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李大伟: 作品数：23 被引量：30H指数：3; 供职机构：上海交通大学药学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市“科技创新行动计划”江苏省南通市社会发展科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>

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布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定: 2010年; 苯丙氨酰-tRNA合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶,以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物,但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-tRNA合成酶的报道。本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶并进行了活性测定。首先通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨酰-tRNA合成酶的α亚基、β亚基的基因,依次克隆入pCOLADuet共表达载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中进行了成功表达,并采用Ni-Bind亲和层析对其进行了纯化,最后用免疫印迹进行了鉴定。此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。; 姚璎杲光伟李大伟; 关键词：布氏锥虫 TRNA合成酶原核表达纯化酶活测定

以布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统的建立: 2009年; 锥虫是人的血液寄生虫,对热带乃至拉丁美洲贫困地区影响极大,但目前的传统治疗药物存在副作用大、有效性不断降低的问题。根据亮氨酰tRNA合成酶在微生物中可作为药物靶点的事实,在新型抗锥虫药物筛选中,通过对锥虫的亮氨酰tRNA合成酶的克隆、表达和纯化,以及该酶活性测定的优化,建立了该酶抑制物的筛选系统。筛选结果表明,这一以锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统可以有效筛选抗锥虫化合物,选出的化合物有一定的抗锥虫特异性,并可以用于化合物的进一步优化和测定其半抑制浓度。使用这一系统筛选到了对锥虫有较好抑制作用,但对人类细胞毒性较小的一系列新型化合物,因而锥虫亮氨酰tRNA合成酶很可能成为开发有效抗锥虫药物的新靶标。; 杲光伟姚璎丁大中叶龙周虎臣李大伟; 关键词：布氏锥虫药物筛选

B结构域糖基化位点对凝血因子Ⅷ分泌和活性的影响: 2014年; 目的:研究B结构域糖基化位点对凝血因子Ⅷ分泌和活性的影响。方法:通过反向PCR技术在凝血因子ⅧA2和A3结构域之间插入B结构域的糖基化序列,PCR后进行重组连接、质粒转化、克隆筛选、质粒抽提等步骤,构建重组人凝血因子Ⅷ载体,然后再通过活性检测试剂盒检测胞外分泌因子Ⅷ活性,用ELISA(双抗体夹心法)检测胞外分泌因子Ⅷ总表达,用Western印迹检测重组因子Ⅷ在胞内的总表达。结果:B结构域糖基化点的增加使得因子Ⅷ的胞外相对活性最高提高了1倍。结论:糖基化位点的加入可以增强因子Ⅷ的胞外活性,如果适当增加糖基化位点的长度和数量(单个糖基化位点重复出现或多个糖基化位点连接),可以进一步提高因子Ⅷ的胞外表达和活性。; 杲光伟黄家语李桂林李大伟; 关键词：定点突变

呋喃并[3,2-g]色烯类化合物及其应用: 本发明属于医药技术领域，涉及呋喃并[3，2-g]色烯类衍生物及其应用。呋喃并[3，2-g]色烯类衍生物包括呋喃并[3，2-g]色烯类衍生物该类化合物的立体异构体和药学上适用的盐，其结构通式如下：呋喃并[3，2-g]色烯类...; 胡春王世辉王岩黄二芳刘晓平李大伟; 文献传递

呋喃并色烯类化合物的设计、合成及抗癌活性研究: ＜正＞选择性雌激素受体调节剂现在用于治疗各种雌激素相关的疾病,如乳腺癌、骨质疏松、阿尔茨海默病和冠心病。然而,这些药物往往造成不良的副作用,因此,寻找更加有效的选择性雌激素受体调节剂一直是近年来药物研发的热点问题之一。根...; 胡春王世辉李新增付娟孙冰李大伟; 文献传递

Synthesis and anti-tumor activity of 1,4-dihydrothieno[3',2':5,6] thiopyrano[4,3-c]pyrazole-3-carboxylic amide derivatives: 2011年; Five 1,4-dihydrothieno[3＇,2＇：5,6]thiopyrano[4,3-c]pyrazole-3-carboxylic amide derivatives were synthesized from 2- mercaptothiophene via a six-step procedure. The prepared compounds were initially evaluated for their antiprolifemtive activity using the estrogen receptors expressing MCF-7 human mammary tumor cell line in vitro. All of the prepared compounds showed moderate anti-tumor activity.; 孙蕊宋菁赵辉严春丽张爱君Koirala Diwa李大伟胡春; 关键词：SYNTHESIS

布氏锥虫亮氨酰-tRNA合成酶的克隆表达纯化及活性测定被引量：3: 2010年; 目的克隆布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶基因,并进行表达纯化及活性测定。方法通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中扩增出亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)基因,依次克隆入pBS-T克隆载体及pET21a(+)表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中通过条件优化后表达。表达产物用His-Bind亲和色谱纯化,并用免疫印迹进行鉴定。采用放射性同位素方法进行酶活性测定。结果PCR扩增得到3.2 kb的DNA片段,重组质粒pET21a(+)/LeuRS经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白的20%,纯化后蛋白纯度达85%,免疫印迹进行鉴定蛋白正确,酶活性测定计算出提纯物酶活性约为72 U/mL。结论已成功克隆表达纯化出布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶,并用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫亮氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。; 姚璎杲光伟李大伟; 关键词：布氏锥虫亮氨酰-TRNA合成酶原核表达酶活测定

1,4-二氢噻吩并[3’,2’:5,6]噻喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸衍生物及其应用: 本发明属于医药技术领域，涉及1，4-二氢噻吩并[3’，2’：5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-羧酸衍生物及其作为雌激素受体调节剂的应用。1，4-二氢噻吩并[3’，2’：5，6]噻喃并[4，3-c]吡唑-3-羧酸衍生物...; 胡春孙蕊王欣宋菁黄二芳徐赫男刘晓平李大伟

人源化单克隆抗体候选药物靶标AGR2对胂瘤微环境中细胞信号的调节: AGR2的表达与肿瘤的发生、存活、转移和耐药现象相关,也是我们具有自主知识产权的抗癌单克隆抗体候选药物的作用靶标。本项目将对AGR2如何在复杂的肿瘤微环境中与众多其它细胞信号分子相互作用进行深入研究,以揭示AGR2信号通...; 李大伟; 文献传递

5H-呋喃并[3,2-g]色烯类化合物的合成及其抗肿瘤活性被引量：2: 2010年; 目的设计合成5H-呋喃并[3,2-g]色烯类化合物,并测定其体外抗肿瘤活性。方法以2′,4′-二羟基苯乙酮为原料,经缩合、催化氢化和Fries重排等反应合成目标化合物。采用人骨肉瘤细胞U2OS-EGFP-4A12G对目标化合物的体外抗肿瘤活性进行初步评价。结果与结论合成了10个未见文献报道的5H-呋喃并[3,2-g]色烯类化合物,其结构经红外光谱、质谱、核磁共振氢谱确证。化合物7a、7e和7h对人骨肉瘤细胞U2OS-EGFP-4A12G的抑制活性较强,其IC50值分别为16.53、7.74、13.27μmol.L-1。5H-呋喃并[3,2-g]色烯类化合物是一类具有新型骨架结构的抗肿瘤化合物,值得进一步研究。; 王世辉王岩朱玉莹韩健袁晓薇Koirala Diwa李大伟胡春; 关键词：化学合成抗肿瘤活性

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