仇镇宁
- 作品数：83 被引量：251H指数：10
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划南京医科大学科技发展基金资助更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4人／鼠嵌合Fab抗体片段的制备及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:构建日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的人/鼠嵌合Fab(cFab)抗体片段,并对cFab抗体片段结合活性进行鉴定。方法:用抗体框架区的通用引物PCR扩增抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的VH及VL基因,测序分析其核苷酸序列。将测序正确的鼠源VH、VL分别与人IgG1的CH1、CL通过Overlap PCR扩增Fd及全长L,再利用Overlap PCR以Fd和全长L基因为模板扩增cFab基因。将cFab基因片段克隆至载体pComb3XSS中构建表达载体pComb3XSS-Fab,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导进行蛋白可溶性表达。通过Westernblot和ELISA方法对cFab抗体片段进行检测。结果:构建出抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4 cFab表达载体,Westernblot结果证实在大肠杆菌Top10F′中表达出cFab可溶性抗体片段,ELISA结果显示cFab抗体片段与可溶性虫卵抗原(SEA)有较好的结合活性。结论:表达、纯化了抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4cFab抗体片段,cFab抗体片段具有与亲本抗体相同的抗原结合能力,为制备抗日本血吸虫人源化免疫毒素提供了技术贮备。
- 顾春艳李红任勇亚许静朱晓娟李玉华仇镇宁王祝鸣朱进戚晓红管晓虹冯振卿
- 关键词：日本血吸虫可变区基因
- 抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与初步鉴定
- 2003年
- 目的 制备抗人钠碘转运体 (NIS)单克隆抗体。方法 以人NIS蛋白质的二个片段(第 2膜外段和第 14f段 )为抗原免疫小鼠 ,运用杂交瘤技术 ,制备鼠抗人NIS单克隆抗体 (rhNISMAb) ,采用小鼠Ig亚类测定试剂条测定单抗的亚类 ,并通过ELISA、Western blot、免疫组化技术等鉴定其特异性。结果 运用杂交瘤技术成功地制备出能稳定分泌抗人NIS单克隆抗体的细胞系。Western blot分析表明 :此单抗所识别的靶分子的相对分子量主要在 97KD ,免疫组化染色显示 :甲状腺滤泡细胞基底膜上有棕黄色着色。结论 成功地制备出抗人NIS单克隆抗体 ,为NIS抗原 抗体的研究提供了新的工具 ,NIS单克隆抗体不仅可以应用于甲状腺、乳腺等领域的基础研究 ,而且可以用于临床 。
- 袁庆新刘超段宇仇镇宁管晓红
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤技术
- 抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与初步鉴定被引量：1
- 2003年
- 钠碘转运体(sodium iodide symporter,NIS)是甲状腺滤泡细胞膜上的一类特殊糖蛋白.NIS的主要功能是摄取和浓集碘[1,2],它对维持甲状腺稳态、维护人体健康具有重要的意义.
- 袁庆新刘超段宇仇镇宁管晓红
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞
- 抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用被引量：8
- 2001年
- 目的 研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法 实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果 尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论 NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 。
- 冯振卿朱荣李玉华仇镇宁李芸茜王祝鸣薛婉芬管晓虹
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体虫卵肉芽肿肝纤维化免疫组织化学血吸虫病
- 人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备及鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 建立分泌抗人卵泡刺激素 (FSH) β亚基 5 1～ 6 0片段单克隆抗体细胞株 ,并对单抗进行免疫学鉴定。 方法 以人工合成的FSHβ蛋白抗原决定簇多肽为免疫原 ,采用脾内包埋法免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0小鼠骨髓瘤细胞融合 ,杂交瘤细胞用人工合成的人FSHβ亚基 5 1～ 6 0片段包被、间接ELISA法筛选。结果 获得稳定分泌抗人FSHβ片段单抗细胞 1株 (F1C)。ELISA检测腹水效价为 1∶1.6× 10 4 ,与黄体生成素 (LH)、促甲状腺素 (TSH)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等无交叉反应 ,免疫印迹 (Westernblot)显示该单抗特异性强。结论 本实验所制备的单抗具有良好的灵敏性、特异性和实用性 ,可用于酶免疫检测方法的建立 。
