韩亚丽
- 作品数：17 被引量：39H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家重点基础研究发展计划国防科技工业技术基础科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Ad-VEGF165转基因成纤维细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及其分子机制研究
- 2011年
- 目的研究经腺病毒介导的人血管内皮生长因子165(VEGF165)转基因细胞修饰的再生丝素膜(SF)诱导血管形成活性及其分子机制。方法将WI-38人胚肺成纤维细胞分别培养在有(SFC组)或无(PBS组)再生丝素膜的24孔培养板上,24h后用带绿色荧光蛋白(GFP)基因的空载体腺病毒Ad-GFP(Ad-GFP组/SFCG组)或含有VEGF165目的基因的重组腺病毒Ad-VEGF165(Ad-VEGF165组/SFCV组)感染培养细胞。通过形态学观察和ELISA法检测各组细胞培养上清液中VEGF165目的基因表达及其对细胞自分泌的血管生成素-1(Ang-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、血小板衍化生长因子(PDGF)表达的影响,并用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)和在兔眼角膜上进行新生血管诱导实验。结果形态学观察发现WI-38细胞在再生丝素膜上不仅贴壁生长良好,而且易被Ad-GFP、Ad-VEGF165腺病毒感染,呈现强荧光。再生丝素膜利于Ad-VEGF165组中VEGF165目的基因在细胞中的高表达(P<0.05),而且还可使细胞自分泌的Ang-1表达水平明显升高(P<0.05),同时可维持细胞自分泌的FGF2及PDGF稳定表达。Ad-VEGF165组(SFCV组)具有促进CAM上血管生长活性和诱导兔眼角膜组织新生血管生成作用。结论 Ad-VEGF165感染WI-38成纤维细胞所修饰的再生丝素膜,具有诱导血管新生的功能。
- 钱丽娟刘铁连张晓峰谢宇锋盛伟华缪竞成韩亚丽杨吉成
- 关键词：血管内皮生长因子腺病毒转基因
- Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞生长抑制的体外实验被引量：9
- 2009年
- 旨在研究携带人IL-24基因的腺病毒表达载体(Ad-IL-24)对SGC-7901人胃癌细胞的生长抑制作用并分析其分子机制。以不同MOI(感染复数)的Ad空载体腺病毒感染SGC-7901人胃癌细胞,筛选出最佳感染剂量;Ad-IL-24以最佳感染剂量感染SGC-7901胃癌细胞,RT-PCR法和Western blotting法检测腺病毒介导的IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中的转录;MTT法检测Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡和细胞周期改变的效应,Hoechst33258染色荧光显微镜检测其诱导胃癌细胞凋亡的核形态改变;RT-PCR半定量法进一步检测SGC-7901胃癌细胞中凋亡相关基因的转录。结果显示,100MOI为感染SGC-7901胃癌细胞的腺病毒最佳感染剂量;Ad-IL-24能成功介导IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中转录性表达;Ad-IL-24感染SGC-7901胃癌细胞后,能明显抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡;Ad-IL-24能显著上调SGC-7901胃癌细胞中bax、caspase-3和p53的表达和下调bcl-2的表达。因此,腺病毒介导的IL-24表达具有明显抑制SGC-7901人胃癌细胞生长和诱导凋亡的抗肿瘤效应,其机制可能与上调bax/bcl-2、caspase-3和p53密切相关。
- 包婉蓉缪竞诚盛伟华单云波李正祎汪小华井莹莹韩亚丽杨吉成
- 关键词：腺病毒胃癌肿瘤基因治疗抗肿瘤效应
- 重组载体以及转基因骨髓基质细胞修饰的丝素膜及其应用
- 本发明涉及生物领域，具体公开了重组了VEGF165与Ang-1的pAdTrack-CMV-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-质粒和pAdTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1质粒，其...
