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表达IBDV VP2蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建及免疫原性分析被引量：5: 2011年; 通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-VP2)。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-VP2),为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。; 许信刚赵红妮陈光达张宽童德文; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2蛋白减毒鼠伤寒沙门菌

PRRSV GP3蛋白和PCV-2Cap蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的小鼠免疫试验被引量：3: 2011年; 为了研制以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病双价基因工程亚单位疫苗,利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3蛋白和猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF3-ORF2,并对该重组病毒进行Western-blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验、血清中和试验以及淋巴细胞增殖试验。结果显示,重组杆状病毒表达了重组GP3蛋白和Cap蛋白;该重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP3蛋白和Cap蛋白,并且重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠产生了抗PRRSV和抗PCV-2的特异性抗体,免疫小鼠血清中抗PRRSV和抗PCV-2的中和抗体效价分别达到1∶9.6和1∶13.6。淋巴细胞增殖试验表明,该重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答。结果表明,表面展示PRRSV GP3蛋白和PCV-2Cap蛋白的重组杆状病毒已构建成功,这为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和PCV-2的共感染奠定了基础。; 许信刚张宽王志昇童德文; 关键词：GP3蛋白 CAP蛋白

日本脑炎病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展被引量：2: 2011年; 日本脑炎病毒(JEV)是虫媒传染性病毒,感染动物后会产生严重的脑炎症状,严重威胁着公共卫生安全。病毒粒子主要通过胞吞作用进入宿主细胞,在细胞浆复制,在细胞内部膜结构上成熟。JEV侵入神经细胞引起脑炎症状,其机理可能与JEV诱导细胞凋亡有关。目前,研究人员就有关JEV诱导细胞凋亡信号转导途径方面做了大量研究工作。在被JEV感染的细胞内会发生一系列蛋白酶激活与抑制反应,继而发生线粒体外膜通透性改变、氧化应激以及内质网应激等诱导细胞发生凋亡。凋亡机制和信号转导通路的研究对JEV的致病机理以及它与宿主之间的相互作用有重要意义。论文对JEV诱导细胞发生细胞周期抑制和凋亡的现象、信号转导通路进行了综述,并对研究方向进行了展望。; 张宽陈光达许信刚童德文; 关键词：日本脑炎病毒细胞凋亡信号转导

牛疱疹病毒Ⅰ型诱导MDBK细胞凋亡的初步研究: 2011年; 【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞活性检测、细胞核形态观察、DNA ladder检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3活性检测等方法,对BHV-Ⅰ感染的MDBK细胞进行凋亡指标检测。【结果】接毒后24h,MDBK细胞即出现明显的细胞病变。活性检测表明,感染BHV-Ⅰ的细胞活性降低,并且呈病毒感染量和感染时间的依赖性。感染细胞出现核固缩,并呈新月形变化。DNA电泳结果和流式细胞术检测结果均表明,感染BHV-Ⅰ的细胞DNA出现规律的片段化,细胞凋亡比例随感染时间延长而增加,细胞内Caspase-3活性逐渐升高。【结论】BHV-Ⅰ能够诱导MDBK细胞凋亡,并且在诱导细胞凋亡过程中有Caspase-3参与。; 张宽许信刚童德文丁丽李兆才李伟; 关键词：细胞凋亡

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张宽