刘转转
- 作品数：38 被引量：79H指数：4
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- 重组刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答被引量：3
- 2016年
- 目的观察不同浓度重组刚地弓形虫抑制蛋白(r Tg PRF)滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨其最佳免疫剂量。方法 50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组,免疫组分别用10、20、30μg和40μg r Tg PRF溶于20μl磷酸盐缓冲液(PBS)后滴鼻免疫,对照组用20μl PBS。分别于第0、14和21天滴鼻免疫小鼠,末次免疫后2周,颈椎脱臼处死小鼠。无菌取脾,采用CCK-8法测定脾淋巴细胞刺激指数(SI),酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脾淋巴细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度。结果经r Tg PRF刺激,30μg和40μg免疫组小鼠脾淋巴细胞SI均高于对照组(P均<0.05),且30μg组显著高于40μg组(P<0.05)。与对照组比较,所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ含量升高(P均<0.05),20、30μg和40μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2含量增加(P均<0.05),其中30μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ(P均<0.01)和IL-2含量最高(P均<0.01);所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IL-10含量与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 r Tg PRF滴鼻免疫小鼠可诱导脾淋巴细胞增殖和Th1型细胞免疫应答,以30μg剂量免疫效果最佳。
- 刘转转张波原飞张开利王婷郑葵阳
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫脾淋巴细胞免疫应答
- rTgPrx蛋白滴鼻免疫小鼠抗弓形虫感染作用被引量：3
- 2010年
- 目的观察重组弓形虫过氧化物还原蛋白(rTgPrx)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫感染作用。方法6周龄BALB/c小鼠75只,随机分为5组,实验组分别用10,20,30,40μg rTgPrx〔溶于20μL磷酸盐缓冲液(PBS)中〕滴鼻免疫小鼠3次,各间隔2周;对照组用等量磷酸盐缓冲液;末次免疫后14 d,用1×104个速殖子/只灌胃攻击全部小鼠;攻击后30 d,眼静脉丛采血,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA检测血清IgG和肠液IgA,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(IEL)和脾淋巴细胞,分离并计数肝、脑组织内弓形虫速殖子。结果40μg rTgPrx组血清IgG、IEL及脾淋巴细胞数量均高于对照组(P<0.05),40μg组肝、脑组织内虫荷(速殖子数)明显低于对照组及10,20和30μg组(P<0.05)。结论rTgPrx滴鼻免疫小鼠可诱导黏膜部位和系统免疫应答和抗弓形虫感染作用,40μg组的免疫保护作用优于其他剂量组。
- 王海龙刘转转殷国荣孟晓丽曹蕾刘美娜
- 关键词：刚地弓形虫黏膜免疫保护性抗原
- 重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合佐剂鼻内免疫小鼠诱导的抗体免疫应答
- 2013年
- 目的观察重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(rTgPGAM2)联合IL-2或IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的特异性抗体免疫应答。方法将48只6周龄BALB/c小鼠随机均分为6组:免疫组分别用500IU IL-2、1 000UIFN-γ、30μg rTgPGAM2、30μg rTgPGAM2+500IU IL-2、30μg rTgPGAM2+1 000UIFN-γ滴鼻免疫,抗原和佐剂均溶于20μl PBS中,对照组滴鼻20μl PBS。共免疫3次,第1次免疫与第2次免疫间隔14d,第2次免疫与第3次免疫间隔7d。末次免疫后第14d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测血清IgA和IgG及鼻咽冲洗液、阴道冲洗液、肠冲洗液sIgA水平。结果免疫组血清IgA和IgG水平高于对照组,以rTgPGAM2+IL-2组和rTgPGAM2+IFN-γ组升高更显著(F=18.653和8.853,P<0.05);免疫组小鼠鼻咽冲洗液、阴道冲洗液sIgA水平显著高于对照组(F=6.670和7.288,P<0.05),rTgPGAM2+IL-2和rTgPGAM 2+IFN-γ免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平显著高于对照组(F=4.557,P<0.05)。结论单独用rTgPGAM2或佐剂或两者联合免疫小鼠均能诱导黏膜特异性体液免疫应答,其中rTg-PGAM2联合IL-2佐剂能诱导产生更高水平的抗体。
- 杨燕萍王海龙孟晓丽刘转转刘宜升殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫黏膜免疫
- 人TRAIL基因原核表达载体的构建及鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的:克隆肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段(114～281氨基酸残基)并构建原核表达载体。方法:取健康人外周血提取总RNA,设计合成引物并引入EcoR I和Xho I酶切位点,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。结果:从外周血cDNA中扩增出501 bp的目的片段,测序结果证实成功构建重组质粒pGEX-6P-1/TRAIL。结论:成功构建TRAIL基因的原核表达载体pGEX-6P-1/TRAIL,为肿瘤细胞的凋亡研究提供理论依据。
- 刘转转郝林范涛贺厚光尤红娟汤仁仙韩从辉
- 关键词：TRAILRT-PCR克隆
- 刚地弓形虫抑制蛋白主要特性分析与抗原表位预测被引量：2
- 2015年