- 卞倩仇镇宁管晓虹王心如
- 关键词：卵泡刺激素单克隆抗体杂交瘤ELISA
- 单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究被引量：5
- 1993年
- 本研究用单克隆抗独特型抗体NP30与日本血吸虫肠相关抗原(GAA)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测了702份不同病期及正常人群中的血清抗体,结果显示,在急性感染时,NP30抗体的检出率为98％,与GAA(94％)和SEA(98％)的无差别。在慢性感染时NP30抗体的检出率为87％,与GAA(86％)的无差别,但低于SEA(98％)的。在正常人群中,上述3种的抗体假阳性率均为3％左右,无差别。NP30的抗体滴度几何均数在急性血吸虫感染时高于GAA的,低于SEA的,在慢性感染时低于后两者,提示NP30的抗体在血吸虫感染期间出现比较早,消退较快。上述结果提示,NP30可以替代虫源性抗原,用于日本血吸虫病诊断。
- 吴宜琴陶如华仇镇宁罗建平管晓虹吴观陵赵慰先
- 关键词：血吸虫血清抗体
- 鼠痘病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建株及初步鉴定被引量：1
- 2002年
- 目的 :制备 1株分泌高效价抗新分离的鼠疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,提高早期检测病毒的敏感性。方法 :从可疑病鼠分离出的 1株鼠痘病毒 ,并以此株制备抗鼠痘病毒为抗原 ,免疫BALB/C小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合。获 1株稳定分泌抗鼠痘病毒 (EV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (NB 4)。结果 :经初步鉴定证明 ,NB 4免疫球蛋白为IgG ,针对的靶抗原分子质量为 6 7ku ,并对 184份小鼠血清鼠痘病毒抗原进行检测。结论 :NB 4有可能成为检测鼠痘病毒抗原较敏感的工具。
- 张伟俈唐竹萍仇镇宁李芸茜管晓红
- 关键词：鼠痘病毒单克隆抗体小鼠杂交瘤细胞株建株
- 酶标记抗独特型抗体NP30的Dot-ELISA检测血吸虫抗体被引量：12
- 1991年
- 本文报道用辣根过氧化物酶标记抗独特型抗体NP_(30)进行Dot-ELISA直接法,检测人血清中的日本血吸虫抗体。急性血吸虫病人粪检阳性符合率88.9％:慢性病人74.1％;正常人的假阳性率为3％。与常规ELISA方法相比,均无显著的差别。提示用酶标记NP30的Dot-ELISA同样可以用于检测日本血吸虫抗体,且方法简便易行,便于现场应用。
- 仇镇宁陶如华吴宜琴马磊陈文航焦国庆李旭
- 关键词：血吸虫抗体DOT-ELISANP30酶标记阳性符合率
- 肿瘤抗原基因MAGE-A9的克隆及原核表达
- 2007年
- 目的扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9cDNA,构建原核表达载体,表达并纯化MAGE-A9蛋白。方法从人肝癌组织提取总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从中扩增出MAGE-A9 cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株。以L-Arabi-nose进行诱导表达,并纯化。结果获得MAGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其相对分子质量为35 000。结论成功地构建了pBAD/gⅢ-MAGE-A9原核表达质粒,获得了MAGE-A9蛋白,为该蛋白应用于肿瘤免疫治疗奠定了基础。
- 徐璐朱进仇镇宁李玉华冯振卿
- 关键词：黑色素瘤逆转录-聚合酶链反应基因克隆基因表达
- 抗EB病毒LMP2A单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
- 2014年
- 目的:利用杂交瘤技术制备抗EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)单克隆抗体并分析其免疫学特性。方法:以LMP第2和第5胞外区表位串联制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,制备抗LMP2A的单克隆抗体。通过ELISA、Western blot、免疫荧光、免疫组化、流式细胞术等方法鉴定单抗的免疫学特性。结果:获得1株稳定并持续分泌抗LMP2A单克隆抗体的稳定杂交瘤细胞株,所分泌的单克隆抗体5C12-C4-A6能够特异性识别鼻咽癌细胞膜表面的LMP2A蛋白。结论:本文制备了能够特异性识别鼻咽癌细胞膜表面LMP2A蛋白的单克隆抗体,为进一步进行鼻咽癌临床早期诊断和分子靶向治疗奠定了基础。
- 徐鑫唐小军熊林王欢李文杰高畅熊四平仇镇宁Tan Min HanVo Jess Honganh冯振卿陈仁杰
- 关键词：EB病毒LMP2A单克隆抗体免疫学特性