- 杨吉成缪竞诚盛伟华韩亚丽刘铁连张晓峰
- 文献传递
- 腺病毒载体介导的ING4基因对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用被引量：9
- 2009年
- 目的:用人源化改造的鼠肿瘤生长抑制因子(mING4)基因构建的腺病毒表达载体(Ad-ING4)研究对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用。方法:以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过基因定点突变技术对mING4基因进行人源化改造,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人ING-4氨基酸序列相同的重组腺病毒子(Ad-ING4),感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING4在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法和流式细胞技术检测ING4基因表达对MG-63细胞的生长抑制和凋亡效应;荧光共聚焦显微镜观察MG-63细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因表达对MG-63细胞中的Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和PCR分析结果显示,人源化改造的小鼠ING4分子氨基酸序列与人ING4分子完全相同,成功构建了Ad-ING4腺病毒表达载体,在MG-63细胞中ING4基因的表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,出现典型细胞凋亡形态学变化,ING4基因表达可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:转染ING4基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡,该现象可能是通过改变Bax,Bcl-2表达水平来发挥抗肿瘤作用的。
- 井莹莹杨吉成缪竞诚盛伟华胡志清单云波刘铁连韩亚丽包婉蓉
- 关键词：ING4基因腺病毒载体凋亡
- 全血细胞减少为主要特征的儿童恶性肿瘤被引量：2
- 2011年
- 全血细胞减少（pancytopenia，PCP）指外周血象中三种有形成分：红细胞系、白细胞系、血小板系同时减少（三系减少）的一种病理情况，PCP不是疾病的诊断，而是某些可引起血液有形成分减少性疾病的共同临床表现，可由造血系统疾病或非造血系统疾病引起。造血系统引起的全血细胞减少常见于再生障碍性贫血（AA）、低增生性白血病、
- 韩亚丽汤静燕
- 关键词：全血细胞减少肿瘤儿童
- Ad-hOSM转基因饲养层细胞对脐血CD34^+造血干/祖细胞增殖及归巢能力的影响
- 2011年
- 目的:建立转人抑瘤素M(hOSM)基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞扩增的影响,比较扩增前、后造血干/祖细胞体外迁移能力的变化。方法:建立转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术(FCM)检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,FCM检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验(Transwell实验)检测自发迁移率和SDF-1诱导迁移率以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力。结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达(96.8±2.28)%,与Ad-hOSM转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可扩增15.73倍,表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,培养后的细胞用Tran-swell板做体外迁移实验,与转基因饲养层细胞共培养的干细胞,其诱导迁移率为(40.68±1.35)%,明显高于对照组,可以较好的保持其归巢能力。结论:转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力。
- 田丽娜郁心包婉蓉陈瑶韩亚丽张凤娟缪竞诚
- 关键词：腺病毒载体
- CD34^+造血干/祖细胞在转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞中的扩增及其移植SCID小鼠的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用,并研究移植辐射损伤模型SCID小鼠的效果。方法:建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果,建立辐射损伤模型SCID小鼠,将扩增后的CD34+造血干/祖细胞经CFDASE荧光标记后移植入SCID小鼠体内,通过RT-PCR和观察荧光标记细胞来检测小鼠内的人源细胞。结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的CD34+造血干/祖细胞纯度可达(95.6±2.58)%,与饲养层细胞共培养后CD34+造血干/祖细胞可扩增13.2倍,表面粘附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,移植入SCID小鼠四周后,仍可见带有荧光标记的人源细胞,RT-PCR证明人源基因Alu的存在。结论:建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且有较高的移植效率和造血活性。
- 井莹莹杨吉成缪竞诚盛伟华胡志清郁心单云波刘铁连韩亚丽包婉蓉张日朱南康
- 关键词：腺病毒载体SCID小鼠
- Ad—hLIF转基因饲养层细胞对CD34^＋造血干／祖细胞增殖和分化的影响
- 2009年