- 目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫抑制蛋白（ T. gondii profilin, TgPRF）的主要特性与抗原表位，筛选该蛋白的T／B细胞联合抗原表位。方法利用NCBI上的ORF finder, Prot-Param, SignalP, TMHMM. MotifScan. WoLF PSORT, PSORT Ⅱ, SOPMA, Bcepred. SYFPEITHI.NetCTL等生物信息学在线分析程序．结合Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件．分析并预测TgPRF蛋白的开放阅读框、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、亚细胞定位、二级结构、表面可及性、可塑性、亲（疏）水性及T/B细胞抗原表位。结果TgPRF基因的开放式阅读框为492个碱基的核苷酸序列。TgPRF蛋白由163个氨基酸组成，相对分子质量为17555．2，分子式为C764H^1160N204O258S7，等电点为4．40，有4个表面可及性参数≥1．9的区域、5个亲水性参数得分≥1．9的区域、3个柔韧性参数得分≥2的区域、10个翻译后修饰位点、8个潜在B细胞抗原表位和3个T／B细胞联合表位。结论TgPRF蛋白有多个优势抗原表位．为后续弓形虫免疫保护性的研究提供理论指导。
- 刘转转原飞张波郑葵阳张小凡马佳智
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白生物信息学抗原表位
- 弓形虫可溶性速殖子抗原联合IFNγ滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答被引量：3
- 2009年
- 目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合IFNγ滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,为研制弓形虫黏膜疫苗提供实验依据。方法将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20μg/只)+IFNγ(1 000 U/只)滴鼻,对照组以PBS滴鼻。免疫2次,间隔2周。分别于初次免疫后0、2、4、6、8、10、12周处死小鼠,分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(IELs)并计数;分离血清,用ELISA法测定IgA和IgG含量。结果免疫后实验组小鼠IELs和脾淋巴细胞均有增生,IELs和脾淋巴细胞数量均于初次免疫后4周达峰值,IEL数量4、6周显著高于对照组;脾淋巴细胞数量2、4周显著高于对照组。实验组小鼠血清IgG和IgA水平均于初次免疫后4周达峰值,IgG水平2、4周显著高于对照组,至12周时仍高于对照组;IgA水平4、6周显著高于对照组。结论STAg联合IFNγ滴鼻免疫BALB/c小鼠,可有效诱导黏膜及系统免疫应答,且可持续较长时间。
- 弓鸿飞刘红丽孟晓丽刘转转殷国荣
- 关键词：弓形虫可溶性速殖子抗原干扰素Γ滴鼻免疫
- 人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件;亲和层析法纯化重组蛋白;SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定。重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用。结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL。CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用。结论成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉党景东刘转转郑葵阳汤仁仙
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体克隆原核表达凋亡
- 刚地弓形虫Peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析
- 目的：对刚地弓形虫Peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。
方法：收集、纯化RH株弓形虫速殖子，提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和Xhol酶切位点，RT-PCR扩增编...
- 刘转转王海龙殷国荣马广源张建中凡振伟
- 关键词：刚地弓形虫原核表达免疫原性
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- 乙型肝炎病毒X基因促TRAIL诱导Huh7细胞凋亡的机制被引量：2
- 2012年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因(HBX)促肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白诱导人肝癌细胞Huh7凋亡的机制。方法应用脂质体转染法将pcDNA3.1-HBX、pcDNA3.1分别转染Huh7细胞,建立稳定表达HBX的细胞模型Huh7-HBX和空载体对照细胞模型Huh7-3.1;运用TRAIL蛋白分别作用Huh7-HBX细胞、Huh7-3.1及Huh7细胞后,采用CCK8、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测死亡受体4(deathreceptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)的表达情况;分光光度法检测细胞caspase8和caspase3活性。结果 RT-PCR及Western blot证实成功构建细胞株Huh7-HBX;CCK8和流式细胞术检测结果均显示Huh7-HBX细胞的凋亡率明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05);Western blot显示Huh7-HBX细胞的DR4、DR5的表达量明显高于Huh7-3.1及Huh7细胞(P<0.05);caspase活性检测结果显示,Huh7-HBX细胞caspase8及caspase3的活性明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05)。结论 HBX能够通过上调Huh-7细胞表面死亡受体DR4、DR5的表达,进而促进TRAIL蛋白诱导的细胞凋亡,为进一步研究HBX的促凋亡机制提供实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉李向阳刘转转汤仁仙郑葵阳
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体凋亡
