马亚茹
- 作品数：21 被引量：38H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位表达条件的优化及其佐剂作用被引量：2
- 2008年
- 目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行免疫试验。结果可溶性重组大肠杆菌不耐热肠毒素(LTB)的表达量明显提高,纯化后蛋白含量达95%以上,经纯化的LTB作为三价流感裂解疫苗或gD抗原的佐剂免疫BALB/c小鼠,可提高小鼠血清及黏膜的抗体水平,且其效果与铝化剂及福氏佐剂相当或更高。结论优化了LTB的表达条件,且表达的LTB具有较强的黏膜免疫佐剂作用。
- 雷清黄思扬应莲芳梁凌宇马亚茹蒋琳
- 关键词：黏膜免疫纯化佐剂
- CHO细胞转染策略的分析及优化方法的建立
- 2012年
- 按嵌套设计进行细胞电敏感性实验,通过嵌套设计的方差分析了解电穿孔转染缓冲液的pH值、电场强度及电容与活细胞数量的关系。根据嵌套设计结果安排L9(34)正交设计,以最接近50%存活率为期望指标,同时分析主因素间的交互作用并确定最优转染方案。CHO-dhfr-细胞电穿孔转染的优化参数为pH 7.2的低离子强度Tris-Cl缓冲液,525 V/cm、75μF电击2次,间隔1 min。该方法不但确定了电穿孔转染CHO-dhfr-细胞的条件,而且适用于其它种类细胞的电穿孔转染条件的快速优化。
- 陆俭马亚茹李萍陈勇蒋琳
- 关键词：电穿孔法正交设计
- 鼠抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2008年
- 目的制备高中和活性的鼠抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体,并进行鉴定。方法用重组TNF-α免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗TNF-α单抗,纯化后,用间接ELISA法和微量细胞病变MTT法检测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸铵洗脱法测定单抗的相对亲和力指数,并进行类及亚类、细胞染色体核型、特异性及稳定性检测。结果筛选出7株分泌抗TNF单克隆抗体的细胞株,其中6株具有较高的中和活性和良好的稳定性,其细胞上清及腹水的中和效价分别为1∶40～1∶160和(1～3)×10-4,7株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,5H10株与其余6株有不同的抗原表位,相对亲和力指数为0.4～1.5mol/L。结论已成功制备具有高中和活性的鼠抗TNF-α单克隆抗体,为抗人TNF-α嵌合抗体的构建奠定了基础。
- 李萍蒋琳马亚茹鱼轲郭敏陆俭
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α单克隆抗体中和活性
- 人巨细胞病毒磷蛋白65及糖蛋白B在大肠杆菌中的高效表达、免疫原性研究及初步应用
- 2006年
- 实验成功的构建了含有pp65与gB主要抗原决定簇基因的表达质粒pET-pp65、pET-gB;表达产物通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹、间接酶联免疫等一系列鉴定试验进行了分析。表达蛋白经初步纯化后免疫BALB/c小鼠,经0、2、4周免疫三次,免疫后2、4、6周眼眶采血收集抗血清,进行中和试验和ELISA检测。动物试验表明两种表达蛋白具有免疫原性,并可在小鼠体内诱导产生特异性抗体,其中用重组gB蛋白免疫小鼠后得到的抗血清在体外试验中能抑制天然病毒感染细胞。同时将这两种表达蛋白作为诊断用抗原,对临床94份血清进行检测,证实pp65具有较好的特异性,为今后研制HCMV诊断试剂提供了科学依据。
- 蒋韬谢溱蒋琳雷清李启明马亚茹蒋烈沈心亮
- 关键词：免疫原性
- 弱化二氢叶酸还原酶基因增进人神经生长因子β亚基在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的通过弱化二氢叶酸还原酶基因(Dihydrofolate reductase,DHFR)增进人神经生长因子β亚基(β-Humannerve growth factor,β-hNGF)在CHO细胞中的表达。方法从质粒pUC18-β-NGF中扩增β-NGF基因,克隆至pMD18-T载体,构建克隆质粒β-hNGF/pMD18-T;经人工合成弱化SV40启动子与DHFR基因顺式表达元件,并插入pBudCE4.1质粒,构建质粒w-DHFR/pBudCE4.1;分别双酶切质粒β-hNGF/pMD18-T和w-DHFR/pBudCE4.1后连接,转化大肠杆菌Top10’,构建重组表达质粒β-hNGF/w-DHFR/pBudCE4.1,转染CHO-DHFR-后,筛选阳性细胞克隆,ELISA法检测阳性CHO细胞株表达β-NGF的水平,鸡背根神经节增殖法检测重组β-NGF的生物学活性。结果重组表达质粒β-hNGF/w-DHFR/pBudCE4.1经酶切和测序证明构建正确;共获得5株表达β-hNGF的CHO细胞株,且表达的β-NGF能使神经节出现明显的神经纤维,表达量为0.1μg/μl。结论通过弱化SV40启动子和DHFR基因,在CHO细胞中成功表达了β-hNGF基因,表达量增加且具有生物学活性。
