顾玲玲
- 作品数：18 被引量：40H指数：4
- 供职机构：江苏农牧科技职业学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 番鸭细小病毒样颗粒的制备与鉴定被引量：5
- 2019年
- 为在昆虫细胞中表达番鸭细小病毒主要结构蛋白VP3,并探讨重组蛋白VP3能否在昆虫细胞中自动组装成病毒样颗粒,高保真扩增VP3基因,克隆入杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFB-VP3,转化DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定,得到重组Bacmid DNA。将其转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒rBac-VP3,利用SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验对重组蛋白的表达情况进行检测,负染电镜观察病毒样颗粒,并通过Western-blot对病毒样颗粒进行鉴定。SDS-PAGE和Western-blot结果表明重组蛋白大小正确。间接免疫荧光试验结果显示,重组蛋白获得了成功表达。利用负染电镜可观察到直径约20 nm的典型二十面体病毒样颗粒。Western-blot结果显示该病毒样颗粒由VP3蛋白组成。本研究首次成功利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统制备了番鸭细小病毒样颗粒,为番鸭细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 王安平吴萌吴海涛顾玲玲朱善元
- 关键词：番鸭细小病毒病毒样颗粒
- 重组禽腺联病毒介导的人溶菌酶在蛋清中的表达
- 2018年
- 为在鸡蛋清中表达人溶菌酶(hLYZ),将含有hLYZ输卵管特异表达盒的重组禽腺联病毒以每只鸡2×10^(11)经翅静脉注射正常产蛋母鸡,收集蛋清对重组蛋白的表达情况进行检测。RT-PCR结果显示,hLYZ只在输卵管部位表达,Western blot结果显示重组蛋白大小正确,抑菌活性表明注射重组病毒后的蛋清的抑菌活性明显优于正常蛋清的。动态表达水平检测结果显示,注射病毒后第1周即可以检测到重组hLYZ的表达,第5周时表达量最高,达68.3μg/mL,表达时间持续3个月之久。以上结果表明,重组禽腺联病毒能介导人溶菌酶在蛋清中的高效、长时表达,为人溶菌酶的开发应用提供了新途径。
- 吴植朱善元顾玲玲张继玲吴萌崔潇婷王安平
- 关键词：人溶菌酶蛋清
- 龙胆草及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究被引量：8
- 2019年
- 为研究龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,本试验建立Marc-145细胞模型,在研究其对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,结合细胞病变形态观察和MTT法,设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组,对病毒进行阻断、抑制和直接灭活3种作用方式的测定。结果显示,龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷和利巴韦林的最大安全浓度分别为6.250、0.020、0.630和0.016 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,龙胆草水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为43.1%、57.4%和56.4%,均低于阳性对照利巴韦林,且各作用方式下细胞均发生了明显病变。龙胆草总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为66.1%、41.1%和42.7%,其抑制作用和直接灭活作用的抑制率均低于阳性对照利巴韦林,阻断作用下细胞轻微病变。龙胆草总苷对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为33.4%、78.2%和81.9%,其抑制和直接灭活作用较强,远高于阳性对照利巴韦林,且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。综合3种作用方式,3种龙胆草提取物中龙胆草总苷抗PRRSV的效果最好,其次是龙胆草水提取物和龙胆草总黄酮。
- 刘云朱善元朱善元龚祝南秦枫顾玲玲
- 关键词：细胞病变抗病毒活性龙胆草
- 环介导等温扩增技术的研究进展被引量：2
- 2015年
- 环介导等温扩增(LAMP)技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已被广泛应用于各种病原微生物的检测。文章对LAMP技术的原理、方法、应用等方面进行了简单论述,最后指出LAMP技术目前还存在一些不足,并对其发展前景进行了展望。
- 胡成成大荣赵方余树培蔡树东顾玲玲朱善元
- 关键词：分子生物学动物疫病病原微生物
- 一种表达鸭肝炎病毒VP1基因的重组禽腺联病毒活载体疫苗及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种表达鸭肝炎病毒VP1基因的重组禽腺联病毒活载体疫苗及其制备方法和应用。该疫苗由DHAV‑1主要保护性抗原基因VP1和重组禽腺联病毒载体rAAAV组成，所述VP1是DHAV的致病决定基因。本发明的疫苗操作简...
