李玉华
- 作品数：54 被引量：204H指数：9
- 供职机构：卫生部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4人／鼠嵌合Fab抗体片段的制备及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:构建日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的人/鼠嵌合Fab(cFab)抗体片段,并对cFab抗体片段结合活性进行鉴定。方法:用抗体框架区的通用引物PCR扩增抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的VH及VL基因,测序分析其核苷酸序列。将测序正确的鼠源VH、VL分别与人IgG1的CH1、CL通过Overlap PCR扩增Fd及全长L,再利用Overlap PCR以Fd和全长L基因为模板扩增cFab基因。将cFab基因片段克隆至载体pComb3XSS中构建表达载体pComb3XSS-Fab,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导进行蛋白可溶性表达。通过Westernblot和ELISA方法对cFab抗体片段进行检测。结果:构建出抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4 cFab表达载体,Westernblot结果证实在大肠杆菌Top10F′中表达出cFab可溶性抗体片段,ELISA结果显示cFab抗体片段与可溶性虫卵抗原(SEA)有较好的结合活性。结论:表达、纯化了抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4cFab抗体片段,cFab抗体片段具有与亲本抗体相同的抗原结合能力,为制备抗日本血吸虫人源化免疫毒素提供了技术贮备。
- 顾春艳李红任勇亚许静朱晓娟李玉华仇镇宁王祝鸣朱进戚晓红管晓虹冯振卿
- 关键词：日本血吸虫可变区基因
- 哮喘大鼠肺内感觉神经-内分泌细胞分布和密度的变化被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨哮喘大鼠肺内感觉神经-内分泌细胞分布和密度的变化。方法:20只Wister大鼠随机分成正常组和哮喘组,每组10只。采用免疫组化和计算机图像分析观察大鼠肺内降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)和血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide,VIP)免疫反应阳性纤维以及蛋白基因产物9.5(proteingeneproduct9.5,PGP9.5)和突触素(Synaptophysin,SYN)阳性细胞的变化。结果:①哮喘大鼠肺内CGRP和VIP阳性纤维的分布和密度均发生了显著的变化,CGRP阳性纤维显著增多,染色加深,相对阳性染色面积和灰度值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);VIP阳性纤维明显缺乏,相对阳性染色面积和灰度值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。②哮喘大鼠肺内PGP9.5、SYN阳性细胞数量显著增多,染色加深,PGP9.5、SYN阳性细胞率和光密度值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:哮喘大鼠肺内感觉神经纤维-内分泌细胞的分布和密度存在异常,这可能是导致相应的神经肽含量变化的直接原因,神经内分泌调节失衡,从而促进了哮喘的持续和发展。
- 俞茹云王彤殷凯生刘扣英李玉华陈俊娣
- 关键词：哮喘感觉神经肺神经内分泌细胞
- Protective immunity induced by the anti-idiotypic monoclonal antibody NP30 of Schistosoma japonicum被引量：5
- 2002年
- 目的 观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫小鼠诱导的保护性免疫力.方法 选择L16(4×212)正交设计,8周龄昆明种小鼠随机分为16个实验组和2个对照组.对照组腹腔接种SP2/0腹水.所有小鼠在腹部皮肤感染100±2条日本血吸虫尾蚴,尾蚴攻击后第30天处死小鼠,行左心室-门静脉灌注收集成虫,计算减虫率.结果 根据不同的免疫方案,NP30主动免疫可产生22.36%-50.46%的减虫率,并确定了最优免疫方案.结论 提示NP30主动免疫对尾蚴攻击可产生一定的保护力,具有血吸虫疫苗候选分子的潜能.
