王光裕
- 作品数：22 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 基因治疗制品质量控制通用技术要求考虑要点
- 2022年
- 本文旨在为基因治疗产品研发者开展制品研发和生产等活动提供必要质量控制原则,适用于以病毒为载体的基因治疗制品,也适用于溶瘤病毒类制品。本文通过借鉴类似制品成熟的、有效的、实用性被证明的策略和方法阐述基因治疗制品质量控制生物通用技术要求,希望对整个行业的发展提供帮助。基因治疗制品制造和质量控制应依照风险评估、全过程控制和全生命周期管理理念,以保障制品质量为最终目的,并通过对各个制造环节的控制实现制品的低安全风险的稳定生产。
- 史新昌秦玺于雷王光裕陶磊李响裴德宁李永红周勇
- 关键词：病毒载体
- qPCR在重组腺相关病毒产品大片段宿主细胞残留DNA检测中的应用
- 2024年
- 目的考察qPCR法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)基因治疗产品中大片段宿主细胞残留DNA(host cell residual DNA,HCD)的可行性。方法提取4种不同血清型rAAV核酸,采用qPCR法对宿主HEK293细胞基因组长末端重复序列(long terminal repeat sequence,LTR)中244和562 bp两个片段序列进行特异性定量,计算HCD在基因组中的占比。结果可在qPCR法定量限范围内检出4种不同血清型rAAV样品大片段HCD,占比为0.3%~5.4%,且随着检测片段长度增加,占比呈降低趋势。结论qPCR技术可用于rAAV产品中大片段HCD的检测。
- 王光裕史新昌杨靖清李响于雷周勇
- 关键词：荧光定量PCR
- TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究
- 本研究以结构复杂的重组人肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白为材料，依照FDA生物类似药指南进行可比性研究。实验选取原研药(RBP)及国内3个类似药或衍生物(SBP)作为实验材料，首先在蛋白一级结构、二级结构、唾液酸修饰、蛋白纯...
- 王光裕高凯王军志
- 关键词：融合蛋白
- 文献传递
- 首批HEK293细胞DNA含量测定国家标准品的制备
- 2024年
- 目的制备HEK293细胞DNA含量测定用国家标准品,以期为行业内HEK293细胞残余DNA的测定提供支持。方法使用Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备HEK293细胞DNA,以其为标准物质原料,采用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度和含量筛选,随后稀释至浓度约为100 ng/μL后,按160μL/支进行分装。组织5家不同实验室,采用紫外分光光度法进行协作标定,并评价其稳定性和适用性。结果制备的HEK293细胞DNA国家标准品经检测,A260/A280均在1.8~2.0之间,电泳图谱为单一条带,符合规定。该标准品经5家实验室协作标定,共得到78个有效数据,平均含量为104.8 ng/μL,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.2%,均数的95%可信区间为103.8~105.8 ng/μL,单次测定的95%参考值范围为96.0~113.6 ng/μL,平均可信限率为1.0%,推荐保存条件为-80℃。采用2个不同型号的荧光定量PCR仪进行适用性研究,该标准品在0.3~3000 pg/反应范围内适用性良好,扩增效率分别为101%和95%,标准曲线R^(2)分别为0.9992和0.9995。结论该批HEK293细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于荧光定量PCR检测,含量定为104.8 ng/μL,批号为270039-202301。
- 王光裕杨靖清魏长龙周泽鑫杨志行黄钰周勇
- 关键词：HEK293细胞国家标准品荧光定量PCR
- 以TNF-α为靶点的大分子拮抗药物及其质控方法研究进展
- 类风湿关节炎、克罗恩病、强直脊髓炎等自身免疫病危害着全球上亿人民的生活,这些疾病的主要病因都是TNF-α的异常升高,本文主要阐述了以TNF-α为靶点的几种生物治疗药物的基本结构和治疗疾病的药学作用机制,并对该类药物进行质...
- 王光裕高凯王军志
- 关键词：肿瘤坏死因子融合蛋白糖基化
- 文献传递
- TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究
- 近年来,许多生物技术药专利陆续到期,国内外掀起了生物类似药物的研发热潮,如何对这些 生物类似药进行有效的质量可比性研究显得尤为重要.相对于小分子药物,抗体及相关生物治疗药物分子 量大,功能域多,如何界定类似药和参比药的一...
