沈卫英
- 作品数：21 被引量：26H指数：4
- 供职机构：上海市计划生育科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委科技攻关项目World Health Organization更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 仓鼠用作人工授精动物模型的探索被引量：1
- 1993年
- 在生殖生物学研究中,人工授精是一种常用的实验技术,而选用较好的人工授精的动物模型是至关重要的,国内外实验室多选家兔、小鼠等动物经PMSG 和hCG 处理后进行人工授精,即动物是在外源性激素的参与下进行试验的;且多用外科手术方法:暴露子宫,注精子入宫腔。
- 张燕林颜阿林吴晓云沈卫英
- 关键词：仓鼠人工授精动物模型
- 人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)和绵羊垂体促性腺激素共有α亚基(oLHα)嵌合肽基因在巴斯德毕赤酵母中的表达
- 为探讨合成足量的优化抗原以满足抗Hcg疫苗的进一步研制和推广,作者进行了hCGβ-oLHa嵌合CDNA在巴斯德毕赤酵母中表达的尝试.
- 申庆祥王健沈卫英蒋叔柯碧霞黄哲平
- 关键词：人绒毛膜促性腺激素免疫避孕
- 文献传递
- SPDP偶联hCGβ-CTP37肽片段和破伤风类毒素的研究被引量：3
- 1992年
- 免疫避孕是计划生育科学研究的一个重要方面。长久以来,人们就盼望能有一种安全、方便、无副作用、能维持较长时间效果的避孕疫苗问世。如果用作避孕疫苗抗原的分子量较小,则免疫原性差,因而需要与一种大分子蛋白载体进行化学结合,然后通过主动免疫产生抗体,以达到避孕效果。
- 刘世范王毅杜晓岩沈卫英
- 关键词：免疫避孕偶联剂破伤风类毒素
- hCGβ-CTP37多聚体在巴斯德毕赤酵母中的表达及其表达产物的结构预测被引量：5
- 2005年
- hCGβ-CTP37(简称CTP)肽段是hCG分子的特有部分,存在hCG的特异表位。为了解CTP利用毕赤酵母进行表达的情况及探索其作为研制调节生育和抗肿瘤疫苗的可行性,本研究中我们将2、3、4个CTP以头尾串联的方式重组成多聚体基因,然后克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9K-Cα-(CTP)_n(n=2,3,4),电转染入酵母细胞进行表达。在培养基上清中我们检测到了目的基因表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别约为:20KDa、30KDa、40KDa,且能与抗hCG多克隆抗体结合。另外,我们还利用ANTHEPROT4.3蛋白序列分析软件包对表达产物CTP四聚体的结构进行了预测分析,结果表明CTP四聚体的抗原性明显强于hCGβ-CTP37单聚体,CTP四聚体与hCGβ二级结构较为相似,但CTP四聚体的抗原专一性要优于hCGβ。CTP多聚体在毕赤酵母系统中的成功表达及对表达产物抗原性的初步分析为今后利用CTP研制调节生育和抗肿瘤疫苗奠定了基础。
- 喻光荣孙学铮沈卫英侯理理冯文华蒋俶申庆祥
- 关键词：巴斯德毕赤酵母多聚体基因表达产物分析软件包四聚体酵母系统
- 猴Fertilinβ氨基端93肽基因的克隆及其在大肠杆菌中表达被引量：1
- 2001年
- Fertilin是一种异二聚体精子表面蛋白。业已证明,它在精卵反应中起着重要作用。成熟的Fertilinβ亚基的氨基端93肽含有与整联蛋白结合的整联蛋白配体区。该整联蛋白配体区与蛇毒整联蛋白配体区高度同源,它们能与细胞表面的整联蛋白相结合。 在此我们报道猴成熟Fertilinβ氨基端93肽基因的克隆和在大肠杆菌中的表达。用RT-PCR方法获得mFβNTP93基因,克隆人表达载体pT7-7/hCGβ的EcoRI和BamHI位点,该基因与hCGβ基因一起表达融合蛋白mFβNTP93-hCGβ,Western blotting结果显示,融合蛋白的表观分子量为33kDa,能与抗hCG抗体专一性结合。由于mFβNTP93基因与hCGβ基因相连,因此我们推测,mFβNTP93基因已获得表达。
- 王健沈卫英刘俊高尔生申庆祥
- 关键词：精卵融合基因克隆融合蛋白
- 人绒毛膜促性腺激素β亚基和补体C3d片段组成的单链多肽的生物合成被引量：1
- 1999年
- 利用PCR方法在hCGβcDNA 3’端产生一个Bam HI酶切位点,将此cDNA克隆入pBS HindⅢ和Bam HI位点之间。用T3、T7引物从正反两个方向同时测序,确证其序列正确性。将C3d3 cDNA从pSG5·PSG5·C3d3·YL·C3d3·YL切出与hCGβ串联构建成质粒pBS-hCGβ-C3d3。然后构建表达载体pVL1393-hCGβ-C3d3,并与线性化核型多角体杆状病毒(AcNPV)基因组DNA共转染昆虫细胞Sf9,以噬斑法筛选出重组病毒AcNPV-hCGβ-C3d3。以重组病毒AcNPV-hCGp-C3d3转染Sf9细胞,收集的条件培液经检测,确定其具有远远高于hCGβ-oLHα的结合活性。经hCGβ单抗亲和层析柱分离纯化后,以SDSPAGE和Western blot均证实了表达产物的存在,分子量与预期的hCGβ-C3d3一致,并具有hCGβ的免疫学活性。
