付汉江
- 作品数：53 被引量：90H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- RNA对蛋白质相互作用的调控
- 付汉江
- 非编码RNA克隆分析及其功能初步研究
- 近年来，不编码蛋白质的RNA分子一非编码RNA(noncodingRNA，ncRNA)被大量发现，与已知的mRNA、rRNA及tRNA不同，它们不直接参与蛋白质的合成。非编码RNA在各种生物中广泛存在，它的种类繁多，主要...
- 付汉江
- 关键词：核糖核酸克隆衰老胎肝
- 文献传递
- 肝癌早期预警和诊断miRNA标志物研究
- miRNA是一类小分子非编码RNA,能够在转录后水平参与调控蛋白质合成,进而影响细胞活动的多个环节.研究证实,多种miRNA参与了癌细胞的发生和发展,直接或间接地起着癌基因或抑癌基因的作用,在肿瘤中起着至关重要的作用.m...
- 曲秋月铁轶付汉江胡铮朱捷邢瑞云郑晓飞
- Poly(A)加尾-RNase H消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5'端tRNA半分子被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5'端转移RNA(tRNA)半分子的方法。方法提取应激诱导细胞RNA,用poly(A)加尾酶在RNA分子3'端加尾后,加入与待测tRNA的3'端部分序列互补的简并DNA探针杂交,经RNase H消化与DNA探针互补的tRNA序列,再由oligo(d T)n锚定引物进行逆转录获得互补DNA(c DNA),以5'端tRNA半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物,PCR扩增检测5'端tRNA半分子。结果经poly(A)加尾-RNase H消化-RT-PCR-电泳等步骤,可以实现对5'端tRNA半分子的检测分析。结论 poly(A)加尾-RNase H消化-RT-PCR法的建立实现了5'端tRNA半分子的简便、快速检测分析,为tRNA半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。
- 刘荻付汉江刘继来朱捷郑晓飞
- 关键词：RNASE
- 循环microRNA与肿瘤诊断被引量：14
- 2009年
- miRNA是一类小分子调控RNA,在肿瘤的发生与控制方面发挥着重要的作用.已经发现在肿瘤患者的循环核酸中存在源自肿瘤的miRNA分子,这一现象提示循环miRNA分子可能成为无创诊断癌症的一个有效的方法.本文综述了循环miRNA作为循环生物标志物在肿瘤诊断中的应用,以及该领域的最新研究进展.
- 铁轶付汉江郑晓飞
- 关键词：肿瘤
- 两种高效RNA干涉载体系统的构建及应用被引量：2
- 2005年
- 在真核细胞基因功能研究中,RNA干涉(RNAi) 已成为一种强有力的选择性沉默基因表达的实验工具. 建立一套可在哺乳动物培养细胞中高效、经济地表达siRNA的载体系统是RNA干涉研究的必要前提之一. 从HepG2细胞基因组DNA中克隆得到H1全长启动子(374 bp),以之为基础构建了两套RNA干涉载体系统,pSL和带有绿色荧光蛋白(EGFP) 标签的pESL,并对p53基因进行了相应的RNA干涉研究. 干涉质粒瞬时转染HepG2细胞后,分别利用半定量RT-PCR和蛋白质印迹检测p53表达水平. 与商品化载体pSilencerTM 3.1-H1 hygro相比,pSL和pESL对p53基因表达具有更高的干涉效率. 结果显示:干涉载体pSL和pESL能高效特异地下调目的基因表达,可作为哺乳动物中基因功能分析的有效工具.