- 王光裕高凯王军志
- 关键词：抗体药物融合蛋白糖基化
- 重组腺相关病毒中游离与错误包装宿主细胞DNA检测的两种前处理方法的比较
- 2024年
- 目的采用DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量,并进行比较。方法分别采用DNase处理法和填料亲和法分离游离与错误包装HCDNA,再进行核酸提取及qPCR检测。比较两种前处理方法检测HCDNA残留量的准确度和重复性。结果采用DNase处理的方式,DNase未处理组核酸定量检测结果为HCDNA总残留量,DNase处理组为错误包装HCDNA量,二者差值为游离HCDNA残留量。DNase未处理和处理组回收率均为75%以上,重复性RSD小于30%。采用亲和提取方式,填料偶联亲和配基,结合rAAV,检测错误包装HCDNA回收率为75%以上,检测游离HCDNA回收率仅为36%。结论DNase处理法可有效检出游离与错误包装HCDNA,可为后续研究奠定基础。
- 王光裕胡倩史新昌闫书美周勇刘宾
- 关键词：腺相关病毒DNA酶PCR
- 重组腺相关病毒(rAAV)基因治疗制品质控检验技术重点考量
- 2023年
- 近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检测项目与检测方法的选择、注意事项、质量标准的拟定等方面出发,阐述了其质量控制检验项目及相关技术要求。希望本文能为从业者开展该类制品的质量控制研究提供参考,并通过后续的交流讨论可达成一定共识,进而加速推动我国基因治疗行业的发展。
- 秦玺于雷陶磊毕华王光裕史新昌周勇
- 关键词：重组腺相关病毒
- 多重数字PCR在rAAV基因组完整性评价中的探索应用
- 2023年
- 目的:探索采用多重数字PCR(dPCR)技术评价重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)基因组完整性的可行性。方法:采用芯片式dPCR系统,针对rAAV基因组的末端反向重复序列(ITR)区和目的基因(或3’非翻译区)建立双重PCR法,通过适量稀释使模板DNA在PCR芯片中呈理论单拷贝分布(阳性孔低于20%),单阳性孔代表非完整片段,双阳性孔代表2组引物对之间的序列完整,通过测试单、双阳性孔的比例,评价rAAV基因组的完整性;尝试采用不同样品前处理方式(病毒基因组DNA、病毒颗粒、DNaseⅠ处理),并比较测试结果。结果:双重PCR测得拷贝数与单重PCR基本一致,无明显干扰;在一定范围内,样本的实测拷贝数与模板量呈线性相关,但单阳、双阳比例基本一致;提取的病毒基因组DNA实测拷贝数减少,但双阳率高于未处理病毒样本,DNaseⅠ处理后的病毒样本实测拷贝数明显减少,单阳、双阳比例与未处理病毒样本基本一致。结论:多重dPCR技术可用于评价rAAV产品基因组完整性,具有良好的应用前景。
- 于雷王光裕凡文超史新昌周勇
- 关键词：重组腺相关病毒目的基因
- 数字PCR技术检测rAAV产品中质粒DNA残留
- 2023年
- 目的:利用数字PCR(dPCR)技术检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)产品中质粒DNA残留。方法:针对质粒抗性基因KanR序列的4个不同区段设计引物探针,建立单重和双重dPCR检测KanR残留量;在双重dPCR中,双阳性孔代表2组引物对之间的序列完整,通过测试单、双阳性孔的比例,评价KanR序列的分布情况;利用DNaseⅠ消化游离的质粒DNA,评价病毒衣壳内错包装的质粒DNA情况。结果:4组单重dPCR实测KanR残留量之间基本一致(1.054×10^(8)~1.467×10^(8)copies·μL^(-1));双重dPCR与单重dPCR实测结果间无明显差异;双重dPCR在6~6 000 copies·μL^(-1)浓度范围内显示出良好的线性关系(r>0.999)和重复性(RSD<20%);1/2,2/3和3/43种组合的双重PCR的双阳性孔占比基本一致,表明KanR基因的断裂可能更趋向于随机断裂;DNaseⅠ处理前后结果提示,错包装的大片段质粒DNA(1/4双阳性)比游离的占比更高。结论:dPCR技术可用于检测rAAV产品中质粒DNA残留量,多重dPCR还可评估质粒DNA片段大小及分布情况。
- 凡文超于雷安怡方王光裕史新昌周勇
- 关键词：重组腺相关病毒
