冯文华
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科委科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2005年
- 目的:研究重组hCGβCTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备。方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX4T2中获得含目的基因的表达质粒pGEX4T2(CTP)n(n=3,4)。表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达。表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4。将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度。结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GSTCTPn(n=3,4),SDSPAGE分析表明融合蛋白GSTCTP3和GSTCTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDSPAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体。结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原。
- 喻光荣蒋俶冯文华沈卫英蒋文珏申庆祥
- hCGb-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果:在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别为125kD和138kD左右。结论:运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白,为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。
- 冯文华石燕喻光荣沈卫英蒋俶申庆祥
- 关键词：C3D毕赤酵母
- hCGβ-CTP37多聚体在巴斯德毕赤酵母中的表达及其表达产物的结构预测被引量：5
- 2005年
- hCGβ-CTP37(简称CTP)肽段是hCG分子的特有部分,存在hCG的特异表位。为了解CTP利用毕赤酵母进行表达的情况及探索其作为研制调节生育和抗肿瘤疫苗的可行性,本研究中我们将2、3、4个CTP以头尾串联的方式重组成多聚体基因,然后克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9K-Cα-(CTP)_n(n=2,3,4),电转染入酵母细胞进行表达。在培养基上清中我们检测到了目的基因表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别约为:20KDa、30KDa、40KDa,且能与抗hCG多克隆抗体结合。另外,我们还利用ANTHEPROT4.3蛋白序列分析软件包对表达产物CTP四聚体的结构进行了预测分析,结果表明CTP四聚体的抗原性明显强于hCGβ-CTP37单聚体,CTP四聚体与hCGβ二级结构较为相似,但CTP四聚体的抗原专一性要优于hCGβ。CTP多聚体在毕赤酵母系统中的成功表达及对表达产物抗原性的初步分析为今后利用CTP研制调节生育和抗肿瘤疫苗奠定了基础。
- 喻光荣孙学铮沈卫英侯理理冯文华蒋俶申庆祥
- 关键词：巴斯德毕赤酵母多聚体基因表达产物分析软件包四聚体酵母系统
- hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备
- ＜正＞人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）是一种由胎盘滋养层合体细胞合成和分泌的糖蛋白激素,在妊娠早期起促进胚泡发育、维持妊娠的作用。早在20世纪70年代,hCG就被用于...
- 喻光荣蒋俶冯文华沈卫英蒋文珏申庆祥
- 文献传递
- hCGβ-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达及产物纯化
- 人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)是由胎盘滋养层合体细胞合成和分泌的一种糖蛋白激素，在早期妊娠中起促进胚泡发育、维持妊娠的作用。因此，hCG疫苗最初作为一种理想的避孕疫苗而...
- 冯文华
- 关键词：毕赤酵母盐析凝胶过滤
- 文献传递
