庞峰
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 蓝藻抗病毒蛋白N全长基因原核表达克隆的构建
- 2007年
- 目的构建蓝藻抗病毒蛋白（CV-N）全长基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中表达。方法根据GeneBank中CV-N的全基因序列，人工合成CV-N序列，进行PCR扩增。将扩增的PCR产物经双酶切后，克隆到原核表达载体pET30a（＋）上，构建重组表达载体pET30a—CV-N。重组质粒经核苷酸测序鉴定后，转化宿主茵BL21（DE3）诱导表达目的蛋白。结果CV-N基因可在大肠杆菌中高效表达，重组蛋白相对分子质量为11Kd，以包涵体形式存在。结论成功地构建了CV—N原核表达载体，为CV—N的纯化及其抗病毒的活性研究奠定了基础。
- 庞峰于红
- 关键词：基因原核表达
- 蓝藻抗病毒蛋白N的研究进展被引量：2
- 2006年
- 蓝藻抗病毒蛋白N(Cyanovirin-N)简称CV-N,相对分子质量11kD,含有101个氨基酸残基,主要是由β-叠片结构形成的链状蛋白,其中有2个内部二硫键。通过基因重组表达纯化的产物,其结构和活性均与天然CV-N相同。CV-N与人类免疫缺陷病毒(HIV)包膜糖蛋白120(gp120)具有高度亲和性,并能够阻断由包膜蛋白介导的细胞融合过程从而阻止病毒的扩散。CV-N不仅能够有效地抑制多个亚型的人类免疫缺陷病毒1(HIV-1),2(HIV-2),猴免疫缺陷病毒(SIV),而且对单纯疱疹病毒、流行性感冒病毒及其他一些包膜病毒也有抑制作用。CV-N的若干特性使其有可能成为一种非常有价值的新型抗病毒药物。
- 庞峰于红
- 关键词：基因重组抗病毒活性
- 蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性被引量：8
- 2007年
- 目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westenblot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白。结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同。经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%。Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应。将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好。结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础。
- 吕锐于红刘宗涛庞峰张文卿
- 关键词：基因原核表达蛋白纯化复性
