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史新昌: 作品数：163 被引量：171H指数：6; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>

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无菌检查时紊流型无菌隔离器内环境微生物监测方法研究被引量：1: 2016年; 目的:研究在紊流型无菌隔离器内进行无菌检查时的内环境微生物监测方法。方法:自制监测杯(Φ90 mm×50 mm)。应用沉降菌检测和侧向气流落菌检测对监测杯法与平皿法检测效果进行比较。并在实际监测中应用监测杯法进行监测。结果:沉降菌检测和侧向气流落菌检测结果显示监测杯法与平皿法检测效果之间的差别无统计学意义,P>0.05。空载实验证明监测杯可以通过无菌隔离器消毒程序进行消毒。监测杯应用实例证明监测杯可以对无菌隔离器内环境起到较好的监测作用,同时具有操作简单,使用方便等特点。结论:所建立的监测杯法可以替代平皿法对无菌隔离器内环境进行监测。; 史新昌范文红丁有学饶春明; 关键词：平皿法

重组人干扰素α1b质量肽图分析及二硫键定位: α干扰素是一组能够诱导一系列细胞内蛋白表达，继而发挥抗病毒、抗细胞增殖和调节免疫应答作用的细胞因子。α干扰素至少有20种以上的不同亚型，不同亚型间氨基酸序列的同源性为70％，值得注意的是：第1、29、98/99和138/...; 饶春明陶磊史新昌杨英韩春梅裴德宁王军志; 关键词：Α干扰素; 文献传递

绿脓杆菌外毒素A功能片段重组蛋白GP38质控方法和质量标准的建立被引量：2: 2010年; 目的建立人性腺激素释放激素类似物—绿脓杆菌外毒素A功能片段重组蛋白GP38的质控方法和质量标准。方法采用HeLa细胞/结晶紫比色法测定GP38蛋白的生物学活性,并进行精密性和回收率验证;反相高效液相色潽法(RP-HPLC)测定其纯度,用自编CPM软件进行肽图比较分析;其他检测项目按《中国药典》三部(2005版)规定进行。结果GP38蛋白生物学活性测定方法经验证,原液试验内变异系数(CV)为10%,试验间CV值为20%;成品试验内CV值为12%,试验间CV值为21%。用该法对GP38蛋白原液和成品进行检测,其生物学活性分别为(3736±483)和(1777±260)U/ml。原液经RP-HPLC分析,纯度为(97.1±0.2)%,符合其质量标准大于95.0%的规定。用自编CPM软件分析肽图结果显示,相同酶切条件重复检测的相似度大于0.99,不相同次酶切、相同条件重复检测的相似度大于0.90。其他各项检测结果均符合《中国药典》三部(2005版)的相关要求。结论所建立的质控方法和质量标准可用于GP38蛋白产品的常规检定。; 史新昌韩春梅李响刘兰丁有学饶春明; 关键词：绿脓杆菌外毒素A

牛痘病毒GM-CSF注射液中GM-CSF活性及表达量的检测被引量：2: 2018年; 目的建立牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)注射液中GM-CSF活性及表达量的梯度分析法。方法采用TF-1细胞增殖法,四参数方程拟合检测不同浓度梯度样品的GM-CSF生物学活性;采用ELISA法,二次方程拟合检测不同浓度梯度样品的GM-CSF表达量。结果牛痘病毒GM-CSF注射液及标准品的浓度与GM-CSF的生物学活性呈量效依赖关系,随着GM-CSF浓度的增加,其GM-CSF的生物学活性增强,数据经四参数方程拟合后呈S型曲线,相关系数分别为0.953和0.997,将剂量反应曲线中直线部分的浓度对数和相应的吸光度值作直线回归,两回归线的斜率b之间差异无统计学意义(P>0.05);用该方法检测1批牛痘病毒GM-CSF注射液感染上清中GM-CSF活性,平均值为(181±16)GCU,变异系数为8.84%。牛痘病毒GM-CSF注射液及标准品的浓度与GM-CSF表达量呈量效依赖关系,随着稀释倍数的增加,GM-CSF的表达量也降低,采用二次方程进行拟合,r2均﹥0.99;用该方法检测1批牛痘病毒GM-CSF注射液感染上清中GM-CSF表达量,均符合表达量与感染浓度成正比升高的规律和趋势,且均>15 ng/m L。结论建立的方法稳定、可靠、适用性强,能表明病毒感染量与GM-CSF表达活性及表达量间的量效关系,对同类产品的质量控制具有借鉴意义。; 毕华李永红韩春梅秦玺史新昌裴德宁丁有学饶春明; 关键词：牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性表达量基因治疗

