郭昕
- 作品数：32 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中国科学院大连化学物理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 牛磺酸对微囊化肝细胞生长的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:微胶囊中存在一定程度的高渗透压胁迫,可造成细胞生长代谢减慢,为改善微囊化肝细胞的生长,尝试应用抗渗透压胁迫物质牛磺酸,观察其对微囊化肝细胞生长的影响。方法:实验于2006-07/08在中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程实验室完成。将HepG2细胞悬液(非微囊化细胞)和微囊化HepG2分别接种于牛磺酸浓度为0,0.6,0.8和1.2mmol/L的MEM培养液中,在37℃体积分数为0.05的CO2中培养。MTT法测定非微囊化和微囊化HepG2细胞的生长活性,相差显微镜观察囊内细胞生长状态。结果:①非微囊化HepG2细胞:0.6,0.8和1.2mmol/L的牛磺酸对其生长无影响,吸光度值比较差异无显著意义(P>0.05)。②微囊化HepG2细胞:0.6,0.8mmol/L牛磺酸对微囊化肝细胞的生长亦无影响(P>0.05);但1.2mmol/L牛磺酸可以显著改善微囊化肝细胞的生长,其吸光度值高于0mmol/L牛磺酸组(P<0.05),并促进细胞的聚集。结论:1.2mmol/L牛磺酸可以改善微囊化肝细胞的生长并抵制微囊内的高渗透压胁迫对细胞的生长抑制作用。
- 孙志杰郭昕宁小娟李双月吕国军于炜婷王为马小军
- 关键词：微囊化牛磺酸肝细胞生物材料
- TurboFect介导骨形态发生蛋白2转染CHO细胞的研究
- 2016年
- 目的:构建真核表达载体p IRES-EGFP-BMP-2,通过Turbo Fect转染得到表达BMP-2蛋白的CHO细胞系。方法:利用逆转录PCR方法扩增获得人的BMP-2基因c DNA,克隆入p MD18-T载体,经PCR、酶切和基因测序分析等方法鉴定重组质粒;将BMP-2连入p IRES-EGFP真核表达载体中,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒。以壳聚糖和Turbo Fect分别作为基因载体转染CHO细胞,荧光显微镜检测分析转染结果;G418筛选富集转染阳性细胞。结果:成功的克隆得到了BMP-2基因,酶切鉴定成功构建了p IRES-EGFP-BMP-2质粒。与壳聚糖组相比,Turbo Fect用量为1:1时,细胞阳性率为(31.92±1.31)%,高于壳聚糖的细胞阳性率(6.33±1.53)%。目的基因与Turbo Fect比例为1:2时转染效率为(42.90±1.10)%高于1:1的(28.59±2.38)%和1:3的(37.52±2.14)%。细胞密度调节到5×103 cells/cm2阳性细胞率可达到(44.43±3.23)%。荧光检测可见荧光阳性细胞得到稳定传代。Western Blot检测可见BMP-2蛋白表达。结论:Turbo Fect成功的介导了p IRES-EGFP-BMP-2载体转染CHO细胞,建立了稳定表达BMP-2和EGFP的CHO细胞株。
- 王淑君张德蒙李娜王贝贝谢红国郭昕白凤武
- 关键词：骨形态发生蛋白2转染阳离子聚合物壳聚糖TURBO
- 微囊微环境体外扩增人脐血造血干/祖细胞
- 2009年