- 冯振卿李玉华薛婉芬仇镇宁李芸茜朱昌亮管晓虹
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体保护性免疫
- 日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30保护性免疫力持续时间的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 确定日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 NP30主动免疫诱导保护性免疫力的持续时间。方法 实验组昆明种小鼠腹腔注射 NP30 10μg/鼠 ,主动免疫 3次 ,每次间隔 2周 ,对照组腹腔注射生理盐水。末次免疫后 8、12、16、2 0、2 4周感染日本血吸虫尾蚴 (4 0± 1)条 ,尾蚴感染后 4 0 d行足垫试验。结果 NP30末次免疫后 8、12、16周感染日本血吸虫尾蚴的减虫率为 2 1.4 3%～4 1.16 % ,分别与对照组相比差异有显著性 ;足垫试验结果显示 8、12周实验组与对照组差异有显著性。结论 NP30主动免疫诱导的保护性免疫力持续约 4个月 ;
- 赵文娥冯振卿李玉华仇镇宁王子露李芸茜管晓虹
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体主动免疫
- CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体并观察其介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对人肝癌细胞CTGF(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法:针对已经筛选确定的人CTGF基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与Plk0.1-GFP-SP6载体连接产生shRNA慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定。用脂质体转染法将质粒共转染293T细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,Real-timePCR、Western-blot检测CTGFmRNA和蛋白的表达。结果:PCR与DNA测序证实合成的含CTGF shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。经RNA干扰后的靶细胞CTGF mRNA以及蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建人CTGF基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染HepG2细胞可有效降低CTGFmRNA和蛋白的表达,为以CTGF基因为靶点的肝癌基因治疗研究奠定了基础。
- 程海清贾筱琴李红李玉华朱进管晓虹冯振卿
- 关键词：RNA干扰CTGF慢病毒肝癌
- GRO-α的原核表达及对细胞增殖作用的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建含有GRO-α(生长调节癌基因-1)的重组表达载体,优化重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中表达,分析其对肿瘤细胞的增殖作用的影响。方法:RT-PCR扩增GRO-α基因片段,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白表达。经亲和层析柱纯化目的蛋白,作用于人乳腺癌细胞系MCF-7,应用CCK8检测其对细胞增殖的影响。结果:成功构建pGEX-4T-1/GRO-α原核表达质粒,高效表达GRO-α-GST融合蛋白,大小为34ku。细胞增殖实验结果显示,该蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7增殖具有促进作用。结论:重组GRO-α-GST融合蛋白具有生物学活性,可促进人乳腺癌细胞的增殖,为今后制备相应抗体奠定基础并为乳腺癌的靶向治疗提供新的方法。
- 陈晓笑唐奇朱进仇镇宁李玉华王祝鸣管晓虹冯振卿
- 关键词：重组蛋白MCF-7
- 抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用被引量：8
- 2001年
- 目的 研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法 实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果 尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论 NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 。
- 冯振卿朱荣李玉华仇镇宁李芸茜王祝鸣薛婉芬管晓虹
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体虫卵肉芽肿肝纤维化免疫组织化学血吸虫病
- 肿瘤抗原基因MAGE-A9的克隆及原核表达
- 2007年
- 目的扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9cDNA,构建原核表达载体,表达并纯化MAGE-A9蛋白。方法从人肝癌组织提取总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从中扩增出MAGE-A9 cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株。以L-Arabi-nose进行诱导表达,并纯化。结果获得MAGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其相对分子质量为35 000。结论成功地构建了pBAD/gⅢ-MAGE-A9原核表达质粒,获得了MAGE-A9蛋白,为该蛋白应用于肿瘤免疫治疗奠定了基础。
- 徐璐朱进仇镇宁李玉华冯振卿
- 关键词：黑色素瘤逆转录-聚合酶链反应基因克隆基因表达
- 流行性乙型脑炎活疫苗细胞免疫检测方法的探索被引量：4
- 1998年
- 本文建立了流行性乙型脑炎活疫苗细胞免疫检测方法。采用纯系Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ－２ｄ）小鼠制备效应细胞，以同一品系Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ－２ｄ）小鼠原代肾细胞为靶细胞。当效靶细胞比例为２０∶１，杀伤时间为４小时，ＭＴＴ反应时间为４小时，细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用最强。利用该法对乙脑活苗和死苗免疫小鼠进行了ＣＴＬ活性测定，结果表明该法重复性好。
- 李玉华王洪彬李声友卢德芬姚亚夫吴玉权王寿贵
- 关键词：细胞免疫
- 乙型脑炎狗肾细胞活疫苗的人体接种观察被引量：4
- 1995年
- 乙型脑炎狗肾细胞14－2PDK-CD株活疫苗于甘肃省武威市（非流行区）45人．接种观察表明，反应轻微，且抗体应答良好．疫苗接种后仅有4．65％的儿童出现低热反应（37．1～37.3℃），48～72小时后消失．儿童接种1针（0．5ml）后其抗体效价≥1∶5者占92．9％、≥1∶10者占42．9％；次年加免1针后，血清中和抗体效价百分之百上升至≥1∶10，GMT为29．3±1．44。成人接种1针（1．0ml），其抗体效价即上升至≥1∶10．与同时进行的乙型脑炎地鼠肾细胞14－2HK株活疫苗比较，其结果均无明显差异，表明两株活疫苗的免疫原性相似。
- 王寿贵陈惠蓉王叔桥李玉华
- 关键词：乙型脑炎疫苗接种反应抗体应答
