张英姿
- 作品数：33 被引量：66H指数：5
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院重点实验室基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- L-苏氨酸转运蛋白ThrG及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种L‑苏氨酸转运蛋白ThrG及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，命名为ThrG蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基...
- 丁久元张英姿王宇赵智
- 文献传递
- 谷氨酸棒杆菌10147基因组中启动子活性片段的克隆与分析被引量：8
- 2009年
- 【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告基因编码的氯霉素乙酰转移酶(CAT)的比活力,以筛选有启动子功能的片段。【结果】共克隆到30个具有启动子功能的片段。其中有3个插入片段启动的氯霉素乙酰转移酶比活力大于24 U/mg,插入片段F57启动的CAT比活力为32.50 U/mg;而插入有启动子Ptrc的阳性对照的CAT比活力为26.33 U/mg。【结论】获得3个DNA插入片段具有与已知启动子Ptrc相当的启动活性,这些片段可以用于构建谷氨酸棒杆菌表达载体。
- 刘桂明赵智张英姿王宇丁久元
- 关键词：谷氨酸棒杆菌启动子
- 钝齿棒杆菌天冬氨酸激酶基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2002年
- 运用PCR方法 ,从野生型钝齿棒杆菌株 (Corynebacteriumcrenatum)AS1 5 4 2及具有AEC抗性的突变株CD945染色体上分别扩增出天冬氨酸激酶 (AK)基因 (ask) ,构建了重组质粒。核苷酸序列分析表明 ,C .crenatumAS1 5 4 2AK基因与C .crenatumCD945相比 ,第 1 1 99位的碱基由T变为C ,引起酶蛋白β亚基第 80位氨基酸从亮氨酸变成脯氨酸。该氨基酸的突变在蛋白结构上位于ACT结构域内 ,该区受赖氨酸调控。C .crenatumAS1 5 4 2的AK基因的编码区核苷酸序列与C .glutamicum、C .flavum及B .lactofermentum相比 ,同源性分别为 97 2 3 %、97 5 5 %和 97 6 2 % ,酶蛋白氨基酸序列的同源性分别为 99 76 %、99 5 2 %和 99 76 %。但在AK基因的启动子上游序列部分与其它棒杆菌相比有较大差异。
- 刘阳剑张英姿王绛王宇余志华丁久元
- 关键词：钝齿棒杆菌克隆赖氨酸
- 源自谷氨酸棒杆菌的启动子及其应用
- 本发明公开了一种启动子，其核苷酸序列是如下1)或2)或3)：1)序列表中序列1所示的核苷酸序列；2)在高严谨条件下与所述1)的核苷酸序列杂交且具有启动子活性的核苷酸序列；3)与所述1)的核苷酸序列具有70％以上的同源性且...
- 丁久元刘桂明李开赵智王宇张英姿
- 文献传递
- 北京棒杆菌转酮酶:基因克隆、序列分析与表达被引量：3
- 2010年
- 【目的】转酮酶是非氧化磷酸戊糖途径中的关键酶。从北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense PD-67)中克隆转酮酶(transketolase,EC2.2.1.1,TK)基因,并将转酮酶基因在C.pekinense PD-67中进行表达,研究增加转酮酶活性对C.pekinense PD-67生理特性的影响。【方法】分别以C.pekinense野生株AS1.299和突变株PD-67的基因组为模板,用PCR方法扩增tkt的全基因序列和前端控制序列;通过pAK6载体提高tkt基因在C.pekinense PD-67中的拷贝数,从而提高C.pekinense PD-67中转酮酶的活性。【结果】tkt基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与结构分析结果表明,C.pekinense突变株PD-67与野生株AS1.299相比较,二者调控序列及结构基因核苷酸序列完全一致。与谷氨酸棒杆菌ATCC13032相比较,突变株PD-67的氨基酸序列有5个氨基酸差异,其中4个位于与辅因子硫胺素焦磷酸结合的结构域内。突变株PD-67来源的tkt基因在北京棒杆菌PD-67中得到了表达,重组菌转酮酶比活力比对照菌株提高了2倍。C.pekinense PD-67(pTK3)与对照菌株PD-67(pAK6)相比,生长加快,L-色氨酸的最终积累量也较高。【结论】本工作从C.pekinense1.299和PD-67中克隆到tkt基因,并实现tkt基因的同源表达。适当提高菌株转酮酶活力,有助于菌体生长和色氨酸积累。
- 季维克赵智张英姿王宇丁久元
- 关键词：北京棒杆菌L-色氨酸
- 真养产碱杆菌112R<,4>的二羧酸单酰胺水解酶及其基因克隆与表达研究
- 在一株具有环酰亚胺转化活性的微生物--真养产碱杆菌112R<,4>中发现了一种特异性的二羧酸单酰胺酰胺水解酶（半酰胺酶）,它催化环酰亚胺代谢的第二步反应,将二羧酸单酰胺水解为二羧酸和氨.重组质粒pHWY304带有与环酰亚...