- 目的用腺病毒载体介导的人白血病抑制因子基因（Ad—hLIF）感染WT-38人胚肺成纤维细胞制备饲养层细胞，体外观察转基因细胞对CD34^＋造血干／祖细胞增殖和分化的影响，体内研究对辐射损伤SCID小鼠造血功能恢复的效果。方法用RT—PCR和ELISA法鉴定Ad—hLIF转基因饲养层细胞目的基因的表达后，将经免疫磁珠法分离和流式细胞术检测后的CD34^＋细胞在饲养层和／或细胞因子培养体系中扩增28d，检测不同时问点的单个核细胞（MNC）数量及CD34^＋细胞阳性率；扩增后的MNC经CFDASE荧光标记后移植入辐射损伤SCID小鼠体内，RT—PCR和细胞荧光标记法检测小鼠内含Alu基因人源细胞的归巢情况。结果感染50MOI（multiplicityofinfection）Ad·hLIF的饲养层细胞均有绿色荧光，RT—PCR和ELISA法结果显示hLIF日的基因能在WI-38饲养层细胞中表达，免疫磁珠法分离的CD34^＋造血干／祖细胞经流式细胞术检测其纯度可达95．60％±2．58％，MNC在Ad-hLIF转基因饲养层培养体系持续扩增，最高可达356．95±0．87倍，其中CD34^＋细胞仅在0～14d能维持较高水平，最高可扩增52．11±1．13倍，以后逐渐降低。将其移植辐射损伤SCID小鼠后，可明显提高小鼠存活率，4周内小鼠骨髓中不仪可观察到CFDASE荧光标记的细胞，而凡经RT．PCR法鉴定后，还可检测到表达Alu人源基因的人脐血造血归巢细胞。结论成功建立的Ad—hLIF转基因饲养层细胞不仅体外可以有效地扩增CD34^＋造血干／祖细胞，并延缓其分化。扩增的CD34^＋细胞对辐射损伤SCID小鼠具有造血功能恢复的功能。
- 井莹莹杨吉成盛伟华胡志清郁心单云波刘铁连韩亚丽包婉蓉张日朱南康缪竞诚
- 关键词：腺病毒载体SCID小鼠
- Ad-Ang-1转基因成纤维细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及其分子机制研究
- 2011年
- 目的研究经腺病毒介导的人血管生成素-1（Ad-Ang-1）转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法将Ad-Ang-1腺病毒病毒子感染再生丝素膜上培养的wI-38人胚肺成纤维细胞，通过ELISA法检测再生丝素膜对成纤维细胞目的基因表达的影响，将Ad—Ang-1转基因WI-38细胞修饰的丝素材料进行鸡胚尿囊膜血管形成实验（CAM）和兔角膜层间植入诱导角膜新生血管试验，并用ELISA法检测其对血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（FGF2）、血小板衍化生长因子（PDGF）表达的影响。结果Ad—Ang-1可感染再生丝素膜上培养的成纤维细胞，ELISA法检测结果表明sF组Ad．Ang．1转基因W1．38细胞可以成功表达目的基因（P〈0．05）。CAM实验表明Ad-Ang-l转基因wI-38细胞修饰的再生丝素膜具有促进CAM血管生成的活性，并通过兔角膜层间植入实验进一步证明Ad-Ang-1转基因细胞修饰的丝素材料具有诱导角膜组织血管生成的作用．其机制可能与再生丝素膜对Ad-Ang-l转基因的WI-38成纤维细胞中不仅可以成功表达目的Ang-1，而且还可使与血管生成和组织损伤修复相关的VEGF、FGF2、PDGF基因表达水平明显提高有关。结论Ad-Ang-I转基因细胞修饰的丝素材料具有诱导血管生成的作用，为今后进一步采用转基因技术对生物材料进行修饰或改性、研制出具诱导性的医用生物膜材料创造了条件。
- 钱丽娟刘铁连张晓峰谢宇锋盛伟华缪竞诚韩亚丽杨吉成
- 关键词：血管生成素腺病毒
- ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究被引量：8
- 2013年
- 目的用人肿瘤生长抑制因子(mING4)及人白介素24(IL-24)基因构建腺病毒双基因共表达载体(Ad-ING4-IL-24),并设Ad-ING4和Ad-IL-24单基因对照,研究双基因共表达载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用.方法首先将已构建成功的Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4及Ad-IL-24腺病毒感染QBI-293A细胞,经多轮扩增后获得高滴度的病毒子,测病毒效价后分别以100 MOI剂量感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING-4及IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法检测ING-4及IL-24基因表达对MG-63细胞的生长抑制效应;半定量RT-PCR法检测ING4及IL-24基因表达对MG-63细胞中的Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34等相关基因表达的影响.结果获得了高滴度的重组腺病毒Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4,Ad-IL-24和Ad-GFP;治疗后MG-63细胞中ING-4及IL-24双基因表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,ING-4及IL-24基因表达可通过上调细胞中Bax,Caspase3,p21和下调Bcl-2,CD34基因表达诱导细胞凋亡.在病毒子剂量为100 MOI时,Ad-ING4-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑制作用比对Ad-ING4和Ad-IL-24抑制效果更为显著.结论腺病毒介导的ING4或/和IL-24基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,且Ad-ING4-IL-24双基因比Ad-ING4和Ad-IL-24单基因的抑制效果更为显著,该现象可能是通过改变Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34基因表达水平来发挥抗肿瘤作用的.
- 王家融韩亚丽缪竞诚盛伟华杨吉成
- 关键词：ING4基因IL-24基因腺病毒载体