c-Myb截短突变体的构建及其对c-Myc蛋白表达的调节: 2014年; 目的：为了研究c-Myb蛋白各结构域的功能，构建c-Myb的6种截短突变体c-Myb-1~c-Myb-6的真核表达载体，测定不同突变体对c-Myc蛋白表达的影响。方法：以野生型c-Myb为模板，PCR扩增c-Myb-1~c-Myb-6片段，分别克隆到pcDNA3.0-FLAG载体，Western印迹检测克隆载体在293T细胞内的表达；将上述载体与野生型c-Myb转染乳腺癌细胞株MCF-7，检测其对c-Myb下游基因c-Myc表达的影响。结果：构建了c-Myb-1~c-Myb-6表达载体，与野生型c-Myb相比，c-Myb-1、c-Myb-4、c-Myb-5均能够促进MCF-7细胞中c-Myc的表达，而c-Myb-2、c-Myb-3、c-Myb-6则不能。结论：该研究为进一步探讨c-Myb在乳腺癌中的功能奠定了基础。; 秦玺程龙饶春明高凯杨琦史新昌徐小洁叶棋浓王军志; 关键词：C-MYB 真核表达载体 C-MYC

2种测定TNK-tPA生物学活性测定方法的比对分析: 2018年; 目的:应用2种溶栓活性检测方法检测重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体(recombinant TNK mutant of human tissue-type plasminogen activator, TNK-tPA)生物学活性并统计分析两者结果是否一致。方法:采用纤维蛋白平板溶圈法和气泡上升法测定TNK-tPA生物学活性,并对结果进行统计分析。结果:纤维蛋白平板溶圈法测定结果几何均数为2.89×10~4 IU·支^(-1),气泡上升法测定结果几何均数为2.95×10~4 IU·支^(-1)。经t检验分析,2种方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。经置换检验(permutation test)分析,2种方法检测结果数据相当(接受度概率约为90%)。结论:2种方法均可用于实验室的常规检验,但建议对于TNK-tPA的生物学活性检测使用气泡上升法。; 丁有学史新昌毕华陶磊饶春明; 关键词：生物学活性

重组人脑利钠肽活性参考品制备及动脉条法生物学活性标定被引量：2: 2012年; 目的:建立重组人脑利钠肽(rhBNP)活性参考品,用于rhBNP生物学活性测定。方法:优化冻干配方,分装冻干rhBNP原液并检测分装精度,拉丝封口后,按中国药典2010年版三部方法,检测无菌检查、pH、水分、外观。用兔动脉条法由2个实验室协作标定其生物学活性。用热加速法对该批rhBNP参考品的稳定性做了初步评价。结果:分装冻干,拉丝封口等工艺制得rhBNP参考品458支,经测定分装精度小于1%,水分为0.6%,生物学活性经2个实验室共计10次标定,均值为107 RU.支-1,95%的可信范围为97～118 RU.支-1,经热动力学分析,该rhBNP参考品活性降低1%,需要10年以上的时间,说明稳定性较好,其他检测项目均符合标准品一般制备要求。结论:冻干人脑利钠肽活性参考品符合中国药典关于标准品制备要求,可用于rhBNP生物学活性测定。; 史新昌丁有学毕华李响刘兰韩春梅饶春明; 关键词：重组人脑利钠肽