- 陈勇李萍陆俭雷清马亚茹蒋琳
- 关键词：神经生长因子CHO细胞二氢叶酸还原酶
- 恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白ELISA定量检测方法的建立及其应用
- 2016年
- 目的建立恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白（25 KDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25）的ELISA定量检测方法。方法以双抗体夹心ELISA法为基础,建立Pfs25蛋白的ELISA定量检测方法,并对该方法进行重复性和准确性验证。用建立的方法检测不同重组菌株、CHO细胞中,以及经10 L发酵罐培养菌株纯化各阶段样品中Pfs25蛋白的表达量。结果建立的方法线性范围为0-1.6μg/ml,R2=0.984,检测灵敏度为0.032μg/ml,回收率为81%-119.0%,CV﹤15%。Pfs25-Pet42a/DE3表达后的Pfs25蛋白浓度在2.03-7.26μg/ml;Pfs25-p GAPZαA/GS115、Pfs25-p PICZαA/GS115和（α-Pfs25）8-p AO815/GS115表达后的Pfs25蛋白浓度分别为113、105和280μg/ml;3株Pfs25/CHO细胞表达的Pfs25蛋白浓度分别为106.11、116.89和155.01μg/ml。p PICZαAPfs25/GS115菌株发酵液中,Pfs25蛋白的增加呈先快后慢的趋势,72 h后,目的蛋白增加逐渐平缓;纯化洗脱液3个峰中Pfs25蛋白浓度分别为22.67、42.12和55.27μg/ml,流穿液中Pfs25蛋白浓度仅为0.096μg/ml。结论建立的Pfs25蛋白ELISA定量检测方法可用于疟疾疫苗研究中Pfs25蛋白的定量分析。
- 李刚马亚茹陈俏丽杨军陈勇蒋琳
- 关键词：蛋白含量酶联免疫吸附测定
- 重组人睫状神经营养因子生物学活性检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半定量检测;应用TF-1.CN5a.1细胞增殖法检测rhCNTF的活性;应用正常小鼠减重法,对rhCNTF的减肥生物学活性进行检测。并探索4种方法的实验条件及优缺点。结果上述4种方法均能用于rhCNTF的生物学活性测定,以TF-1.CN5a.1细胞增殖法及正常小鼠减重法结合使用最为有效。结论可联合使用TF-1.CN5a.1细胞增殖法和正常小鼠减重法,对重组rhCNTF进行质量控制。
- 李萍蒋琳马亚茹应莲芳卜晓萍
- 关键词：睫状神经营养因子生物学活性
- 恶性疟原虫膜蛋白Pfs25在毕赤酵母中的组成型表达被引量：6
- 2011年
- 目的:Pfs25蛋白是传播阻断型恶性疟疾疫苗的侯选抗原,在毕赤酵母中表达Pfs25蛋白,并对表达产物进行鉴定。方法:参照GenBank中公布的pfs25基因序列,通过毕赤酵母喜好密码子分析人工合成目的基因;采取定向克隆策略构建重组表达质粒pfs25/pGAPZαA,经BstXⅠ线性化,电转染法转化酵母菌株GS115,在Zeocin抗性的筛选培养基上获得表达目的基因的pfs25/pGAPZαA/GS115重组酵母菌,SDS-PAGE和Western印迹检测表达产物;通过在YPD培养基上传代培养和目的基因表达,验证重组菌株的遗传稳定性。结果:在毕赤酵母中表达了Pfs25蛋白,且重组菌株遗传性质稳定。结论:为研制基于Pfs25蛋白的传播阻断型恶性疟疾疫苗奠定了基础。
- 陈勇雷清刘晓马亚茹卜晓萍蒋琳
- 关键词：毕赤酵母组成型表达
- 抗KDR-Fc杂交瘤细胞系的建立
- 2005年
- 用杂交瘤技术建立抗KDRFc的杂交瘤细胞系,以KDRFc抗原免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法检测和有限稀释法克隆培养,再经稳定性检测、效价检测,筛选出分泌抗KDRFc单克隆抗体的杂交瘤细胞.得到了10株能持续分泌抗KDRFc的单克隆抗体的细胞株,其中3株分泌的单抗具有较高的生物活性、特异性和稳定性.
- 朱学泰谢溱马亚茹马瑞君
- 关键词：血管内皮生长因子单克隆抗体杂交瘤细胞系
- 鼠源神经生长因子临床受试者血清抗体检测被引量：5
- 2002年
- 目的:采用酶联免疫测定法(ELISA)检测鼠神经生长因子临床用药病人的血清抗体。方法:通过直接标记鼠神经生长因子(NGF),建立了一种检测人抗鼠NGF抗体的检测方法;即双抗原夹心法检测人抗鼠NGF抗体。将此方法应用于检测临床用药病人的血清抗体,并与间接法进行了比较。结果:双抗原夹心法检测94份正常人血清,无一份假阳性,在检测临床病人血清时,亦得到了较好的结果。而间接法的非特异性则达10％。结论:双抗原夹心法方法可靠,可用于鼠源神经生长因子临床试验;血清样本检测证明临床实验病人血清抗鼠NGF抗体含量与正常人无显著差异。
- 王军志蒋琳饶春明谢溱高凯马亚茹沈心亮
- 关键词：抗体酶联免疫测定法双抗原夹心法
