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薄洪: 作品数：25 被引量：121H指数：5; 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>

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建立微量空斑减少方法测定人血清H7N9禽流感病毒中和抗体水平被引量：1: 2016年; 目的建立微量空斑减少的方法测定人血清中H7N9禽流感病毒中和抗体水平。方法确定H7N9禽流感病毒感染MDCK细胞后形成空斑数目,进行病毒定量,系列稀释待测抗体,加入已定量病毒,计算病毒被抗体中和后空斑减少数目,确定中和抗体的滴度。实验中以H7N9病例血清测定该方法的灵敏度,以其他亚型流感病毒抗体阳性人群血清评估微量空斑减少方法的特异性,同时将该方法与微量中和实验进行比较分析。结果微量空斑减少方法不仅能够检测H7N9禽流感病例中和抗体水平,而且该方法检测季节性流感病毒抗体、H5N1和H9N2禽流感病毒抗体与H7N9禽流感病毒抗体之间均无交叉反应,与微量中和实验检测结果相一致。结论建立的微量空斑减少方法具有较好的灵敏度和特异性,能够用于人血清H7N9禽流感病毒中和抗体的检测。; 薄洪董丽波张烨董婕邹淑梅高荣保王大燕舒跃龙; 关键词：禽流感病毒中和抗体

去氧胆酸钠裂解流感病毒的效果研究被引量：10: 2003年; 目的　研究去氧胆酸钠对流感病毒最佳的裂解条件。方法　流感病毒在不同浓度的去氧胆酸钠作用一定时间后 ,经蔗糖梯度密度离心纯化 ,制备出流感裂解疫苗样品。以电镜观察病毒裂解情况和血液凝集反应 ,测定病毒效价作为评价指标 ,确定最佳裂解条件。结果　裂解纯化后的样品经电镜、SDS PAGE检测表明病毒颗粒完全裂解 ,裂解后的血凝效价收率约为 80 %。结论　 0 .8%的去氧胆酸钠作用 12 0min可使流感病毒达到最佳裂解效果。; 戚凤春王敏文薄洪郭桥范宇红王志刚张玉辉阎长太盛军; 关键词：去氧胆酸钠裂解血凝素流感病毒

反向遗传学技术在疫苗研究的进展: 2010年; 本文通过反向遗传学技术的基本原理，发展历史和反向遗传学技术在疫苗研究方面的进展与应用，重点介绍了反向遗传学技术在流感病毒疫苗方面的应用。; 薄洪舒跃龙; 关键词：疫苗流感病毒

2014—2021年我国禽流感相关环境中低致病性H3和H4及H6亚型禽流感病毒分布和基因特征分析: 2022年; 目的分析2014—2021年我国禽流感相关环境中低致病性H3、H4和H6亚型禽流感病毒的特征。方法在31个省、自治区和直辖市设立监测点,开展禽流感相关环境样本的采集、甲型流感病毒核酸检测、病毒分离、深度测序和致病性相关分子位点的分析,确定其中常见的H3、H4和H6亚型禽流感病毒在不同地区、不同场所和不同样本类型中的分布及病毒变异特征。结果共采集388645份样本。低致病性H3(0.56‰)和H6亚型(0.53‰)的分离阳性率高于H4亚型(0.09‰);H4亚型病毒在活禽市场的分离阳性率高于其他场所,差异有统计学意义;H3和H6亚型病毒在污水样本的分离阳性率高于其他样本类型,差异有统计学意义;H3、H4和H6亚型病毒南方地区分离阳性率高于北方地区,差异有统计学意义;12月份是病毒最为活跃的时间。致病性相关分子位点的分析显示,H3、H4和H6亚型病毒结合禽流感病毒受体,与致病性增强相关的某些基因位点发生了突变。结论低致病性禽流感H3、H4和H6亚型病毒在活禽市场和污水中具有较高的分离阳性率,3种亚型病毒的分布具有明显的地域特征和季节性,基因特征仍表现为低致病性禽流感特点。; 薄洪张烨董婕李希妍刘佳谭敏赵翔王大燕; 关键词：禽流感病毒基因特征

共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定被引量：4: 2009年; 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA。将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Western-blot方法均检测到M1和HA基因的表达。共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础。; 郭建强姚立红陈爱珺徐一贾润清薄洪董婕周剑芳舒跃龙张智清; 关键词：血凝素腺病毒载体

H9N2禽流感病毒反向遗传系统的构建和鉴定被引量：2: 2009年; 目的建立H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统，为人禽流感疫苗研制以及传播和致病机制等方面的研究提供技术平台。方法使用RT-PCR方法获得禽流感H9N2亚型病毒A，Guangzhou／333／99（H9N2）的8条全长基因节段，然后克隆到双表达载体pCI-pol I中，获得H9N2禽流感病毒的8个基因节段的8质粒系统。将构建好的8质粒共转染293T细胞后，收获上清接种鸡胚，然后对鸡胚尿囊液进行鉴定；对拯救的病毒进行鉴定。结果8质粒系统转染293T细胞后可以成功拯救出H9N2禽流感病毒，血凝效价可达到2^9／50μl，生长特性与野生型病毒类似。结论成功建立了H9N2禽流感病毒反向遗传系统。; 刘丽琦董婕薄洪温乐英辛丽张烨李梓董丽波王敏郭元吉舒跃龙; 关键词：禽流感遗传学技术

