李金松
- 作品数：47 被引量：156H指数：8
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人GⅡ.14诺如病毒VLP抗原性及组织血型抗原结合特征
- 2024年
- 本研究旨在制备人GⅡ.14诺如病毒的(Norovirus,NoV)病毒样颗粒(Virus⁃like particle,VLP),探索其抗原性与组织血型抗原结合的特征。利用杆状病毒系统表达人GⅡ.14 NoV VP1蛋白,通过超速离心和分子筛层析纯化VLP;将VLP免疫动物制备兔多抗血清,通过免疫印迹(Western blot,WB)、酶联免疫吸附(ELISA)进行抗原性评价及多抗功能验证;利用唾液结合实验检测人GⅡ.14 VLP的糖结合特征;通过蛋白序列及结构比较分析GⅡ.14 P蛋白潜在的糖结合位。纯化获得人GⅡ.14 VP1蛋白,电镜观察显示可以形成结构较为均一的VLP;制备的兔多抗能与GⅡ.14 VLP特异性结合,与检测的其他基因型VLP没有交叉反应;唾液结合实验表明GⅡ.14 VLP与人A/B/O/AB型别唾液都有较好的结合;序列和结构分析显示GⅡ.14 P蛋白模拟结构与GⅡ.9最为接近,具有与GⅡ.9以及流行株GⅡ.4等相似的潜在糖结合区。本研究表明GⅡ.14具有较为广泛的唾液结合特性,通过序列比对和结构学方法分析了GⅡ.14潜在的受体结合机制,为不同型别NoVs的流行监测提供了更多依据。
- 欧阳瑄泽柴鹏弟宋敬东靳淼李利利李金松孙晓曼段招军
- 关键词：诺如病毒病毒样颗粒
- 人博卡病毒VP2蛋白的原核表达及血清学检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 目的获得高表达量的人博卡病毒（HBoV1、HBoV2）VP2蛋白，建立血清学检测方法。方法按照大肠埃希菌密码子使用偏性，对HBoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化合成。将合成的目的基因克隆至表达载体pET30a，构建重组表达质粒pET30a-VP2，转化大肠埃希菌BL21（DE3），使用IPTG诱导表达并摸索最佳表达条件；粗提取蛋白进行Ni亲和层析纯化后建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA），进行临床血清标本筛查，分析人群HBoV1、HBoV2感染情况。结果优化合成的HBoV1、HBoV2VP2基因正确连接至pET30a载体，开放阅读框正确，用1mmol／LIPTG过夜诱导表达（25℃）得到高表达量的VP2蛋白，目的蛋白主要以包涵体的形式存在。粗提取蛋白经Ni—NTA亲和层析，在pH4．5时获得较理想的纯化蛋白，以其为抗原建立ELISA检查方法，筛查临床血清标本IgG抗体水平，结果显示健康儿童HBoV1阳性率为62．2％，HBoV2阳性率为55．5％，混合感染率为37％。结论本研究成功将H-BoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化，得到了较高的蛋白表达量，所建立的ELISA法可以应用于HBoV1、HBoV2人群血清流行病学调查。
- 蒿叶霞高基民金玉李晓乐李金松谢志萍敖元云陈惜倩陈克娜段招军
- 关键词：人博卡病毒密码子酶联免疫吸附试验
- 人A组G2P[4]型轮状病毒的分离培养和鉴定被引量：1
- 2022年
- 目的对我国轮状病毒A组G2P[4]流行株进行分离培养和鉴定。方法采用轮状病毒抗原胶体金法筛查56份病毒性腹泻患儿粪便标本,对阳性样本VP7和VP4基因测序确定其G和P基因型别,并接种至MA-104细胞,持续传代。运用SDS-PAGE电泳、实时荧光定量PCR、间接免疫荧光、嗜斑实验和电镜等技术进行鉴定。结果检出轮状病毒阳性样本46份,测序确定G2P[4]型2株,细胞培养盲传5代,嗜斑纯化后G2P[4]型毒株RNA PAGE电泳图呈DS-1株轮状病毒的(4:2:3:2)形态,电镜下呈车轮状形态,轮廓清晰,病毒滴度随时间变化逐步上升。结论成功从粪便样本中分离和培养出G2P[4]型A组轮状病毒。
- 高升辉王明雯李利利李丹地宋敬东王雅璐毛彤瑶吴建军李金松段招军
- 关键词：轮状病毒PAGE电泳电镜
- GII.8和GII.9型诺如病毒P蛋白糖结合特征研究被引量：3