- 背景:由于单份脐血所含的造血细胞数量有限,目前只能用于儿童或低体质量成人血液病和急性辐射损伤等疾病患者,有效扩增脐血造血干/祖细胞已成为研究热点。目的:观察微囊微环境对脐血造血干/祖细胞扩增的影响,以及此过程中可否使造血干/祖细胞在扩增的同时仍维持其未分化状态。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-06/2007-09在中国科学院大连化学物理研究所完成。材料:正常足月产新生儿脐带血由大连市妇产医院提供,提供者知情同意。方法:Ficoll法梯度分离人脐血单个核细胞,采用静电液滴法在生理条件下进行微囊化包封和体外培养。以同条件平面培养的脐血单个核细胞作为对照。主要观察指标:观察微囊化脐血细胞的生长特点及脐血细胞总数的变化;流式细胞仪检测培养过程中CD34+细胞扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法观察扩增细胞的集落形成能力。结果:脐血细胞在微胶囊内持续增殖,并以聚集成团的三维方式生长,两种培养方式对脐血细胞总数均无明显影响(P>0.05)。对比CD34+细胞扩增和细胞集落的生成发现,微囊化培养脐血细胞的CD34+细胞数量和集落密度均在培养第6天达到高峰,明显高于平面培养3d时所达到的峰值;之后逐渐下降,至12d后平面培养细胞的CD34+细胞和集落形成能力几乎检测不到,而此时微囊化培养的CD34+细胞数量和集落密度仍与平面培养的扩增高峰相近。结论:微囊化培养能有效扩增人脐血造血干/祖细胞,并显著减缓造血干/祖细胞的分化进程,维持其多分化潜能,提示微囊为造血干/祖细胞维持未分化状态的扩增提供了特殊的微环境。
- 李双月王华郭昕孙志杰吕国军王为马小军
- 关键词：造血干祖细胞扩增微胶囊微环境脐血
- 微囊化雪旺细胞/神经组织移植促进周围神经再生的实验研究被引量：6
- 2005年
- 目的:探讨免疫隔离技术应用在神经细胞/组织移植促进周围神经再生的可行性。方法:采用静电液滴法制备海藻酸钠/聚赖氨酸/海藻酸钠(alginate-polysien-alginate,APA)微胶囊,包埋分离自SD大鼠周围神经的雪旺细胞(SChwanncells,SCs)/神经组织;采用台盼蓝拒染法和ELISA法检测其培养后活性和分泌神经生长因子情况。制备坐骨神经横断损伤的SD大鼠模型,将微囊化SCs/神经组织移植到实验组坐骨神经吻合口处。结果:微囊化SCs/神经组织培养一定时间后,仍保持活力和分泌神经生长因子的功能;4周后实验组吻合口远端可见到再生的阳性纤维,明显大于对照组,瘢痕明显少于对照组;实验组再生的神经纤维和新生的微小血管远较对照组密集。结论:微囊化SCs/神经组织移植后在局部持续分泌神经生长因子,有促进周围神经修复的作用。
- 雄鹰王为于炜婷郭昕马小军陈绍宗
- 关键词：微胶囊细胞移植周围神经损伤
- 微囊化K562细胞生长周期及代谢特性的研究被引量：3
- 2005年
- 以K562细胞为模型,分别进行微囊化和游离培养,运用流式细胞术考察两种培养体系下细胞周期和生长代谢变化;建立数学模型,模拟了两种培养体系下细胞的生长活性和代谢特性。实验发现:微囊化培养过程中的K562细胞处于DNA合成期(S期)的百分含量显著高于游离培养,并且细胞保持较高的增殖活性。模型计算表明,所建模型动力学参数能够很好地描述微囊化和游离两种培养体系下细胞的代谢情况;对细胞活性的理论计算表明,微囊化的细胞具有较高的增殖和代谢活性,同时细胞能够较长时间保持此活性;模型参数表明,两种培养体系下,葡萄糖对细胞生长的影响无显著差别(kFreeA≈kAPAA),乳酸对游离培养细胞的生长具有明显抑制作用,但对微囊化培养细胞抑制作用较小(kFreeL>≈kAPAL)。
- 马娟綦文涛王秀丽王为郭昕马小军
- 关键词：细胞周期细胞活性
- 微囊化细胞治疗帕金森氏症的研究
- 马小军袁权虞星炬费俭王为谢威扬于炜婷李金云郭昕王乐群陈雅娣张珏蒋丽臻
- 该项目系中国科学院知识创新工程项目，结合科学院在细胞工程技术及化学化工领域的优势，构建能高效分泌治疗帕金森氏症的Neurturin（NTN）的工程细胞系，建立有治疗帕金森氏症功能并可适合于微囊化培养的细胞株，建立治疗帕金...
- 关键词：
- 关键词：微胶囊细胞治疗帕金森氏症
- 微囊化组织细胞培养及其作为生物型人工器官的研发
- 解玉冰马小军费俭王为刘袖洞于炜婷谢威扬雄鹰螣怀宁张英张旭朗张晓慧郭昕
- 通过在国内率先完成微囊化动物细胞移植治疗顽固性疼痛病人的临床前研究和微囊化细胞治疗帕金森、糖尿病、甲状腺机能减退等动物实验研究，说明细胞移植的两个关键技术：细胞来源及免疫排斥可以通过微囊化细胞得以解决。以转基因CHO细胞...
