丁珍
- 作品数：14 被引量：42H指数：4
- 供职机构：江西农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省高等学校教学改革研究课题江西省教育厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p72重组蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：1
- 2023年
- 为了建立一种快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验利用GenBank中ASFV的p72基因(登录号为MK128995.1)序列构建原核重组表达质粒pGEX-6P-1-p72和真核重组表达质粒pCAGGS-myc-p72,通过大肠杆菌原核表达系统获得p72重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠,获得阳性杂交瘤细胞,通过Western-blot和间接免疫荧光鉴定筛选单克隆细胞株,并用单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定各单克隆抗体的亚型。通过对p72兔源多克隆抗体包被浓度及纯化的3株单克隆抗体稀释度进行优化,初步建立检测ASFV的双抗体夹心ELISA方法,并用该方法测试纯化的3株单克隆抗体分别与p72兔源多克隆抗体两两组合后所能检测的p72重组蛋白的灵敏度。结果表明:p72重组蛋白大小为99 ku;以纯化的原核表达的p72重组蛋白作为抗原免疫3只小鼠,抗体效价均大于1∶10 000;经细胞融合、克隆和筛选共获得5株阳性杂交瘤细胞,将其分泌的单克隆抗体分别命名为2C4C8、2C4B8、5C11F11、5C11D12、7D10C9,5株单克隆抗体与真核表达的p72重组蛋白均可发生特异性反应;单克隆抗体2C4B8和2C4C8的亚型为IgG1,5C11D12和5C11F11的亚型为IgG2b,7D10C9的亚型为IgG2a,轻链亚类均为κ;单克隆抗体2C4C8、5C11D12、7D10C9所能检测的p72重组蛋白最低浓度分别为0.25,0.25,0.05μg/mL。说明以纯化的3株单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可用于检测p72重组蛋白抗原,且该检测方法有较好的灵敏度。
- 谢林梅唐子木钱新杰陈君邓浩东邹前萍朱世锋魏毓卿魏小冬花慧颖丁能水邬向东邬向东丁珍丁珍
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA灵敏度
- 三种猪的肠道腹泻冠状病毒三重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2020年
- 为了同时检测引起猪只腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)这三种主要肠道冠状病毒,试验设计3对特异性引物,建立PEDV、PDCoV和SADS-CoV的三重RT-PCR方法,同时进行特异性、敏感性、重复性试验,并检测临床样品对方法进行验证。结果表明:采用建立的三重RT-PCR方法对PEDV、PDCoV和SADS-CoV进行扩增,分别扩增出大小约为486 bp、329 bp和628 bp的特异性片段;该方法对猪瘟病毒、猪传染性肠胃炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不能扩增出任何片段,特异性好;对PDCoV、PEDV和SADS-CoV的最低检测量分别为1×10^6,1×10^3,1×10^4 copies/μL,具有较好的敏感性;在196份临床样品中,PEDV的阳性检出率为13.27%,PDCoV为12.24%,SADS-CoV为0,同时多重RT-PCR与单项RT-PCR检测方法的符合率均为100%。说明建立的三重RT-PCR方法能够同时特异敏感、高效廉价检测出猪群中PDCoV、PEDV及SADS-CoV这三种肠道冠状病毒,具有快速、便捷和经济的特性,可用于临床大规模流行病学调查和诊断。
- 曾秀秀宋德平张帆帆张帆帆叶昱李凯吴琼叶昱于振兴丁珍陈君吴琼曾秀何后军唐玉新
- 关键词：猪流行性腹泻病毒腹泻
- 核内不均一核糖核蛋白A2B1功能及其在病毒感染中的作用研究进展
- 2023年
- 核内不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)是核不均一核糖核蛋白家族(hnRNPs)成员,在各种组织中广泛表达,具有识别和结合RNA和DNA模体的功能,其在细胞生命活动,如新生转录物的包装、选择性剪接和翻译调控中起重要作用。研究发现,hnRNPA2B1在病毒感染和抗病毒免疫方面扮演重要的角色,具有识别胞内病毒核酸,激发抗病毒免疫通路,调控病毒感染、复制及病毒释放等功能。本文就hnRNPA2B1的结构、功能,尤其是在DNA和RNA病毒感染中所涉及的作用机制作一综述。
- 燕阳金梦星房梦桃蓝建辉叶昱黄冬艳黄冬艳何后军丁珍宋德平
- 关键词：病毒感染抗病毒作用
- 猪源携带β2毒素A型产气荚膜梭菌全基因组序列分析
- 依据产气荚膜梭菌(Clostridium Perfringens,Cp)产生的α、β、ε、ι四种主要致死性的毒素将其分为A、B、C、D、E 5个型。A型Cp(Clostridium Perfringens type A,...