溶瘤病毒选择增殖活性检测方法的建立及优化: 2024年; 目的以重组人单纯疱疹病毒-1(recombinant human herpes simplex virus-1,rhHSV-1)作为溶瘤病毒,建立溶瘤病毒选择增殖活性测定方法,并进行优化及验证,以期用于溶瘤病毒相关制品的质量评价。方法将rhHSV-1按相同的MOI分别感染正常细胞及肿瘤细胞,培养一段时间后,提取病毒核酸,以其为模板进行qPCR扩增,获得病毒基因组拷贝数,计算病毒增殖比值,以其作为选择增殖活性的评价指标。优化方法中的细胞种类(正常细胞为MRC-5及HEK-293,肿瘤细胞为Hep3B及Fadu)、MOI(0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001)、培养时间(2 h及2、3、4 d),并验证方法的精密性及专属性。采用优化的方法检测溶瘤病毒rhHSV-1工作种子批的选择增殖活性。结果以Hep3B作为肿瘤细胞、MRC-5作为正常细胞时,rhHSV-1的增殖效果最佳,最适MOI为0.0001,最佳培养时间为72 h。采用优化的方法重复3次检测rhHSV-1的增殖比值分别为260.68、336.65及259.14,均>100,CV为15.52%;采用优化的方法检测rhHSV-1可见明显扩增,检测人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)和5型腺病毒(adenovirus 5,Ad5)未见明显扩增。溶瘤病毒rhHSV-1工作种子批的增殖比值为727。结论建立的用于检测rhHSV-1选择增殖活性的方法具有良好的精密性及专属性,可用于溶瘤病毒选择增殖活性的评价。; 王光裕于雷史新昌周勇; 关键词：溶瘤病毒

重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立被引量：3: 2014年; 目的建立注射用重组葡激酶(staphylokinase,SAK)-水蛭素(hirudin,HV)融合蛋白(SFH)的质控方法和质量标准。方法采用纤维蛋白平板溶圈(fibrin agarose plate assay,FAPA)法测定SFH的溶栓比活性,纤维蛋白凝块溶解法测定SFH的抗凝比活性;还原型SDS-PAGE测定SFH的相对分子质量;非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定SFH的纯度;胰酶裂解后采用RP-HPLC法分析SFH的肽图;其他各项指标的检测按《中国药典》三部(2010版)规定进行。结果用建立的方法对SFH原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准能够保证产品安全、有效、质量可控,可用于注射用SFH产品的常规检定。; 丁有学韩春梅李响毕华史新昌饶春明

罗米司亭中聚山梨酯80含量高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法的建立、验证及初步应用: 2024年; 目的建立重组蛋白药物罗米司亭中聚山梨酯80含量高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)-电雾式检测器(charged aerosol detector,CAD)检测方法,并对方法进行验证及初步应用,以期为重组蛋白药物制剂的质量控制提供参考。方法通过对流动相的筛选以及方法洗脱梯度和CAD参数的优化建立聚山梨酯80含量的HPLC-CAD方法,并对方法的专属性、重复性、准确性进行验证,确定方法的检测限、定量限和线性范围。采用建立的方法检测2批次罗米司亭样品中的聚山梨酯80含量。结果方法优化后的色谱条件如下:色谱柱为Acclaim Surfactant Plus(150 mm×4.6 mm,3μm);流动相A为含0.1%甲酸的水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的异丙醇;洗脱梯度为0 min 80%A,1.8 min 80%A,2.0 min 66.5%A,3.0 min 66.5%A,3.5 min 0%A,8.5 min 0%A,9.0 min 80%A,15.0 min 80%A;流速为0.6 mL/min;进样量为10μL;柱温为25℃;CAD雾化温度为50℃,幂律函数值(power function value,PFV)为1.25。该方法样品基质和空白溶液中无其他色谱峰干扰;检测低(10 mg/L)、中(50 mg/L)、高(80 mg/L)浓度聚山梨酯80峰面积的RSD分别为4.32%、1.97%和3.46%,平均加标回收率分别为95.7%、99.0%和98.9%;聚山梨酯80在浓度5.0~100.0 mg/L范围内具有良好的线性关系(R^(2)=1.0000),方法的检测限和定量限分别为1.0和2.0 mg/L。采用建立的方法检测2批次罗米司亭样品中聚山梨酯80含量分别为33.20和32.28 mg/L。结论建立的罗米司亭中聚山梨酯80含量HPLC-CAD检测方法灵敏度高,专属性、重复性、准确性良好,可用于重组蛋白药物质量控制过程中聚山梨酯80含量的检测。; 郭莹李响毕华裴德宁李学普秦玺陶磊史新昌杨靖清周勇; 关键词：高效液相色谱法聚山梨酯80

史新昌

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