刘凯胜
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HSP90抑制剂在制备肺癌或食管癌治疗药物的应用
- 本发明实施例公开了生物医药技术领域，尤其涉及一种HSP90抑制剂在制备肺癌或食管癌治疗药物的应用，其中，HSP90抑制剂包括白藜芦醇或虎杖苷。HSP90抑制剂通过靶向HSP90抑制肺癌或食管癌的分子机制，为白藜芦醇的应用...
- 刘凯胜苏苑张卓王一飞任哲
- 人热休克蛋白90AB1-cDNA基因克隆及其原核表达载体的构建以及蛋白表达纯化
- 本研究旨在克隆人热休克蛋白90AB1基因,构建其原核表达载体pET28a-hHsp90AB1,为研究hHsp90AB1的基因治疗奠定实验基础,表达纯化得到蛋白为后续的Hsp90AB1抑制剂体外筛选提供构效关系的模型。按I...
- 刘凯胜刘忠王绍祥王蕊刘劲芸张嘉萱王一飞
- 关键词：生物化学与分子生物学原核表达载体表达纯化
- 文献传递
- 人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化被引量：2
- 2011年
- 应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor nec-rosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果表明,在39℃条件下,OD600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白的表达量最高。该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 张嘉萱卢嘉欣王蕊赵振岭韩波彭鑫磊陈伟刘忠任哲王绍祥马岩岩刘凯胜王一飞
- 关键词：克隆原核表达BL21
- 人热休克蛋白90AB1基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化
- 2011年
- 通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体外扩增,胶回收纯化hHsp90AB1。将hHsp90AB1及pET-28a(+)质粒经NdeⅠ和SalⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化DH5α,经复苏后,在含卡那霉素的LB固体养基上筛选出阳性克隆。挑取LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即pET28a-hHsp90AB1体外重组成功,命名为pET28a(+)-hHsp90AB1。重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明Hsp90AB1蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白13%。接种到18 L发酵罐中试发酵,表达产物经Ni-NTA凝胶亲和层析,蛋白纯度达到98%。
- 刘凯胜王绍祥刘忠张嘉萱张庶民王一飞
- 关键词：克隆原核表达纯化
- 硫氧还蛋白还原酶抑制剂MF通过Trx-ROS途径诱导HeLa细胞凋亡
- 硫氧还蛋白还原酶是调节细胞内氧化还原平衡的关键分子,通过多种途径调控细胞生长和增殖,是国际上高度关注的新型抗肿瘤靶标。TrxR抑制剂MF可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,研究其作用机制可为寻找和开发TrxR靶点抗宫颈癌药物提...
- 刘忠王蕊王绍祥刘凯胜张嘉萱刘劲芸王一飞
- 关键词：硫氧还蛋白还原酶细胞凋亡抗肿瘤
- Hsp90抑制剂17-AAG作用于细胞后可诱导其突变蛋白的表达
- 抑制热休克蛋白Hsp90是一种非常重要的分子伴侣,它为癌症治疗提供了一个发展迅速、具有潜在优势的研发平台。人Hsp90蛋白包括四种标准亚型,分别为Hsp90α、Hsp90β、Grp94和Trap-1。我们在研究Hsp90...
- 王绍祥王晓刘忠王蕊刘凯胜张嘉萱王一飞
- 关键词：肿瘤HSP9017-AAG突变
- 人Hsp90α基因克隆、中试发酵及生物信息学分析被引量：3
- 2011年
- 目的:克隆获得人热休克蛋白90α(Hsp90α)基因,构建其原核表达载体,分离纯化重组蛋白,为Hsp90抑制剂的体外筛选奠定基础。方法:TRIzol Reagent法提取K562细胞总RNA,通过RT-PCR获得Hsp90α-cDNA。以该cDNA为模板PCR扩增Hsp90α基因,目的基因和质粒pET28a(+)经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接酶切片段,将重组DNA转化DH5α,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导,经条件优化后进行中试发酵、纯化以及Western blot鉴定。结果:原核表达载体pET28a(+)-Hsp90α成功构建,可在Rosetta(DE3)中正确表达,中试发酵收菌574g且表达产物以可溶性形式存在,纯化产物纯度为97%。结论:利用分子克隆技术建立了Hsp90α基因的原核表达和中试发酵的条件,为更深入地研究其在抗肿瘤治疗中的作用打下基础。
- 刘凯胜邱贤秀王一飞
- 关键词：HSP90Α克隆原核表达生物信息学