Peramivir体外抗禽流感H7N9病毒有效性研究被引量：2: 2015年; 目的研究Peramivir体外抗禽流感H7N9病毒效果方法采用体外抗病毒实验方法和流感病毒神经氨酸酶抑制实验并结合病毒序列分析的方法结果体外抗病毒实验发现三个抗病毒药物peramivir,oseltamivir和zanamivir针对禽流感病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）的抗病毒有效浓度EC50分别是0.74±0.24 μmol/L,25.5±16.0μmol/L,29.4±6.2μmol/L,但是针对A/Shanghai/1/2013（H7N9）的有效浓度分别是74.4±18.7 μmol/L,＞1000 μmol/L,和37.1±11.9 μmol/L,各自有100倍,大于40倍和1.2倍的升高.体外神经氨酸酶抑制实验发现三种药物对两个实验病毒均是敏感的.序列分析发现A/Shanghai/1/2013（H7N9）神经氨酸酶基因有R292K的突变,这种突变公认是oseltamivir耐药的表现.结论在MDCK细胞上三种抗流感病毒药物均表现出对病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）的有效性.但针对A/Shanghai/1/2013（H7 N9）病毒peramivir,oseltamivir有一定的抗性.判断一个病毒是否是耐药毒株需要结合神经氨酸酶抑制实验、序列分析和药物的抗病毒实验结果来综合分析.; 董婕高荣保董丽波周剑芳蓝雨邹淑梅郭俊峰张烨薄洪舒跃龙; 关键词：流感病毒A型抗药性

H10N8禽流感病毒Real time RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2015年; 目的建立针对H10N8禽流感病毒特异、灵敏的real time RT-PCR检测方法.方法通过比对现有H10N8病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）全长基因序列,分别针对HA和NA基因设计引物和探针6套（P1-P6）和3套（P7-P9）,建立鉴别H10N8禽流感病毒real time RT-PCR方法,分别对筛选的引物进行特异性、灵敏性和临床标本检测适应性等评价.结果特异性检测显示6套针对HA的引物和探针中的3套能够检测H10N8病毒,其中2套（P5和P6）与其他非H10亚型流感病毒无交叉反应;3套针对NA的引物和探针均能检测H10N8病毒,其中2套（P7和P9）与其他非N8亚型流感病毒无交叉反应.灵敏性检测显示,P5和P6以及P7和P9均能检出最大稀释度为109的H10N8病毒RNA,重复性显示4组的Ct值CV均＜3％.使用P6和P9对3例H10N8病例呼吸道标本份进行real time RT-PCR检测均为阳性,其中2例病毒分离阳性,4份病毒分离阳性的活禽相关环境样本检测均为阳性.结论建立了H10N8禽流感病毒荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.; 薄洪高荣保李晓丹张烨邹淑梅朱云刘琳玉王大燕舒跃龙; 关键词：逆转录聚合酶链反应

青海湖周边家禽相关环境标本中H5N1亚型禽流感病毒特征分析被引量：1: 2016年; 目的了解我国青海湖周边家禽中分离到的高致病性H5N1亚型禽流感病毒的抗原性和基因特性。方法将青海湖周边野鸟和家禽的环境标本采集处理后。接种SPF鸡胚分离病毒．将红细胞凝集阳性的标本通过real-time RT-PCR进行型别鉴定和亚型分析。将H5N1检测阳性的标本选取部分进行二代序列分析和抗原性分析。结果2013年1-9月问采集的家禽相关环境标本中共分离到19株高致病性H5N1亚型禽流感病毒，集中在1-3月。对7株病毒进行了全基因组序列分析和抗原性分析显示，血凝素基因进化树显示其中除A／Environment／Qinghai／XN02032／2013属于clade7．2分支病毒以外，其余6株属于clade2．3．2．1C分支。神经氨酸酶基因也显示该毒株与其他6株分属于两个不同的分支；抗原分析显示该毒株与所有参考血清低反应，另外6株病毒是A／Barnswallow／HongKong／D10—1161／2010的类似株。结论青海湖周边地区在2013年1-3月环境相关标本中检测到高致病性H5N1亚型禽流感病毒，属于clade2．3．2．1和clade7．2分支病毒。这种高致病性H5N1亚型禽流感病毒多个分支共同流行的趋势提示加强这一地区野鸟和家禽相关环境病原体监测的重要性。; 董婕董丽波张烨薄洪黄维娟王大燕舒跃龙; 关键词：高致病性禽流感 H5N1亚型进化分析抗原分析

流感病毒M2蛋白胞外区与铜绿假单胞菌外毒素A融合蛋白的表达及其免疫原性研究被引量：5: 2010年; 本研究构建了表达甲型流感病毒M2蛋白胞外区与铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)融合蛋白的原核表达载体,根据铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)核苷酸序列设计突变PCR引物并实施突变PCR,以获得PEA基因编码区第553位氨基酸密码子缺失的突变PEA(ntPE),从而产生无毒性的PEA突变基因,然后用合成的M2e编码区替换ntPE基因中的非必需区Ib,产生ntPE-M2e嵌合基因。将该嵌合基因导入pET表达载体以构建原核表达载体,将表达产物胶回收后与弗氏不完全佐剂联合皮下免疫BALB/c小鼠,终免两周后用5个LD50流感病毒A/PR/34/8株进行攻击。取动物血清作ELISA并取脾脏作ELISPOT试验结果表明,免疫组可以诱导小鼠产生抗M2e特异性抗体反应和细胞免疫反应并能够抑制病毒在肺内的复制。本研究为甲型流感病毒广谱疫苗的进一步研发打下了基础。; 徐一姚立红陈爱珺郭建强刘晓宇薄洪刘丽琦舒跃龙张智清; 关键词：铜绿假单胞菌外毒素A 免疫原性

薄洪

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