- 关键词：
- 关键词：微囊化人工器官
- 体外微囊化肿瘤细胞模型的构建及其用于药物筛选的体外研究被引量：2
- 2006年
- 目的:利用静电液滴法制备三维生长的微囊化人乳腺癌细胞球并初步用于抗肿瘤药物筛选。方法:实验于2004-02/07在中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料实验室完成。使用大功率高压脉冲微胶囊制备仪,制备微囊化人乳腺癌细胞(MCF-7),经体外培养5d可形成直径为125μm的微囊化多细胞肿瘤球并用于实验;在不同氧浓度下,抗癌药物丝裂霉素、阿霉素和5-氟尿嘧啶分别在0.1,1,10倍血浆峰值浓度下作用24,48,72h后测量微囊内细胞球的粒径、相差显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞球形态并通过活/死染料定性细胞的活性、四甲基偶氮唑盐法定量测定微囊内细胞的活性以及溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖状态。结果:①人乳腺癌细胞微囊化后可继续生长、增殖并聚集成团,同时消耗葡萄糖并产生乳酸。微囊化肿瘤细胞表现出较强的增殖活性,当微囊内的细胞团增大到一定程度时中心可出现坏死区,但分布于团块外层的细胞仍具有增殖活性。②抗癌药物作用后,随药物浓度的增加和作用时间延长,微囊内细胞球的粒径减小、细胞增殖活性代偿性增加。活细胞减少,死细胞增多,四甲基偶氮唑盐显示细胞活性降低,与平面培养细胞相比,抗癌药物对微囊化乳腺癌细胞球的抑制率降低。从药物效果看,丝裂霉素的抗肿瘤效果好于5-氟尿嘧啶和阿霉素。③随氧浓度增高,微囊化人乳腺癌细胞对抗癌药物的敏感性增强。结论:微囊化多细胞肿瘤球模拟了体内组织的三维生长方式,并有望成为一种快速、有效的体外药物筛选模型。
- 张旭朗王为张英于炜婷郭昕马小军
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤细胞药物筛选试验
- 体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力被引量：3
- 2014年
- 背景:人羊膜上皮细胞具有多系分化能力,是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察,而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。目的:分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞分化的能力等生物学特性的影响,探讨原代人羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与人羊膜上皮细胞生物学特性变化之间的关联性。方法:使用统一分离方法获得原代羊膜上皮细胞并进行体外培养。利用CCK-8、流式细胞仪及real-time PCR等手段检测不同培养阶段人羊膜上皮细胞的增殖、表型以及向心肌样细胞分化的能力。结果与结论:不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达在26.7%-97%,存在很大的个体差异。并且,随着传代次数的增加,人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平显著降低,其下降程度与原代SSEA-4的表达水平无关。另外,培养后人羊膜上皮细胞的心肌分化潜能也存在很大个体差异,且其差异与原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平的高低无关。结果提示,不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平受到个体差异的影响,需要建立更准确的临床样本筛选指标来稳定获得原代高表达SSEA-4的胎儿样本,以实现对人羊膜上皮细胞的质量监控。另外,体外培养过程中SSEA-4的表达水平受到培养条件的影响,需要继续优化培养条件以维持其高表达。此外,人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力受到样本个体差异以及培养条件的影响,在今后还需要进一步研究。
- 连建春刘洋刘畅吕世杰郭昕南丰孙广炜贺欣马小军
- 关键词：羊膜上皮细胞体外培养
- 慢病毒高效感染皮肤人永生化表皮细胞株HaCaT细胞的分化状态被引量：1
- 2014年
- 背景:研究证实YY1主要在小鼠基底层未分化表皮细胞中表达,且随着表皮细胞向基底上层分化其表达逐渐下降,这种差异性表达方式说明YY1可能是表皮细胞分化过程中重要的调节因子之一。目的:采用慢病毒-YY1感染HaCaT细胞观察YY1过表达对细胞分化的影响。方法:将慢病毒-YY1感染至HaCaT细胞,经puromycin筛选,建立单克隆稳定细胞株,设对照组为慢病毒感染的HaCaT细胞和未感染的HaCaT细胞,Western blot检测分析YY1蛋白的表达水平;将慢病毒-YY1-HaCaT组和HaCaT-YY1组细胞各分成2组,一组在低钙(0.12 mmol/L)培养基条件下培养48 h,另一组在低钙(0.12 mmol/L)培养基条件下培养24 h后在高钙(0.35 mmol/L)培养基条件下再培养24 h,用Western blot法检测YY1过表达对HaCaT细胞分化中的表皮细胞特异性分化角蛋白K1、K10、K14和晚期分化产物外皮蛋白、中间丝相关蛋白、兜甲蛋白的影响。结果与结论:慢病毒-YY1成功感染HaCaT细胞,高钙条件下获得的单克隆细胞株过表达YY1蛋白,可抑制K1、外皮蛋白和兜甲蛋白的合成,从而阻止表皮细胞角质化进程并使细胞处于未分化状态。结果说明慢病毒可高效感染皮肤人永生化表皮细胞株HaCaT细胞,YY1可能是抑制基底表皮细胞分化并维持其未分化增殖状态的重要因子之一。
- 侯娜侯彬彬王秀丽刘玉芳郭昕林茂许雪珠
- 关键词：慢病毒感染HACAT细胞YY1慢病毒
