时兰英
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程
- 2015年
- 目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用。方法:通过显微手术制备摘除卵母细胞后的卵丘细胞复合体(OOX),并通过与卵母细胞共培养或GDF9和BMP15处理研究卵母细胞及其特异释放的旁分泌因子对表皮生长因子(EGF)诱导卵丘扩展过程的调控。结果 :成功构建了ICR小鼠OOX培养模型,发现卵母细胞及其释放的旁分泌因子GDF9和BMP15为EGF诱导卵丘扩展所必需。结论:ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程。
- 杨光平张心悦时兰英苏友强
- 关键词：卵母细胞排卵ICR小鼠女性生殖
- 一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用
- 一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用，设计高效的识别特定基因组PAM区域的sgRNA序列；并在sgRNA序列基础上设计Donor DNA；将Donor DNA，sgRNA和Cas9...
- 苏友强曹广义李明哲王昊时兰英
- 一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用
- 一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用，设计高效的识别特定基因组PAM区域的sgRNA序列；并在sgRNA序列基础上设计Donor DNA；将Donor DNA，sgRNA和Cas9...
- 苏友强曹广义李明哲王昊时兰英
- 文献传递
- Marf1基因的克隆及其在真核细胞中的表达
- 2017年
- 目的:克隆小鼠的Marf1基因并使其在真核细胞HEK293T中异位表达,以研究MARF1蛋白在细胞中的表达和定位。方法:运用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增并获得Marf1基因编码序列,再利用新型分子克隆体系In-Fusion将该目的片段克隆至pCMV6-AC-3DDK和pCMV6-AN-m Kate两个真核表达载体中,由此所得融合质粒经限制性内切酶酶切电泳和测序筛选鉴定,将所得到的阳性质粒转染到HEK293T细胞中进行表达,然后利用DDK和m Kate标签抗体通过Western blot或免疫荧光的方法检测目的蛋白MARF1的表达和定位。结果:DNA测序鉴定证明Marf1基因克隆成功;Western blot检测到MARF1-3DDK和MARF1-m Kate融合蛋白在转染的HEK293T细胞内的表达;免疫荧光显示融合蛋白在转染后的HEK293T细胞质呈颗粒状分布,并与纺锤体共定位。结论:成功克隆了小鼠Marf1基因并实现了其在真核细胞HEK293T中的稳定表达,为进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。
- 张小云曹广义殷虹时兰英苏友强
- 小鼠Gtf2h2基因的克隆及其在真核细胞中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的:克隆小鼠Gtf2h2基因并使其在真核细胞HEK293中稳定表达。方法 :采用小鼠卵母细胞c DNA为模板,经PCR扩增Gtf2h2后,利用新型In-Fusion分子克隆体系将该目的片段克隆至真核表达载体p CMV6-AC-3DDK和p CMV6-ANm Kate中。所得阳性克隆的质粒DNA在经限制性酶切电泳和测序鉴定克隆成功后,转染到HEK293细胞中进行表达。表达效果利用抗DDK和m Kate标签的抗体通过免疫荧光以Western blot的方法进行检测。结果:质粒DNA测序和酶切鉴定证明Gtf2h2基因克隆成功;Western blot检测到GTF2H2-3DDK和GTF2H2-m Kate融合蛋白在转染后的HEK293细胞内的表达;免疫荧光显示融合蛋白在转染后的HEK293细胞核内定位并呈颗粒状分布。结论:成功克隆了小鼠Gtf2h2基因并实现了其在真核细胞HEK293中的稳定表达,为进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。
- 张心悦杨光平时兰英苏友强
- 关键词：转录因子HEK293
- mTOR通路抑制剂对卵丘扩展与体外受精的影响
- 2016年
- 目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路抑制剂对卵丘及卵母细胞发育潜能的影响。方法收集小鼠较大有腔卵泡中卵丘-卵母细胞复合体(cumulusoocyte complexes,COCs)作为体外培养的研究对象,在培养液中加入不同浓度的mTOR通路抑制剂(雷帕霉素、Torin1),分析mTOR通路抑制剂对卵丘及卵母细胞发育潜能的影响。结果雷帕霉素、Torin1可以有效抑制COCs中mTOR信号通路,Torin1有明显影响卵丘细胞扩展的作用,使卵母细胞受精及着床前胚胎发育潜能下降。结论 mTOR信号通路抑制剂有明显降低卵母细胞质量的效应,是维持COCs活性及促进卵丘和卵母细胞的发育潜能所必需。
- 公绪红时兰英苏友强
- 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白雷帕霉素卵丘细胞