- 2023年
- 目的了解GII.8和GII.9型诺如病毒P蛋白的糖结合特征。方法利用大肠杆菌系统获得GII.8和GII.9诺如病毒P颗粒蛋白,通过寡糖和唾液结合实验,研究P颗粒蛋白与组织血型抗原等糖的相互作用,再采用序列比对和结构比较,分析GII.8和GII.9糖结合位点的序列和结构特征。结果GII.8 P蛋白与所检测的寡糖无明显结合,与部分人A/B/O型别唾液样本有结合。GII.9 P蛋白结合H双糖,与人A/B/O型别唾液有很好结合。序列和结构分析均显示GII.8 P蛋白具有与GIII.9相似的潜在糖受体结合位点,其位点与流行株GII.4等型别的糖受体区区相近。结论非流行株GII.8和GII.9 P蛋白与不同组织血型抗原的结合能力不同,提示可能会造成流行的差异,需要对非流行株开展持续的分子监测。
- 吴铮苏韫曦丛鑫魏宇航孔翔羽靳淼李丹地李金松孙晓曼段招军
- 关键词：诺如病毒
- 2019年我国5岁以下腹泻住院患儿星状病毒感染的流行特征分析被引量：2
- 2022年
- 目的了解2019年我国5岁以下腹泻住院患儿星状病毒(Astrovirus,AstV)感染的流行特点,为AstV腹泻防控提供参考。方法收集2019年各监测哨点医院的5岁以下腹泻住院患儿粪便样本及临床信息。采用RT-PCR检测AstV,描述AstV感染的流行特征。结果采集5岁以下腹泻住院患儿粪便标本共4918份,检测4531份,AstV阳性检出率为5.30%,四川省AstV阳性检出率最低(1.23%),甘肃省AstV阳性检出率最高(14.36%);AstV在男性患儿和女性患儿中阳性检出率分别为5.14%和4.52%,无明显性别差异(P>0.05);AstV感染无明显年龄、城乡差别和季节特征(P>0.05);AstV阳性病例中,常见临床表现为腹泻伴呕吐等症状,腹泻次数多为0~2次,粪便性状常为水样便。结论AstV是我国5岁以下腹泻住院患儿的主要病原之一,临床诊疗时须予以考虑,需持续开展监测。
- 王明雯高升辉孙晓曼李静欣李金松李丹地段招军
- 关键词：病毒性腹泻星状病毒
- 一株人轮状病毒G2P[4]型毒株的近似全基因组进化分析
- 2022年
- 目的分析轮状病毒G2P[4]型2020BJ株的近似全基因组进化特征。方法运用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)进行轮状病毒基因组扩增,将扩增产物测序,对所得序列进行系统进化和同源性分析。结果获得人轮状病毒G2P[4]型2020BJ株近似全长的11个节段核酸序列,序列分析表明其为G2-P[4]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2基因型(DS-1-Like);进化分析表明与日本、印度、孟加拉及意大利等国家毒株亲缘关系较近;亲缘关系较近的毒株间抗原表位的氨基酸存在差异。结论与2020BJ亲缘关系较近的5株G2P[4]型轮状病毒VP7和VP4的抗原表位的氨基酸存在差异,可能导致流行特征不同,应加强轮状病毒监测。
- 高升辉李利利李丹地朱曦王萌璇王明雯吴建军李金松
- 关键词：轮状病毒基因型全基因组系统进化树
- 儿童不明原因急性重症肝炎的监测和应对
- 2022年
- 自2022年4月份以来,多个国家向世界卫生组织(WHO)报告了儿童不明原因急性重症肝炎病例(已排除由肝炎病毒A-E和其它导致急性肝炎的常见病因)较以往大幅增加。这些病例高度散发,发病人群为16岁以下儿童及青少年,病情进展快、症状重。早期病例约10%预后不佳。WHO认为此次不明原因急性重症肝炎事件已成为全球关注的暴发事件。欧盟疾控中心(ECDC)评估其为"令人担忧的公共卫生事件"。本文就此次全球儿童不明原因急性重症肝炎事件的进展、监测和应对等进行综述,供相关领域学者及公共卫生机构参考。
- 李金松段招军
- 关键词：急性肝炎腺病毒新型冠状病毒
- 人A组轮状病毒VP6单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立和验证
- 2025年