- 张锦华戴益民周姣黄冬艳丁珍何后军
- 关键词：新生仔猪A型产气荚膜梭菌全基因组测序
- 文献传递
- 2016-2017年江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及ORF5基因变异分析被引量：16
- 2018年
- 为了解近年来江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分子流行病学和其遗传变异情况,本次调查于2016-2017年从江西省各地区规模化猪场采集453份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病料,采用RT-PCR方法对所有病料进行检测。结果发现,其中321份病料为PRRSV阳性,阳性率为70.86%,各地区的阳性率在19.15%~84.85%之间。挑选14份阳性样品测序后,经ORF5基因序列分析,江西地区各PRRSV毒株ORF5基因的核苷酸同源性为83%~100%,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性在59.9%~98.5%之间。基于ORF5基因的进化树分析表明,14个测序毒株均为美洲型毒株,其中有4株为基因亚型Ⅰ,即高致病性毒株(HP-PRRSV);3株为基因亚型Ⅱ,即经典毒株;3株为基因亚型Ⅲ,即NADC30-like毒株;4株为新出现的基因亚型Ⅳ。氨基酸序列比对分析表明,基因亚型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ毒株ORF5基因编码的GP5蛋白氨基酸在3个表位及2个重要的抗原相关区域存在较大变异,其中以NADC30毒株为代表的基因亚型Ⅲ毒株和以GD1404毒株为代表的基因亚型Ⅳ毒株均表现出独有的氨基酸变异,这些变异可能会影响GP5蛋白的免疫原性。本次调查结果表明,2016-2017年江西地区PRRSV流行出现了新形势,美洲型毒株出现了多基因亚型共同存在的局面,以高致病性毒株(HP-PRRSV)为主,NADC30-like毒株和新基因亚型等新毒株的比例较高,同时还存在经典毒株;持续实时监测PRRSV的毒株流行和变异情况,可为临床诊断、药物和疫苗开发及PRRS的科学防控提供依据。
- 袁为锋张帆帆李龙显李昊张付华刘小萍叶昱叶昱黄冬艳李凯吴琼黄冬艳唐玉新
- 关键词：ORF
- 表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定
- 2024年
- 【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒pUSG11/P28-B646L,经脂质体介导转染预先感染猪痘病毒的PK15细胞,出现病变后通过绿色荧光标记筛选和纯化重组病毒。拯救的重组病毒经PCR和基因测序鉴定后,通过Western blotting和间接免疫荧光试验检测p72蛋白的表达情况,并测定重组病毒的增殖特性和遗传稳定性。【结果】重组转移质粒pUSG11/P28-B646L在PK15细胞内和SPV成功进行了同源重组,纯化得到的重组病毒含有B646L基因,且基因序列正确。Western blotting和间接免疫荧光试验结果表明,重组病毒rSPV-B646L在PK15细胞中能表达非洲猪瘟病毒p72蛋白,表达的蛋白大小正确,且能与p72单克隆抗体发生特异性反应。一步生长曲线显示,重组病毒与亲本病毒的增殖特性没有明显差异。重组病毒在PK15细胞上连续传15代后,插入的外源基因没有发生突变或缺失。【结论】研究以SPV为载体,成功构建了正确表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,重组病毒在PK15细胞中有良好的遗传稳定性,B646L基因的插入没有影响重组病毒在PK15细胞上的增殖能力,表达的p72蛋白具有反应原性。研究成果为非洲猪瘟多基因重组猪痘病毒载体疫苗的研发提供依据。
