朱进 作品数:247 被引量:610 H指数:13 供职机构: 南京医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
微量注射泵持续静脉推注阿托品在抢救有机磷中毒的应用 被引量:9 2002年 马明洲 张铮 徐英 戴国强 秦海东 朱进关键词:微量注射泵 阿托品 抢救 有机磷中毒 狂犬病毒G蛋白基因的克隆、表达及生物学活性鉴定 被引量:6 2011年 目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus Gprotein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原。方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增出RVG基因片段,并定向克隆于pGEX-6P-1载体中,构建原核表达载体pGEX-RVG。阳性重组质粒转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过对表达条件的优化,确定可溶性表达的最佳条件。利用谷胱甘肽转移酶(GST)亲和层析法获得纯化的目的蛋白,Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:构建了原核表达载体pGEX-RVG,经IPTG诱导后可表达分子量约36 000融合蛋白,经纯化获得高纯度的目的蛋白。Western blot检测表明重组的融合蛋白有较好的生物学活性。结论:成功表达并纯化狂犬病毒G蛋白,为进一步研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供抗原。 冯晓敏 卞颖华 徐伟 刘新建 朱进 管晓虹关键词:狂犬病毒 融合蛋白 可溶性表达 抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4人/鼠嵌合Fab抗体片段的制备及功能鉴定 被引量:2 2009年 目的:构建日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的人/鼠嵌合Fab(cFab)抗体片段,并对cFab抗体片段结合活性进行鉴定。方法:用抗体框架区的通用引物PCR扩增抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的VH及VL基因,测序分析其核苷酸序列。将测序正确的鼠源VH、VL分别与人IgG1的CH1、CL通过Overlap PCR扩增Fd及全长L,再利用Overlap PCR以Fd和全长L基因为模板扩增cFab基因。将cFab基因片段克隆至载体pComb3XSS中构建表达载体pComb3XSS-Fab,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导进行蛋白可溶性表达。通过Westernblot和ELISA方法对cFab抗体片段进行检测。结果:构建出抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4 cFab表达载体,Westernblot结果证实在大肠杆菌Top10F′中表达出cFab可溶性抗体片段,ELISA结果显示cFab抗体片段与可溶性虫卵抗原(SEA)有较好的结合活性。结论:表达、纯化了抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4cFab抗体片段,cFab抗体片段具有与亲本抗体相同的抗原结合能力,为制备抗日本血吸虫人源化免疫毒素提供了技术贮备。 顾春艳 李红 任勇亚 许静 朱晓娟 李玉华 仇镇宁 王祝鸣 朱进 戚晓红 管晓虹 冯振卿关键词:日本血吸虫 可变区基因 重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL免疫毒素的构建、表达及纯化 被引量:2 2009年 目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c-Met单链抗体原核表达载体,并对其产物进行变性、复性和纯化,检测其对肝癌细胞系的毒性作用。方法:以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人源c-Met单链基因,采用基因工程原理,将扩增出的c-Met单链基因和PE38KDEL基因克隆入pBAD/GⅢA表达载体中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确;转化大肠杆菌Top10F′,左旋阿拉伯糖诱导表达,采用镍离子螯合层析法纯化变性的包涵体样品,并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体进行复性;采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性,MTT法检测c-Met/PE38KDEL免疫毒素对肝癌细胞的体外杀伤活性。结果:成功构建了免疫毒素表达载体pBAD/GⅢA/c-Met/PE38KDEL;诱导产物主要以包涵体形式存在;复性后的免疫毒素c-Met/PE38KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性并且对SMMC7721细胞系具有较明显的杀伤作用。结论:全人源抗c-Met单链抗体与PE38KDEL重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果,为进一步肝癌的导向治疗提供依据。 朱晓娟 冯振卿 朱进 张秀华 缪林 季国忠 范志宁 刘政关键词:C-MET PE38 免疫毒素 肝细胞癌 人源抗狂犬病毒中和抗体Fab及其制备方法和应用 本发明通过噬菌体抗体展示技术筛选出一株高亲和力的针对G蛋白的人源抗狂犬病毒抗体scFv,运用基因重组技术,将scFv的重链可变区,轻链可变区同人IgG1的CH1,Cλ进行重组,扩增Fab片段。构建人源Fab抗体片段的原核... 李琛 朱进重组抗c-Met/PE38KDEL免疫毒素的构建、表达及对肝癌细胞抑制作用的研究 目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c-Met单链抗体原核表达载体,并对其产物进行变性、复性和纯化,检测其对肝癌细胞系的毒性作用。方法:以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人源... 刘政 朱晓娟 朱进 冯振卿 范志宁 季国忠关键词:免疫毒素 原核表达载体 基因工程 文献传递 2型猪链球菌89K毒力岛Ⅳ型分泌系统LAMP检测方法的建立 被引量:11 2014年 目的建立针对高致病性2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,SS2)89K毒力岛Ⅳ型分泌系统的环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。方法根据国内流行株特有89K毒力岛编码的Ⅳ型分泌系统(T4SS-89K)的virB4-89K基因保守区域设计并合成LAMP引物,通过优化反应体系和扩增条件建立T4SS-89K快速检测方法,对方法的特异性、敏感性进行评估。结果优化的LAMP反应体系具有良好的扩增效率,检测灵敏度为1.53×10^-1拷贝/反应,全部扩增检测可在60rain内完成;建立的LAMP法具有良好的特异性,与不含T4SS-89K的猪链球菌(包括1/2型、1型、3-33型),以及其他常见9种对照菌均不发生特异性扩增,而与1998和2005年疫情现场分离的高致病性SS2均可发生特异性扩增。结论建立的LAMP方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,可用于高致病性SS2快速检测。 张凤玉 胡丹 吕恒 张锦海 郝丽娜 龚秀芳 操敏 郑峰 耿美玲 朱进 李丙军 潘秀珍 王长军人源抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素‑7的抗体IgG及其应用 人源抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素‑7(sialic acid‑binding immunoglobulin‑like lectin‑7,Siglec‑7)的抗体IgG及其应用,重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO... 朱旭辉 曹勇平 王怡雯 朱进文献传递 全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定 被引量:5 2013年 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。 张倩倩 赵茜 张晓 丁贵鹏 金秋 高畅 熊四平 陈玉平 朱进 冯振卿关键词:噬菌体抗体库 中和活性 人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响 被引量:3 2015年 目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。 褚楚 刘金荣 张慧林 唐小军 林红 刘鹏 苏亦平 冯振卿 童华 朱进关键词:宫颈癌 生物学特性