王志昇
- 作品数：33 被引量：77H指数：6
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- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”宁夏回族自治区自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- FcRn介导的抗细粒棘球蚴靶向黏膜疫苗载体的构建方法
- 本发明公开了一种FcRn介导的抗细粒棘球蚴靶向黏膜疫苗载体的构建方法，包括如下步骤：(1)目的基因Eg95的扩增(2)小鼠野生型Fc片段(Fc/wFc)和突变型Fc片段(Fc/mFc)的扩增(3)Eg95-Fc/wFc(...
- 王志昇杨文陈健茂李丽林源邱红燕吴璟马学平
- 文献传递
- 细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析被引量：6
- 2014年
- 目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况。将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性。BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1×1012 cfu/ml,100μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况。另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×1010cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周。分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用细粒棘球蚴Ig G抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的Ig G抗体滴度。于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性。结果经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒p YA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致。重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段。安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4 d后死亡。间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性Ig G抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1∶1 700。小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI值)达到1.94±0
- 王志昇吴璟林源李红兵刘强王志辉郎多勇杨文
- 关键词：细粒棘球蚴EG95减毒沙门氏菌免疫原性
- 披针叶黄华生物碱成分分析被引量：2
- 2014年
- [目的]研究披针叶黄华生物碱的具体种类及含量。[方法]采用生物碱系统提取、硅胶柱层析分离及重结晶技术从披针叶黄华干草粉中分离生物碱,并用GC-MS对总碱和结晶进行测定。[结果]分离出2种生物碱结晶Ⅰ和结晶Ⅱ,总碱中含有7种喹诺里西啶生物碱,结晶Ⅰ为黄华碱,结晶Ⅱ为Tetrahydrodeoxoargentamin。[结论]该试验为进一步研究披针叶黄华动物中毒的毒性毒理提供了理论依据。
- 林源王志昇李勇刘河涛何生虎
- 关键词：生物碱
- 职业压力与胚胎停育的相关性分析被引量：3
- 2016年
- 采用病例一对照研究，选择126例确诊的胚胎停育孕妇为病例组，同期138名正常妊娠的产妇为对照组．进行个人基本情况调查和职业压力测量。采用Epi Data3．1软件进行数据录入，应用SPSS17．0进行统计分析。结果显示。年龄、JCQ量表社会支持中的同事支持和上级支持、ERIQ量表外在付出和职业压力情况，病例组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。多因素非条件Logistic回归分析结果显示，社会支持（0．454，0．188～0．790）和职业压力（1．121．1．010—1．788）可能与胚胎停育有关。
- 邱红燕韩华潘丽华董敬王志昇张莉莉姚涛贵
- 关键词：胚胎停育
- 奶牛隐性乳房炎致病菌的微生物学鉴定被引量：4
- 2007年
- 引起奶牛乳房炎的病原微生物很多,包括细菌、病毒、真菌、霉菌体四大类。葡萄球菌、链球菌占了病原菌的90%～95%。本文就金黄色葡萄球菌(SA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、无乳链球菌(SAG)、犬链球菌(SC)、其它链球菌(OS)、大肠杆菌(CO)、牛棒状杆菌(CB)、其它菌(OTH)的微生物学快速检测方法做了介绍。该方法能够把葡萄球菌、链球菌和其它细菌鉴别开来,并能通过试验判定其具体类型。该方法简便易行,费用较低,实用性强,适合奶牛场推广应用。
- 林源何生虎李生虎王志昇王建东薛忠儒
- 关键词：奶牛隐性乳房炎致病菌
- 传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：6
- 2010年
- 克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。
- 黄春旭许信刚童德文王志昇杜谦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2基因基因克隆原核表达
- 高效液相色谱法测定中药复方健胃分散片中延胡索乙素的含量被引量：1
- 2017年
- 旨在建立测定新型中药复方健胃分散片中主要成分延胡索乙素含量的HPLC方法,利用建立的方法测定并比较中药提取机混提法与单提复配法制备的中药复方健胃分散片中延胡索乙素的含量。采用Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇—磷酸盐(65∶35)缓冲液( 值=6.0)为流动相,等度洗脱,于280 nm波长处进行检测。结果表明,延胡索乙素在0.1~1.0μg/m L范围内线性关系良好,r=0.9989,平均回收率为99.99%,RSD=0.91%;中药提取机混提法与单提复配法制备的中药复方健胃分散片中延胡索乙素平均含量分别为2.430 7 mg/g(RSD=0.57%,n=6)和1.937 5 mg/g(RSD=2.17%,n=6)。建立的HPLC方法灵敏度高,操作简便,结果准确,重复性好,可用于中药复方健胃分散片中延胡索乙素含量测定,并且中药提取机混提法所制备的中药复方分散片中延胡索乙素含量较高,效果较好。
- 杨萌萌王志昇林源何生虎
- 关键词：高效液相色谱法延胡索乙素
- PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达被引量：2
- 2010年
- 【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。
- 邢福珊许信刚童德文王志昇刘文静宁蓬勃张彦明
- 关键词：猪圆环病毒2型陕西分离株ORF2基因原核表达
- 梅花鹿铜缺乏症的诊治
- 2007年
- 2006年10月中旬,宁夏石嘴山某梅花鹿场的不同年龄段的鹿出现以后肢摇摆、瘫痪为特征的疾病,根据流行情况调查、临床症状、病理学检查及微量元素的测定,初步诊断为铜缺乏症,此后,采取相应的防治措施,取得良好治愈效果。
- 王志昇何生虎李生虎林源
- 关键词：铜缺乏症诊治梅花鹿
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状病毒表面的展示被引量：2
- 2010年
- 本试验将猪圆环病毒2型(PCV2)去核定位区ORF2基因克隆到杆状病毒表面展示转座载体pBacSC中,转化DH10Bac大肠杆菌感受态,经抗性及蓝白斑筛选得到含ORF2基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。对重组病毒进行Western-blot分析和免疫金电子显微镜检测。结果表明,PCV2 Cap蛋白在重组杆状病毒中获得表达;免疫金电子显微镜观察表明,重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。本试验成功构建表面展示PCV2 Cap蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用重组杆状病毒作为亚单位疫苗奠定基础。
- 邢福珊许信刚童德文王志昇张彦明
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白
