彭鑫
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：广东药学院生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CRISPR-Cas9系统定向编辑TCR基因的sgRNA筛选被引量：2
- 2015年
- 为构建靶向T细胞抗原受体(T Cell Receptor,TCR)基因的CRISPR-Cas9基因组编辑系统,基于p X458质粒构建靶向TCR基因β链C区的CRISPR-Cas-sgRNA质粒,将其转染Hep G2细胞系,用流式细胞术检测转染效率;转染48 h后提取Hep G2细胞基因组DNA,扩增含有编辑位点的片段,测序分析该片段的峰图改变;对出现双峰的扩增片段做T-A克隆后测序分析,确定基因编辑发生的位置,并结合转染效率计算基因编辑效率.结果表明,成功构建含有3种sgRNA序列(N1、N2、S1)的p X458-sgRNA质粒,其转染效率分别为38.5%(N1)、39.7%(N2)和24.2%(S1);基因组PCR产物测序分析发现,S1组扩增片段在打靶位置出现杂峰;T-A克隆测序发现,20克隆有4个发生了基因编辑(20%),结合转染效率(24.2%)可知,编辑效率约为83%.可见,本文成功构建靶向TCR基因的CRISPR-CassgRNA质粒,并鉴定出基因编辑效率较高的一种sgRNA序列.
- 邵红伟陈辉彭鑫徐畅张广献黄树林
- 关键词：T细胞抗原受体靶向基因组
- 肿瘤患者偏移的T细胞TCRBV表达谱在自体CIK细胞中的恢复
- 2015年
- 目的研究肿瘤患者自体PBMC经体外诱导培养的CIK细胞群TCRBV亚家族表达的变化。方法Ficoll密度梯度离心法分类人体外周血单核细胞（PBMC）,经IFN-γ、OKT-3以及IL-2诱导培养,Trizol试剂提取总RNA,RT-PCR半定量分析24个TCRBV亚家族表达情况,流式分选平台分选CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞亚群。结果诱导培养后的CIK中,分化的CD3＋CD56＋细胞亚群比例占12.6%~41.7%。PBMC中弱表达或缺失的TCRBV亚家族,在CIK中上调或恢复表达。CIK细胞群中,CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞亚群克隆组成无明显差异。结论肿瘤患者自体PBMC体外诱导培养CIK细胞后,部分表达偏移的TCRBV亚家族能恢复表达,表明部分受损或被抑制的T细胞克隆在CIK培养中被激活并增殖。
- 彭鑫王腾邵红伟黄树林
- 关键词：CIKT细胞RT-PCR
- 游离脂肪酸混合物对肝细胞脂毒性及脂代谢相关基因表达的影响被引量：8
- 2014年
- 目的:研究游离脂肪酸(FFA)混合物对肝细胞L-02的脂毒性及脂代谢相关基因表达的影响。方法:正常肝细胞L-02分别用正常培养基和0.5、1、2 mmol/LFFA混合物(油酸和软脂酸的比例为2:1)培养24 h后,尼罗红染液室温避光染色,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪确定细胞内脂质堆积情况。组织细胞酶法测定试剂盒测定细胞内甘油三酯含量。MTT法分析细胞存活率,Annexin V-PI凋亡检测试剂盒分析肝细胞的凋亡情况,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒分别检测培养液中ALT和AST活性。实时定量PCR技术检测脂代谢相关的脂肪分化相关蛋白(ADRP)和固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)的mRNA表达情况。结果:各浓度FFAs混合物均可剂量依赖性增加肝细胞脂肪堆积和肝细胞甘油三酯含量,且1 mmol/LFFA混合物可增高肝细胞的甘油三酯含量2.6倍,与非酒精性脂肪肝病人的变化基本相同。2 mmol/LFFA混合物可降低肝细胞L-02细胞存活率并诱导细胞凋亡,而0.5 mmol/L和1 mmol/LFFA混合物对细胞无明显影响。与对照组相比,各浓度FFA混合物对细胞上清中ALT和AST活性无明显影响。1 mmol/LFFA混合物作用后可分别上调肝细胞的ADRP和SREBP-1 mRNA的表达2.660和2.758倍。结论:FFA混合物可诱导肝细胞L-02脂肪变性且2mmol/LFFA混合物可造成轻度细胞损伤。脂代谢相关基因ADRP和SREBP-1表达上调与FFA混合物诱导的脂肪变性相关。
- 王辉陈骁项夏霖彭鑫王苑芳刘填桂黄树林邵红伟
- 关键词：非酒精性脂肪肝病游离脂肪酸脂毒性脂肪分化相关蛋白
- HRM法检测肿瘤细胞PTEN基因突变实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的:探索高分辨率熔解曲线(HRM)法检测肿瘤细胞系PTEN基因突变中的应用。方法:采用HRM法初筛肿瘤细胞系PTEN的突变,测序验证HRM筛选结果,TA克隆测序进一步明确突变情况。结果:HRM初筛出Jurkat细胞PTEN基因存在突变,测序结果与HRM结果一致,TA克隆测序确定Jurkat细胞系PTEN基因为缺失突变。结论:HRM法可准确筛选肿瘤细胞系中PTEN基因突变,适于肿瘤细胞PTEN基因突变筛选。
- 贺华王腾彭鑫苏畅邵红伟黄树林
- 关键词：HRM突变PTENTA克隆