- 王安平朱善元顾玲玲吴双郭长明秦枫张继玲吴萌
- 文献传递
- 环介导等温扩增技术及其在动物疫病检测中的应用被引量：2
- 2015年
- 环介导等温扩增(LAMP)是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低廉等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已经广泛应用于各种病原微生物的检测。本文就环介导等温扩增技术的原理、方法、应用等方面进行简述,最后指出LAMP当前存在的一些不足之处,并对其发展前景进行了展望,以期为其临床应用提供理论依据。
- 胡成成大荣余树培赵方苏玲玲蔡树东顾玲玲王永娟
- 关键词：动物疫病
- Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2017年
- 根据已经发表的Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因序列,设计1对特异性引物(上下游分别插入Bam H I和Sac I酶切位点),利用PCR技术扩增出VP1基因,经Bam H I和Sac I双酶切后,将其克隆至原核表达载体p ET-32a上,获得重组表达质粒p ET-VP1。重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),重组蛋白经IPTG诱导成功表达。将重组蛋白切胶免疫6周龄的BALB/c小鼠,3次免疫后采血,制备DHV-Ⅰ的多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示,成功表达出的重组蛋白分子量约为46 000。Western-blotting分析结果表明,该重组蛋白可与His组氨酸鼠单克隆抗体发生特异性反应,Western-blotting检测抗鼠DHV多抗的结果显示,DHV多抗能与目的蛋白发生特异性反应。以上结果表明,DHV的VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的DHV多抗能用于VP1蛋白表达的检测。
- 顾玲玲朱善元成大荣左伟勇洪伟鸣蔡树东王安平
- 关键词：VP1基因原核表达多克隆抗体
- Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP0基因在杆状病毒表达系统中的表达被引量：2
- 2017年
- 为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株的结构蛋白VP0,首先根据DHAV-Ⅰ SH株VP0基因序列设计一对引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast Bac1,获得重组质粒p FB-VP0,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP0,在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP0。Western-blot结果显示,表达的重组蛋白相对分子量约为29 k D,间接免疫荧光结果显示重组蛋白能与鸭抗全病毒阳性血清发生特异性反应。研究结果表明,DHAV-Ⅰ SH株的结构蛋白VP0在昆虫细胞中获得了成功表达,为VP0结构蛋白的功能研究和基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 王安平顾玲玲王永娟吴双左伟勇洪伟鸣朱善元
- 关键词：昆虫细胞
- 蜘蛛香提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用被引量：4
- 2020年
- 为研究蜘蛛香提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,建立Marc-145细胞模型,以利巴韦林作为阳性对照药物,采用观察细胞病变法及MTT比色法,在研究蜘蛛香提取物对Marc-145细胞最大安全质量浓度的基础上,设立蜘蛛香水提物及醇提物组、利巴韦林阳性对照组、PRRSV对照组和细胞对照组,对PRRSV进行阻断、抑制和直接灭活的测定。结果显示,蜘蛛香水提取物对PRRSV的阻断、抑制作用的最高抑制率分别为44.6%、37.9%,均极显著(P<0.01)低于利巴韦林阳性对照组,且细胞出现了较明显的病变。蜘蛛香醇提取物对PRRSV的阻断、抑制作用的最高抑制率分别为107.1%、102.6%,极显著(P<0.01)高于利巴韦林阳性对照组,细胞形态基本完好。蜘蛛香水提物和醇提物对病毒直接灭活作用的最高抑制率分别为83.5%和120.9%,均极显著(P<0.01)高于利巴韦林阳性对照组。可见,蜘蛛香醇提物抗PRRSV的作用较强。
- 秦枫刘云吴植吴双郭长明顾玲玲吴晓洁朱善元
- 关键词：蜘蛛香提取物猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞病变抗病毒活性
- 环介导等温扩增技术的改良及其在检测中的应用进展被引量：3
- 2016年
- 环介导等温扩增(LAMP)技术是一种具有特异性强、灵敏度高、快速简便、扩增高效等优点的等温核酸扩增方法。近年来,该技术在许多方面得到了进一步的改进和发展,主要体现在多重LAMP技术的实现以及LAMP技术与其他技术的联合应用方面。对LAMP技术在细菌检测、病毒检测、寄生虫检测、真菌和支原体检测、动物胚胎性别鉴定、转基因食品检测以及肿瘤基因检测中的应用进展进行了综述,并对LAMP技术的应用前景进行了展望,为今后LAMP技术的发展及应用提供参考。
- 蔡树东吴双赵维芯成大荣朱善元顾玲玲
- 关键词：环介导等温扩增