- 目的制备人A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP6单克隆抗体(简称单抗),建立双抗体夹心ELISA检测方法,并对方法进行验证及初步应用,为我国RVA的快速诊断、流行病学调查及病毒监测提供更多选择。方法利用杆状病毒系统表达纯化人RVA G9P[8]株VP6蛋白,免疫5只雌性BALB/c小鼠,制备单抗,间接ELISA法测定单抗的半数效应浓度(EC_(50)),Western blot和间接免疫荧光试验测定单抗与RVA的结合活性。利用单抗配对,其中1株用于包被,另1株进行HRP标记用于检测,建立双抗体夹心ELISA检测方法,并进行灵敏性、特异性和精密性验证。取RV临床粪便样本,分别利用Oxoid ProSpecT商品化试剂盒和建立的双抗体夹心ELISA法进行检测,比较检测结果的符合率。结果纯化得到可溶的VP6蛋白,纯度达90%以上,表达量约为4.5 mg/L。筛选获得2株RVA VP6单抗,命名为1L3和4F22,与VP6蛋白结合的EC_(50)分别为1.777和3.748 ng/mL,2株单抗与RVA可很好的结合。以1L3单抗为捕获抗体,HRP标记的4F22单抗为检测抗体,建立了人RVA双抗体夹心ELISA检测方法。该方法对RVA VP6蛋白的最低检出量为156.25 ng/mL;2株单抗与人诺如病毒(Norovirus,NoV)、札如病毒(Sapovirus,SaV)、腺病毒(adenovirus,AdV)均无交叉反应;批内和批间精密性验证的变异系数(CV)均<10%。该方法检测192份RV临床粪便样本,与商品化试剂盒检测结果比较,阳性符合率为99%,阴性符合率为98%。结论建立的人RVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的灵敏性、特异性和精密性,可用于人RVA的检测。
- 赵颖苏韫曦刘晓钰欧阳瑄泽章青庞立丽李金松李丹地孙晓曼孙晓曼
- 关键词：真核表达单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 人H组轮状病毒VP7蛋白表达及其多克隆抗体制备
- 2024年
- 目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH J19株的VP7蛋白免疫兔子以制备VP7多抗血清,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫荧光荧光试验(Immunofluorescence,IF)等对VP7多抗血清进行鉴定。结果纯化得到可溶的J19 VP7蛋白;制备获得J19株VP7兔多抗;ELISA显示VP7多抗具有较好的结合效价,在稀释2048000倍时与人RVH VP7蛋白仍有结合;WB表明多抗能够结合J19 VP7蛋白;IF显示VP7多抗可以特异识别人H组轮状病毒J19株。结论本研究成功得到了人H组轮状病毒J19 VP7蛋白,制备的VP7多抗可以特异性识别人H组轮状病毒,为人H组轮状病毒的检测及病毒衣壳结构功能研究提供了基础。
- 刘晓钰赵颖张璐琦欧阳瑄泽章青李丹地李金松李利利孙晓曼孙晓曼
- 关键词：杆状病毒表达系统VP7蛋白多克隆抗体
- ARIMA模型在浙江省2007—2017年其它感染性腹泻发病情况预测中的应用被引量：4
- 2021年
- 目的探讨应用差分整合移动平均自回归模型(autoregressive integrated moving average,ARIMA)分析预测2007—2017年浙江省其它感染性腹泻发病情况。方法利用国家人口与健康科学数据中心公共卫生科学数据中心提供的浙江省2007—2016年各月其它感染性腹泻发病人数的数据,用SPSS 25.0软件构建时间序列分析ARIMA模型,预测2017年每月的发病人数,并用该中心提供的实际值对模型进行评估。结果对基于2007—2016年其它感染性腹泻发病情况建立的ARIMA模型进行训练和序列验证,再通过建立Box-Ljung检验和BIC检验,最终确定ARIMA(0,1,2)(0,1,0)_(12)为非平稳时间序列最优模型,2017年的预测值与2017年实际数据对比,准确性较高。结论ARIMA(0,1,2)(0,1,0)_(12)模型对浙江省其它感染性腹泻流行的预测效果较好,预测结果将为其它感染性腹泻的监测和预防提供理论支撑。
- 高升辉王明雯李丹地李静欣李金松吴建军段招军
- 关键词：ARIMA时间序列其它感染性腹泻发病数