- 杨明付汉江铁轶朱捷江红郑晓飞
- 关键词：RNA干涉P53基因
- 人源microRNA前体的全基因组预测
- 2011年
- microRNA(miRNA)是一类不编码蛋白的调控小分子RNA,在真核生物中发挥着广泛而重要的调控功能.由于miRNA的表达具有时空特异性,因而通过计算方法预测miRNA而后有针对性的实验验证是miRNA发现的一条重要途径.降低假阳性率是miRNA预测方法面临的重要挑战.本研究采用集成学习方法构建预测miRNA前体的分类器SVMbagging,对训练集、测试集和独立测试集的结果表明,本研究的方法性能稳健、假阳性率低,具有很好的泛化能力,尤其是当阈值取0.9时,特异性高达99.90%,敏感性在26%以上,适合于全基因组预测.采用SVMbagging在人全基因组中预测miRNA前体,当取阈值0.9时,得到14933个可能的miRNA前体.通过与高通量小RNA测序数据的比较,发现其中4481个miRNA前体具有完全匹配的小RNA序列,与理论估计的真阳性数值非常接近.最后,对32个可能的miRNA进行实验验证,确定其中2条为真实的miRNA.
- 应晓敏朱娟娟王小磊赵东升付汉江郑晓飞李伍举
- 关键词：MIRNA
- 大肠杆菌基因组水平蛋白质-RNA相互作用初步研究被引量：1
- 2014年
- 目的初步研究大肠杆菌中基因组水平的蛋白质-RNA相互作用(protein-RNA interactions,PRI)。方法通过RNA酶消化细菌裂解液,提取与蛋白质相互作用的RNA片段,构建cDNA文库,进行高通量测序,并通过生物信息学分析获得与蛋白质结合的转录本。结果获得了与蛋白质结合的3193条转录本,涉及2234个mRNA、47个sRNA(small regulatory RNAs)、39个tRNA、11个rRNA以及862个基因间区(intergenic region,IGR)。结论初步获得大肠杆菌中与蛋白质相互作用的转录本信息,为进一步开展PRI研究提供了支持。
- 徐淞陈垚文应晓敏付汉江田宝磊宋宜郑晓飞李伍举
- 关键词：SRNA大肠杆菌MCA
- 利用CRISPR/Cas系统构建在XRCC6内源基因插入Flag标签序列的HeLa细胞系被引量：2
- 2016年
- 目的:利用CRISPR/Cas系统在XRCC6基因5′端插入Flag标签序列,筛选XRCC6-Flag稳定表达的宫颈癌细胞(He La)株。方法:根据Gen Bank中XRCC6基因序列,设计XRCC6基因敲入的g RNA序列,构建入p Cas-Guide载体中,获得p Cas-XRCC6载体;设计XRCC6基因的同源臂序列,利用搭桥PCR方法将同源臂和Flag标签序列作为模板进行扩增,得到供体DNA片段,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p XRCC6-Donor载体;将上述2个载体共转染He La细胞,采用PCR、Western印迹等方法检测和筛选Flag标签序列插入XRCC6基因5′端的细胞株。结果:构建了p Cas-XRCC6和p XRCC6-Donor载体,筛选获得3株XRCC6-Flag稳定表达细胞株。结论:构建了XRCC6-Flag稳定细胞株,为研究XRCC6基因及其蛋白产物的生物学功能奠定了基础。
- 李瑞花付汉江沈远钟一然朱捷郑晓飞
- 串联MS2衣壳蛋白和MS2特异结合RNA表达载体构建及应用
- 2012年
- 目的构建体内研究RNA-蛋白相互作用的表达载体。方法利用MS衣壳蛋白可与MS2结合位点(MS2bs)RNA特异性结合的特点,通过设计特异引物,构建pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,以及表达MEG3非编码RNA的表达载体pcDNA3.0-MEG3V1-12XMS2bs。共转染细胞,进行RNA免疫沉淀,所得RNA进行实时定量PCR分析验证。结果成功构建了pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,实时定量PCR结果表明,与对照相比能明显富集MEG3V1非编码RNA分子。结论成功构建了体内研究RNA-蛋白质相互作用的表达载体,为RNA-蛋白相互作用研究提供了新的技术方法。
- 蒋太峰付汉江刘珊珊金英花朱捷李恩民郑晓飞
- 关键词：RNA结合蛋白
