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p38介导β-羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响被引量：1: 2013年; 本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol/L)预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2.4mmol/L;PI/Annexin V-FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase-9、bcl-2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1.2和2.4mmol/L BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加(P<0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05);添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低(P<0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。; 宋玉祥李玉李心慰史晓霞丁红研韩盈盈李娜张仁和张玉明王婷婷殷立恒郭立辉李小兵王哲刘国文; 关键词：P38 凋亡基因肝细胞犊牛

2型猪链球菌烯醇化酶的原核表达及其对体外血脑屏障模型通透性影响的检测被引量：2: 2014年; 通过原核表达的方式获得能在多种病原菌表面表达的烯醇化酶(Enolase,Eno),探索Eno在脑膜炎致病过程中的作用。根据GenBank上公布的基因序列设计Eno特异性引物,通过PCR技术扩增2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的Eno基因序列,克隆到pMD18-T载体,进一步亚克隆到原核表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒pET28a-Eno,转化入大肠杆菌BL21Codon Plus(DE3)感受态中诱导表达,经镍离子螯合柱纯化后,检测其对体外血脑屏障模型通透性的影响。结果显示,经1mmol/L IPTG诱导5h为最佳诱导条件,目的蛋白约54 000,与预期蛋白大小相符合;纯化的蛋白Western blotting分析表明,其具有较好的免疫原性;Eno可致体外血脑屏障模型通透性增加。结果表明,Eno作为SS2潜在的毒力因子在SS2引起脑膜炎的致病过程中起到重要的作用。; 李娜雷连成朱僧孙莹莹潘风光孙长江韩文瑜; 关键词：猪链球菌2型烯醇化酶原核表达通透性

NA-1株鹅源副粘病毒M、NP基因原核表达载体的构建与鉴定: 参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列。设计合成2对特异性引物。经RT-PCR技术扩增出大小为1095 bp的M基因和1470bp的NP基因。将M、NP基因克隆到pET-28a表达载体中,构建了表达质粒pE...; 李娜丁壮马爱霞徐明毕玉海尹仁福刘美; 关键词：鹅源副粘病毒 M基因 NP基因原核表达; 文献传递

猪脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞共培养模拟体外血脑屏障模型被引量：1: 2013年; 血脑屏障是隔离外周体循环和中枢神经系统的屏障结构。它可以选择性允许血液中的一些物质通过脑微血管内皮细胞进入大脑中。除了脑微血管内皮细胞之外,血脑屏障的组成主要还有星型胶质细胞、周细胞、神经元和细胞外基质。本试验通过原代培养猪脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞,以Transwell细胞板为载体构建猪体外血脑屏障的共培养模型。经过4h渗漏试验和TEER电阻的测定试验显示所构建的猪体外血脑屏障的模型具备了血脑屏障基本的生物学特性,可以用于猪血脑屏障相关疾病尤其是人兽共患性疾病致病机制的研究。; 朱僧李娜孙长江韩文瑜雷连成; 关键词：血脑屏障共培养

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李娜