- 张英姿
- 关键词：真养产碱杆菌
- 文献传递
- 一种来源于谷氨酸棒杆菌的启动子及其应用
- 本发明公开了一种启动子，其核苷酸序列是如下1)或2)或3)：1)序列表中序列1所示的核苷酸序列；2)在高严谨条件下与所述1)的核苷酸序列杂交且具有启动子活性的核苷酸序列；3)与所述1)的核苷酸序列具有70％以上的同源性且...
- 丁久元刘桂明李开赵智王宇张英姿
- 文献传递
- 生产聚羟基丁酸-戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用
- 本发明公开了生产聚羟基丁酸－戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明的基因工程菌是真氧罗氏菌的基因缺失株或将甲基丙二酸单酰辅酶A变位酶的编码基因yliK、GTP激酶的编码基因argK和甲基丙二酸单酰辅酶A脱羧酶的编码...
- 丁久元张英姿刘桂明翁维琦刘双江
- 重组菌Ralstonia eutropha W50-EAB D-木糖代谢相关的限速靶点
- 2015年
- 【目的】通过代谢工程改造真养罗氏菌(Ralstonia eutropha)W50-EAB木糖代谢的相关限速靶点,进一步提高R.eutropha W50-EAB的D-木糖利用效率,为获得高效利用纤维素水解液的菌株奠定基础。【方法】利用PCR技术扩增R.eutropha转酮酶基因tkt A,cbb T2和转醛酶基因tal,将扩增的tkt A,cbb T2和tal基因分别构建到表达载体p BBR1MCS-3上,获得重组质粒p WL1-TKT,p WL1-CBBT2,p WL1-TAL。通过电转的方式将质粒分别转化W50-EAB获得重组菌W50-KAB,W50-CAB和W50-TAB。利用基因敲除的方法,获得醛还原酶基因h16_A3186敲除株W50'-EAB。通过电转的方式将重组质粒p WL1-TAL导入敲除株W50'-EAB获得重组菌株W50'-TAB。通过摇瓶发酵研究重组菌株W50-KAB,W50-CAB,W50-TAB,W50'-EAB以及W50'-TAB的发酵特性。【结果】酶活分析结果表明,转酮酶和转醛酶基因实现表达。摇瓶发酵结果表明,转酮酶基因过表达菌株W50-KAB和W50-CAB相比于对照菌株W50-EAB/p3,表现出降低的木糖利用能力;而转醛酶基因过表达重组菌株W50-TAB以及敲除菌株W50'-EAB对木糖的利用得到一定的提高。在0.1 mol/L木糖的发酵培养基中,W50-EAB的最大比生长速率为0.035 h-1,PHB干重比为16.2±1.01%;而W50-TAB的最大比生长速率提高到0.039 h-1,PHB干重比达到20.5±0.76%;醛还原酶基因敲除菌株W50'-EAB最大比生长速率提高到0.040 h-1,PHB含量提高到19.8±1.05%。结果显示转醛酶基因的过表达与醛还原酶基因的敲除对木糖利用均表现出一定的优势,将这两种优势组合获得菌株W50'-TAB,摇瓶发酵分析结果为最大比生长速率达到0.042 h-1,PHB积累达到27.9±0.47%,相比于对照菌株提高了72.2%。另外,在含有葡萄糖(0.01 mol/L)和木糖(0.09 mol/L)的混合糖培养下,重组菌株W50-TAB,W50'-EAB和W50'-TAB相比于在纯木糖培养下都表现出更高的生物量和胞内PHB积累量。【结论】磷酸戊糖途径关键酶转醛酶基因的过表达加速了木糖代谢流,从而
- 王露刘桂明张英姿王宇丁久元翁维琦
- 生产聚羟基丁酸－戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用
- 本发明公开了生产聚羟基丁酸－戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明的基因工程菌是真氧罗氏菌的基因缺失株或将甲基丙二酸单酰辅酶A变位酶的编码基因yliK、GTP激酶的编码基因argK和甲基丙二酸单酰辅酶A脱羧酶的编码...
- 丁久元张英姿刘桂明翁维琦刘双江
- 文献传递
