诚盛伟华谢宇锋杨吉成
- 关键词：抑瘤免疫功能
- 3种疗法对人卵巢癌细胞的联合应用实验研究
- 1999年
- 为了观察低剂量率放疗、热疗和顺铂联合应用对人卵巢癌细胞的疗效，对１ 对人卵巢癌细胞系Ａ２７８０Ｓ（ 对辐射和顺铂敏感）和Ａ２７８０ＣＰ（抗辐射和顺铂） ，采用低剂量率（０．８８ｃＧｙ／ｍｉｎ） 放疗、热疗（４０ ℃）和顺铂（０ ．５～３．０ μｇ／ｍｌ）同时处理，观察３者联合应用的效果。结果Ａ２７８０ＣＰ对放疗和对顺铂均有较强的抵抗力，细胞存活率为６ ．０％ （１０ Ｇｙ） 和４５．０ ％（１．０ μｇ／ｍｌ，８ ｈ） ，但对热疗则比Ａ２７８０Ｓ稍敏感。如果３ 种处理方法同时应用，结果显示为很明显的协同作用。这一效果在Ａ２７８０ＣＰ更为明显，Ａ２７８０ＣＰ的存活率为３．８ ％（８ Ｇｙ，４０ ℃，１．０ μｇ／ｍｌ） 。结果显示，热疗、顺铂和低剂量率放疗３ 者联合应用有很好的临床应用前景，值得进一步深入研究。
- 缪竞诚杨吉成RaaphorstGPNgCE
- 关键词：卵巢癌细胞联合疗法卵巢癌
- 人lamda3干扰素(hIFN-λ3)基因克隆及表达被引量：1
- 2005年
- 目的构建表达hIFN-λ3基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。方法用口腔滤泡炎病毒VSV刺激A549人肺腺癌细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得全长cDNA,与pcD-NA3.1/myc—his(-)A真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hIFN-λ3,并在COS-7细胞中进行表达,采用微量细胞病变抑制试验研究表达产物的抗病毒活性。结果经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序确证重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且确为hIFN-λ3,与GeneBank报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。结论该研究成功地克隆出hIFN-λ3基因编码序列,并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了rhIFN-λ3蛋白具有抗病毒活性,为今后干扰素的基因治疗奠定了基础。
- 马丽丽王建红盛伟华谢宇锋缪竞诚杨吉成
- 关键词：RT-PCR基因克隆COS-7细胞
