陆滟霞
- 作品数：10 被引量：20H指数：4
- 供职机构：南方医科大学基础医学院病理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- CD133^+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定
- 2012年
- 目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。
- 吴小金陈芳陆滟霞杨慧彭璠莉袁理刘国炳李学农
- 关键词：人脐血造血祖细胞干性
- Sox2下游调控蛋白的筛选及其对大肠癌细胞增殖、迁移的影响被引量：4
- 2014年
- 目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR(QPCR)及Western blotting验证和鉴定下游调控蛋白。Cell Counting Kit-8(CCK8)观察Sox2对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell实验观察Sox2对迁移能力的影响。结果应用蛋白组学技术成功筛选出Sox2下调蛋白S3a、上调蛋白ENO1、Gama-actin。QPCR和Western blotting显示,Sox2过表达后,大肠癌细胞S3a表达减少(P<0.005),ENO1表达增加(P<0.05),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力提高(P<0.05);Sox2干扰后,大肠癌细胞S3a表达增加(P<0.05),ENO1表达减少(P<0.001),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力下降(P<0.05)。结论 Sox2负向调控S3a的表达,正向调控ENO1的表达,促进大肠癌细胞增殖及迁移。
- 周敏陆滟霞袁理郑林刘燕洪敏张超李学农
- 关键词：大肠癌细胞质谱分析SOX2增殖迁移
- 靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行。
- 田平阁周春平张超杨慧吴小金陆滟霞刘国炳李学农
- 关键词：CD133噬菌体展示肽库
- miR-101对结直肠癌细胞SW620生物学特性的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果 CCK8比色法结果显示SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性(F=4152,P<0.001),细胞增殖能力组间有显著性差异(F=10220,P<0.001)。平板克隆实验的结果为SW620空白对照组、GV209-SW620对照组和mir101-SW620组的克隆形成率分别为:44.33%、48.17%、35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义(F=73.015,P<0.001)。细胞周期分析发现SW620各组细胞间其G1、S、G2/M期存在着统计学差异(F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000)。除了SW620和GV209-SW620的G2期分布无统计学差异外(P=0.441),其余各组G1、G2/M期均有统计学差异(P<0.01);与SW620和GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率差异有统计学意义(F=6115,P<0.001),各组进行两两比较,均有统计学差异(P<0.01)。与SW620空白细胞组、GV209-SW620对照组相比,mi R-101过表达组细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论 mi R-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/M期周期阻滞及促进细胞凋亡。
- 刘燕陆滟霞周敏郑林李学农
- 关键词：结直肠癌SW620凋亡细胞周期生物学特性
- IgG4相关性脑膜病变被引量：1
- 2016年
- 目的探讨Ig G4相关性脑膜病变的临床病理学特征以及诊断与鉴别诊断要点。方法与结果男性患者,49岁,临床表现为头痛近2年并进行性加重1月余,头部MRI显示左侧顶叶占位性病变,增强扫描可见"脑膜尾征",手术完整切除病灶。组织学形态,左侧顶叶硬脑膜和脑实质大量胶原纤维增生,其间散在灶状细胞浸润,多为较成熟的浆细胞,部分浆细胞内可见匀质红染的Russell小体,其间散在淋巴细胞和少量嗜酸性粒细胞,局部可见小灶状坏死,间质纤维母细胞和小血管增生,未见包膜,病变累及周围脑组织。免疫组织化学染色,浆细胞胞质弥漫性表达Ig G和Ig G4(>60%)、胞膜表达CD38和CD138,淋巴细胞胞膜表达CD3、CD4或CD20。血清Ig G4为1.05 g/L。最终病理诊断为(左侧顶叶)Ig G4相关性脑膜病变可能性大。术后予抗感染、抗癫、营养支持治疗,症状明显好转,出院后未按医嘱定期随访。结论 Ig G4相关性脑膜病变临床少见,且缺乏典型临床表现和特征性影像学改变,术前诊断与鉴别诊断困难,血清Ig G4水平升高是其诊断的重要线索,明确诊断仍需依靠特征性的组织学形态和免疫组织化学表型。
- 陆滟霞黎相照韩慧霞
- 关键词：免疫球蛋白G脑膜病理学免疫组织化学
- 改良的降落PCR和重叠延伸PCR法构建靶向肿瘤干细胞的腺病毒穿梭质粒和骨架质粒
- 目的优化PCR程序,应用降落PCR(TouchdownPCR,TD-PCR)和重叠延伸PCR(overlapextension PCR)法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒的穿梭质粒pNEB-F5X...
- 张超李学农田平阁陆滟霞
- 文献传递
- MiR--200c--Sox2负反馈机制调节结直肠癌干性、生长和转移
- 研究背景和目的 和干细胞一样,肿瘤细胞也具有无限增殖和自我更新能力。肿瘤组织中存在一小部分细胞,表达干细胞标记物并具有干细胞样特性（stem-cell-like ability），可以维持肿瘤的生长、转移和复发。最...
- 陆滟霞
- 关键词：MIR-200CSOX2结直肠癌干性
- Has-mir-335慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3'UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3'UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。
- 杨慧张超陆滟霞吴小金袁理周畅周春平刘国炳李学农
- 关键词：慢病毒结直肠癌细胞
- 稳定过表达mir-101结直肠癌细胞株的建立及其靶基因的鉴定被引量：5
- 2014年
- 目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞,建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的RAC1 3'UTR基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-Rac1-Mut;并用双萤光素酶报告实验检测RAC1 3'UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中,mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3'UTR相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101,RAC1表达下调;而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。RAC1是mir-101的靶基因。
- 刘燕陆滟霞周敏张超李学农
- 关键词：慢病毒RAC1
- 抑制miR-101表达对结直肠癌SW480细胞增殖、周期及凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的观察抑制miR-101表达对结直肠癌细胞SW480增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法取SW480细胞分为A、B、C组,A组转染miR-101抑制物,抑制miR-101表达,B组转染无义序列miRNA,C组为不做任何处理的空白组。转染48 h时观察各组细胞增殖、周期及凋亡情况。结果随时间增加,各组细胞细胞增殖的OD值均升高(P均<0.05);培养第2、3、4、5天A组细胞增殖的OD值均高于B、C组(P均<0.05)。转染48 h时A组S期细胞所占比例明显高于B、C组,G1与G2/M期细胞所占比例明显低于B、C组(P均<0.05)。A、B、C组细胞凋亡率分别为3.29%±0.09%、4.57%±0.21%、2.00%±0.11%(F=230.762;P<0.05)。结论抑制miR-101表达可促进SW480细胞增殖、阻滞细胞周期于S期、抑制细胞凋亡。干扰miR-101后能够促进结直肠癌细胞SW480的增殖,细胞S期周期阻滞及抑制细胞凋亡。
- 刘燕陆滟霞周敏郑林李学农
- 关键词：微小RNA结肠肿瘤直肠肿瘤细胞增殖细胞周期
