袁理
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CD133^+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定
- 2012年
- 目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。
- 吴小金陈芳陆滟霞杨慧彭璠莉袁理刘国炳李学农
- 关键词：人脐血造血祖细胞干性
- HPV基因的进化分析被引量：2
- 2012年
- 目的:HPV有许多类型,其大致可分为高危型和低危型,高危型HPV感染是导致宫颈癌发生的首要原因,在HPV基因组中,E6基因是促进宫颈细胞癌变的关键基因,本文主要研究HPV中的E6基因在各种不同型别的HPV中的进化关系,并对E2基因碱基替换率进行分析,探讨高危型HPV与低危型HPV的区别。方法:本文对不同类型HPV E6氨基酸序列构建系统发生树,探讨识别高危型HPV可能的一致序列,对E6基因其中一处能导致恶性程度增加的突变进行分析。并对HPV16与其位于同一颗树的HPV35和HPV31计算相对碱基替换率。结果:高危型HPV均源自同一株病毒株的进化。各种HPV型别中,高危型HPV E6蛋白对应于HPV16 E6蛋白的第83位氨基酸为缬氨酸更为保守,HPV中除E2以外的其他基因的非同义替换率均小于同义替换率。结论:HPV E6蛋白对应于HPV16 E6蛋白的第83位氨基酸为缬氨酸能更好地实现HPV E6蛋白的致癌作用。HPV基因中除E2以外的基因在进化过程中都较为保守,是HPV增殖生长的关键基因,而E2部分区域非同义替换率大于同义替换率,说明E2这部分区域的突变能够更好的促进HPV的增殖和生长。
- 齐鲁袁理吴萍冶亚平丁彦青
- 关键词：HPVE6系统发生树宫颈癌
- 人microRNA-339慢病毒载体的构建及其对结肠癌细胞SW620迁移的影响
- 2014年
- 目的构建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒载体,并探讨miR-339-5p/3p对结肠癌细胞SW620迁移能力的影响。方法由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-339前体序列(pre-miR-339)及其侧翼序列,将pre-miR-339和PLVTHM载体经双酶切后连接,产生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,并经测序鉴定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三质粒包装系统共同转染293FT细胞,包装产生慢病毒。流式细胞仪筛选建立稳定过表达premiR-339的SW620细胞株,实时荧光定量RT-PCR检测miR-339-5p及miR-339-3p表达。利用细胞划痕实验进行细胞迁移能力检测。结果成功构建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,测序证实所插入基因序列完全正确。倒置荧光显微镜下观察可见转染后的293FT细胞及SW620细胞均表达绿色荧光。在过表达pre-miR-339的SW620亚细胞系中,miR-339-5p及miR-339-3p表达水平显著高于空载对照组。划痕实验结果显示:与SW620/PLVTHM-NC组相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339组细胞迁移减缓,划痕较宽。结论成功构建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体和稳定过表达miR-339-5p及miR-339-3p的SW620亚细胞系,并证实miR-339-5p/3p可抑制结肠癌细胞SW620的迁移能力。
- 周畅陈芳陆艳霞袁理李学农
- 关键词：结肠癌慢病毒载体细胞迁移
- IFN-γ调控的IRF1/miR-29b正反馈通过IGF1抑制结直肠癌细胞生长和转移
- 目的： 本课题旨在揭示miR-29b在结直肠癌中的表达调控机制，为临床抗结直肠癌侵袭、转移提供新的miRNA和基因靶点。 方法： 1.IFN-γ靶向及结直肠癌相关的miR-29b表达分析 根据生物信息学和文献筛选...
- 袁理
- 关键词：结直肠癌细胞生长细胞转移Γ-干扰素胰岛素样生长因子1
- Sox2下游调控蛋白的筛选及其对大肠癌细胞增殖、迁移的影响被引量：4
- 2014年
- 目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR(QPCR)及Western blotting验证和鉴定下游调控蛋白。Cell Counting Kit-8(CCK8)观察Sox2对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell实验观察Sox2对迁移能力的影响。结果应用蛋白组学技术成功筛选出Sox2下调蛋白S3a、上调蛋白ENO1、Gama-actin。QPCR和Western blotting显示,Sox2过表达后,大肠癌细胞S3a表达减少(P<0.005),ENO1表达增加(P<0.05),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力提高(P<0.05);Sox2干扰后,大肠癌细胞S3a表达增加(P<0.05),ENO1表达减少(P<0.001),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力下降(P<0.05)。结论 Sox2负向调控S3a的表达,正向调控ENO1的表达,促进大肠癌细胞增殖及迁移。
- 周敏陆滟霞袁理郑林刘燕洪敏张超李学农
- 关键词：大肠癌细胞质谱分析SOX2增殖迁移
- 大肠癌转移相关分子标签的筛选被引量：5
- 2012年
- 目的:筛选与转移相关的大肠癌分子标签。方法:本文通过对大肠癌表达谱数据进行分析,按照表达谱中大肠癌转移情况,组织学分化程度以及患者生存时间进行显著性分析,将与大肠癌转移相关的具有显著性意义的基因群进行聚类,通过主成分分析以及自组织映射的方法计算出差异表达基因中,起着主体分类作用的基因群。结果:筛选出与肿瘤组织分化程度以及患者生存时间相关的差异表达基因,进行功能富集,并筛选出了一批与大肠癌转移密切相关的重要基因,这些基因对大肠癌早期诊断,及时治疗,预后评估有着重要意义。结论:细胞代谢,趋化因子信号通路和细胞因子受体等分子事件与大肠癌分化程度密切相关,是否发生转移与大肠癌的预后生存期密切相关。
- 齐鲁袁理吴萍冶亚平丁彦青
- 关键词：大肠癌
- Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用被引量：6
- 2013年
- 目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVYHM载体,将PLVTHM-miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病毒感染的SW620细胞;CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot检测靶基因YY1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比,12例癌组织中miR-186的平均表达量为0.0024±0.0027-显著低于癌旁组织的0-066±0.068,P=0.008;miR-186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001,与在低转移潜能HT-29细胞中表达量1.000±0.00,差异具有统计学意义P<0.05;质粒双酶切及测序鉴定PLVTHM-hsa-miRl86重组质粒构建成功;荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P<0.05。稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降。结论 hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620、L0VO中低表达,具有类似抑癌基因的作用;成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。
- 陈芳周畅陆艳霞袁理彭皤莉郑林李学农
- 关键词：结肠癌细胞HSAMIR慢病毒增殖迁移
- PRL-1基因3’UTR荧光素酶报告基因载体及突变体的构建被引量：1
- 2014年
- 目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion,3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-339-5p在结肠癌中调控其靶基因PRL-1提供有效的工具。方法 PCR扩增包含PRL-1的3’UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2,构建psiCHECK-2/PRL-13’UTR载体;经双酶切及测序鉴定后,对psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR重组质粒"种子区"的7个碱基进行定点突变,构建psiCHECK-2/PRL-1 3'UTR突变载体。结果克隆获得的psiCHECK-2/PRL-1 3'UTR载体中DNA片段大小及序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确。"种子区"的7个碱基定点突变成功。结论成功构建了含PRL-1基因3'UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,可用于后续功能研究。
- 周畅周畅陆艳霞陈芳李学农
- 关键词：定点突变
- Has-mir-335慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3'UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3'UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。
- 杨慧张超陆滟霞吴小金袁理周畅周春平刘国炳李学农
- 关键词：慢病毒结直肠癌细胞