- 余为宽申庆祥李大金周清平沈卫英王健
- 关键词：HCGΒ亚基补体生物合成
- hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2005年
- 目的:研究重组hCGβCTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备。方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX4T2中获得含目的基因的表达质粒pGEX4T2(CTP)n(n=3,4)。表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达。表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4。将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度。结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GSTCTPn(n=3,4),SDSPAGE分析表明融合蛋白GSTCTP3和GSTCTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDSPAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体。结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原。
- 喻光荣蒋俶冯文华沈卫英蒋文珏申庆祥
- hCGb-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果:在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别为125kD和138kD左右。结论:运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白,为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。
- 冯文华石燕喻光荣沈卫英蒋俶申庆祥
- 关键词：C3D毕赤酵母
- 重组人卵泡刺激素在昆虫细胞中的表达
- 2004年
- 为了研究在昆虫细胞中表达重组人卵泡刺激素,我们以人胎盘组织提取的染色体DNA为模板,利用重叠PCR方法扩增出hFSHβ亚基的cDNA的编码区。将此cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因表达载体pVL1393,我们得到了表达载体pVL1393-hFSHβ,然后与BaculoGold^(TM)线性杆状病毒DNA共转染昆虫细胞SF9,经多次扩增后获得高滴度的重组病毒AcNPV-hFSHβ。将此重组病毒感染昆虫细胞,我们得到了在胞浆中表达的hFSHβ亚基,Western blot显示分子量大约为21kDa。以重组病毒AcNPV-hFSHβ与AcNPV-hCGα一同感染昆虫细胞得到了具有分泌性的重组hFSH异二聚体,在非还原的条件下Western blot显示分子量大约为33kDa。
- 侯理理蒋俶沈卫英黄哲平申庆祥
- 关键词：昆虫细胞重组病毒糖蛋白
- 定量多重PCR在筛查DMD携带者和产前诊断中的应用被引量：2
- 1998年
- 基于抗肌萎缩蛋白基因(DMD)多个外显子进行对数增长期多重PCR(多聚酶链反应)产物定量分析的原理,本研究在改进Ioannou等方法基础上建立了假性肥大型肌营养不良症(DMD/BMD)定量多重PCR(QM-PCR)技术,应用于携带者筛查和产前诊断.运用多重PCR技术对12个DMD/BMD家系先证者的检测表明缺失一个或一个以上外显子的家系有7个(58.3%).QM-PCR证实7名缺失型患者中6名母亲是与缺失型患者相同的携带者(86.7%).1例检测出外显子缺失的DMD患者,其母亲及外祖母的外周血淋巴细胞DNA未发现任何DMD基因缺失,可以排除为携带者(13.3%).对一名肯定携带者妊娠9周的胎儿进行了性别测定和DMD检测,确诊胎儿为男性DMD患者.一例可能携带者在排除携带者基础上,进一步对妊娠胎儿产前诊断确诊为正常女婴.本研究的结果进一步证实了该技术筛查DMD携带者的可靠性.将本技术与其它技术相结合可明显改进DMD家系中携带者诊断的准确性,并可应用于谱系及多态性信息不详家系的携带者诊断.该技术对防止缺失型DMD患儿和携带者的出生有重要的意义.
- 王仁礼沈卫英蒋秀蓉袁瑶冯缵冲张忠恕仇效坤
- 关键词：肌营养不良PCR产前诊断