- 张梦雨叶昱何后军何后军江宁邓佳丽曾紫怡应若嫣余巧唐玉新宋德平唐玉新樊惠英宋德平
- 关键词：非洲猪瘟病毒
- 猪流行性腹泻病毒感染调控干扰素反应的研究进展被引量：3
- 2020年
- 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种烈性传染的肠道冠状病毒,主要导致仔猪腹泻、脱水、高发病率和高死亡率。全球范围暴发的高致病性PEDV变异毒株给养猪业带来巨大经济损失。PEDV调控宿主天然免疫,对其成功感染宿主和复制增殖具有重要影响。本文主要阐述PEDV感染时,干扰素(Interferon,IFN)在猪肠道细胞发挥的功能,并简单介绍PEDV病毒及其编码的蛋白调控IFN-α/β和IFN-λ的分子机制,从而阐明PEDV是如何逃逸宿主天然免疫反应。
- 丁珍吴琼丘建龙黄冬艳宋德平叶昱唐玉新
- 关键词：肠道天然免疫干扰素免疫逃逸
- 高校《兽医公共卫生学》教学改革与实践被引量：3
- 2018年
- "同一个健康"(One Health)是由美国医学协会、美国兽医协会和疾病预防控制中心在美国兽医协会2007年年会发起的,提倡为保障人类健康进行跨部门、跨学科合作。本文主要对在"同一个健康"大环境下,高校兽医专业教育创新与实践发展概况,探讨我国兽医学专业中与公共的卫生相关课程调整,促进《兽医公共卫生学》教学改革与实践的发展。
- 张锦华黄冬艳樊云燕丁珍戴益民
- 关键词：跨学科兽医公共卫生教学改革与实践
- 非洲猪瘟病毒p72蛋白的原核表达和多克隆抗体制备被引量：4
- 2021年
- 【目的】非洲猪瘟(african swine fever,ASF)是一种以猪急性发病、高死亡率为典型特征的病毒病,其病原非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)在中国的暴发给中国养猪业造成重大损失。p72蛋白是ASFV的主要衣壳蛋白,能够有效诱导机体产生特异性抗体,常被利用于检测试剂盒的备成。【方法】构建了p72全长(pET-28a-ASFV-p72)及1-171aa截短突变体(pET-28a-ASFV-p72-(1-171))原核表达质粒,通过E.coli原核表达系统表达并纯化了p72全长及1-171aa融合蛋白。该2种蛋白经过4次免疫日本大耳白Balb/C兔后,获得效价皆为大于1∶819200的多抗血清。【结果】通过间接免疫荧光实验和Western blot检测2种多抗均能与真核表达的p72蛋白发生特异性反应。【结论】制备的针对p72多克隆抗体为后续诊断试剂盒的研发提供依据。
- 陈金凤乐伟何永吴丽琴贾宝玉邓小淇胡睿铭黄冬艳宋德平邬向东吴琼唐玉新丁珍
- 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达多克隆抗体
- “一个健康”引领《兽医公共卫生学》教学改革新方向被引量：4
- 2019年
- "同一个世界,同一个健康"(One World,One Health)是2007年由美国医学协会、美国兽医协会和美国疾病预防控制中心发起的,提倡跨部门、跨学科合作保障人类健康.文章主要在"一个健康"大环境下,探讨《兽医公共卫生学》教学改革新方向.
- 戴益民黄冬艳丁珍陈瑞光张锦华
- 关键词：跨学科动物医学教学改革与实践
