杲光伟
- 作品数：18 被引量：8H指数：2
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市“科技创新行动计划”“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- B结构域糖基化位点对凝血因子Ⅷ分泌和活性的影响
- 2014年
- 目的:研究B结构域糖基化位点对凝血因子Ⅷ分泌和活性的影响。方法:通过反向PCR技术在凝血因子ⅧA2和A3结构域之间插入B结构域的糖基化序列,PCR后进行重组连接、质粒转化、克隆筛选、质粒抽提等步骤,构建重组人凝血因子Ⅷ载体,然后再通过活性检测试剂盒检测胞外分泌因子Ⅷ活性,用ELISA(双抗体夹心法)检测胞外分泌因子Ⅷ总表达,用Western印迹检测重组因子Ⅷ在胞内的总表达。结果:B结构域糖基化点的增加使得因子Ⅷ的胞外相对活性最高提高了1倍。结论:糖基化位点的加入可以增强因子Ⅷ的胞外活性,如果适当增加糖基化位点的长度和数量(单个糖基化位点重复出现或多个糖基化位点连接),可以进一步提高因子Ⅷ的胞外表达和活性。
- 杲光伟黄家语李桂林李大伟
- 关键词：定点突变
- 稳定表达抗AGR2人源化单克隆抗体的CHO细胞株及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种稳定表达抗AGR2人源化单克隆抗体的CHO细胞株及其应用。本发明提供一种稳定表达抗AGR2人源化单克隆抗体的CHO细胞株K70E10‑1D6，所述细胞株的保藏号为CCTCC NO：C...
- 李大伟陈昊郭昊马少司杲光伟李东升荣荣武正华李哲奇朱奇苏琪达
- 文献传递
- 布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法
- 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法，具体步骤如下：分别设计引物，扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因；将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中，构建pE...
- 姚璎杲光伟李大伟
- 文献传递
- 布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定
- 2010年
- 苯丙氨酰-tRNA合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶,以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物,但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-tRNA合成酶的报道。本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶并进行了活性测定。首先通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨酰-tRNA合成酶的α亚基、β亚基的基因,依次克隆入pCOLADuet共表达载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中进行了成功表达,并采用Ni-Bind亲和层析对其进行了纯化,最后用免疫印迹进行了鉴定。此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。
- 姚璎杲光伟李大伟
- 关键词：布氏锥虫TRNA合成酶原核表达纯化酶活测定
- 一种稳定表达人凝血八因子的CHO细胞株及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种稳定表达人凝血八因子的CHO细胞株及其应用。本发明提供一种稳定表达人凝血八因子的CHO细胞株，所述细胞株的名称为：中国仓鼠卵巢细胞CHO-S/H9C2，所述细胞株的保藏号为：CCTCC...
- 李大伟李东升杲光伟陈昊朱奇郭昊武正华邓江山马少司荣荣苏琪达
- 以布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统的建立
- 2009年
- 锥虫是人的血液寄生虫,对热带乃至拉丁美洲贫困地区影响极大,但目前的传统治疗药物存在副作用大、有效性不断降低的问题。根据亮氨酰tRNA合成酶在微生物中可作为药物靶点的事实,在新型抗锥虫药物筛选中,通过对锥虫的亮氨酰tRNA合成酶的克隆、表达和纯化,以及该酶活性测定的优化,建立了该酶抑制物的筛选系统。筛选结果表明,这一以锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统可以有效筛选抗锥虫化合物,选出的化合物有一定的抗锥虫特异性,并可以用于化合物的进一步优化和测定其半抑制浓度。使用这一系统筛选到了对锥虫有较好抑制作用,但对人类细胞毒性较小的一系列新型化合物,因而锥虫亮氨酰tRNA合成酶很可能成为开发有效抗锥虫药物的新靶标。
- 杲光伟姚璎丁大中叶龙周虎臣李大伟
- 关键词：布氏锥虫药物筛选
- 布氏锥虫亮氨酰-tRNA合成酶的克隆表达纯化及活性测定被引量：3
- 2010年
- 目的克隆布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶基因,并进行表达纯化及活性测定。方法通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中扩增出亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)基因,依次克隆入pBS-T克隆载体及pET21a(+)表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中通过条件优化后表达。表达产物用His-Bind亲和色谱纯化,并用免疫印迹进行鉴定。采用放射性同位素方法进行酶活性测定。结果PCR扩增得到3.2 kb的DNA片段,重组质粒pET21a(+)/LeuRS经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白的20%,纯化后蛋白纯度达85%,免疫印迹进行鉴定蛋白正确,酶活性测定计算出提纯物酶活性约为72 U/mL。结论已成功克隆表达纯化出布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶,并用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫亮氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。
- 姚璎杲光伟李大伟
- 关键词：布氏锥虫亮氨酰-TRNA合成酶原核表达酶活测定
- 杂交瘤细胞株及其制备方法
- 一种生物技术领域的杂交瘤细胞株及其制备方法，制备杂交瘤细胞株具体为：表达hAG2蛋白；免疫小鼠；制备滋养细胞；制备小鼠脾细胞；将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞混合；细胞融合及培养；检测融合细胞，选取阳性杂交瘤细胞，反复克隆培养，...
- 李大伟武正华朱奇杲光伟
- 文献传递
- 布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法
- 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法，具体步骤如下：分别设计引物，扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因；将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中，构建pE...
- 姚璎杲光伟李大伟
- 文献传递
- 一种稳定表达人凝血八因子的CHO细胞株及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种稳定表达人凝血八因子的CHO细胞株及其应用。本发明提供一种稳定表达人凝血八因子的CHO细胞株，所述细胞株的名称为：中国仓鼠卵巢细胞CHO‑S/H9C2，所述细胞株的保藏号为：CCTCC...
- 李大伟李东升杲光伟陈昊朱奇郭昊武正华邓江山马少司荣荣苏琪达
- 文献传递
