王红仁
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目四川省科技厅科技支撑计划项目国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 流感流行及其基因疫苗的研究进展
- 2009年
- 流感的季节性流行和大流行给人类造成了很大的损失。注射流感疫苗是预防流感的主要措施之一。目前上市的人用流感疫苗主要是由鸡胚生产的传统灭活疫苗,在疫苗用毒株的获取和生产速度等方面有很大的局限性。基因疫苗研究在近年来取得了重大进展,显示出了传统疫苗所不能比拟的巨大优势,流感基因疫苗主要有DNA疫苗、腺病毒载体疫苗和痘病毒载体疫苗,本文就这三方面作一简要综述。
- 王红仁王强李刚
- 关键词：流感基因疫苗DNA疫苗
- 诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑制作用
- 2021年
- 目的:评估无毒诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑瘤效应,及其在肿瘤和重要器官的定植情况,并确定瘤内注射的最佳剂量。方法:建立H22皮下移植瘤BALB/c小鼠模型后称小鼠重量,测量肿瘤大小,并按随机原则分为生理盐水组、无毒诺维氏梭菌低剂量组(1.0×10^(7)/mL,0.5 mL)、中剂量组(1.0×10^(8)/mL,0.5 mL)和高剂量组(1.0×10^(9)/mL,0.5 mL)。每天观察小鼠的一般情况,每周3次定时测量小鼠重量,每周2次测肿瘤大小,评估细菌的抑瘤效应。采用革兰染色法、细菌培养法、PCR技术,了解肿瘤和重要器官中诺维氏梭菌的定植情况。利用HE染色、脾脏指数、胸腺指数,了解细菌干预后荷瘤鼠炎症反应、免疫功能及肿瘤转移的情况。结果:无毒诺维氏梭菌低、中、高剂量组抑瘤率分别为8.49%、44.59%、14.84%,高剂量组小鼠一般情况最差,中剂量组小鼠一般情况最好。培养结果显示,肿瘤组织中有诺维氏梭菌定植,主要脏器无该菌定植。高剂量组和中剂量组荷瘤鼠脾脏质量明显增大,两组脾脏质量和指数与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组胸腺显著缩小,但胸腺指数各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:无毒诺维氏梭菌能选择性地定植于肝癌区,中剂量(1.0×10^(8)/mL,0.5 mL)无毒诺维氏梭菌能有效抑制免疫正常小鼠H22皮下移植瘤,可能与抗肿瘤免疫和炎症反应有关。
- 黄筱钧邓昭敏王红仁邝玉李婉宜李明远
- 关键词：肝细胞癌
- 幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究被引量：1
- 2014年
- 目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。
- 潘兴王保宁杨靖李健春祝捷周永君王红仁李明远李婉宜
- 关键词：幽门螺杆菌疫苗高密度发酵尿素酶B亚单位
- Nutlin-3对原发性肝细胞癌中p53及IFI16的影响机制研究
- 研究背景与目的原发性肝细胞癌(HCC)的病死率高居癌症的第三位,大约有50%的HCC中的p53与MDM2相互作用而失活,通过拮抗MDM2而恢复p53活性为HCC治疗提供了一种新策略。Nutlin-3是MDM2拮抗剂,能拮...
- 石新丽杨靖王红仁杨远王保宁李婉宜李明远
- 文献传递
- 基于甲病毒的RNA复制子疫苗被引量：2
- 2007年
- RNA复制子疫苗利用源自病毒能够自主复制的RNA,结构蛋白基因由外源抗原基因取代,保留了非结构蛋白基因,非结构蛋白可控制载体RNA在胞浆中高水平复制和外源基因的高水平表达。RNA复制子疫苗克服了传统疫苗和普通DNA疫苗存在的缺点,具有免疫效果显著、安全性好、应用范围广等优点,具有很好的应用前景。用于RNA复制子疫苗的载体主要源自甲病毒,本文以甲病毒载体为例,简要阐明RNA复制子疫苗的基本原理和特点,并对其应用作一综述。
- 王红仁李明远
- 关键词：甲病毒疫苗凋亡
- 重组幽门螺杆菌多表位疫苗工程菌株的构建及其微生物学特性研究被引量：4
- 2015年
- 目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(ureI、ureB)及霍乱毒素B亚单位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选出T细胞和B细胞优势表位,通过柔性Linker相连,并在其N端加入分子内佐剂序列ctB,按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,即为BIB序列。人工合成之后,插入原核表达质粒pET28a(+)中,构建pET28a(+)/ctB-ureI-ureB〔pET28a(+)/BIB〕重组质粒。经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定正确后,将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。BIB工程菌经乳糖诱导表达后,SDS-PAGE检测重组蛋白BIB的表达情况,并对其N端氨基酸序列和相对分子质量进行测定,Western blot对其进行抗原性鉴定。结果原核表达质粒pET28a(+)/BIB经双酶切和测序鉴定构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量33×103处有一条明显条带,其N端氨基酸序列和相对分子质量与设计序列100%一致,Western blot结果显示BIB可以与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应。结论成功构建了幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌,该工程菌表达的BIB蛋白抗原性良好。
- 王保宁潘兴黄筱钧周永君祝捷高礼珍牛晓娟李婉宜李明远王红仁
- 关键词：多表位疫苗尿素酶B亚单位霍乱毒素B亚单位
- 自噬和凋亡在甲型流感病毒和肺炎球菌协同感染小鼠模型中作用的初探被引量：2
- 2016年
- 目的 建立甲型流感病毒（Influenza A virus,IAV）和肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）协同感染小鼠模型,在该模型中初步探索自噬和凋亡的发生情况.方法 将IAV和SP以不同顺序感染Balb/c小鼠,观察其体重变化和死亡率,检测其肺部IAV和SP滴度、病理改变情况,建立IAV ～ SP协同感染动物模型.使用免疫组化法检测自噬特征蛋白LC3及凋亡特征蛋白Caspase-3的表达情况.结果 IAV～SP组第二次感染后24 h时小鼠肺部IAV和SP滴度最高,死亡率也明显高于其他各组,48 h病理改变也最为严重.免疫组化结果显示IAV感染早期（24 h～48 h）LC3蛋白表达出现峰值,Caspase-3缓慢上升;晚期（72 h～96 h）Caspase-3蛋白表达出现峰值,而LC3蛋白表达逐渐下降.结论 本研究成功建立了1AV～ SP协同感染动物模型,模型鼠中自噬先于凋亡发生,为进一步研究自噬和凋亡在IAV～ SP协同感染中的作用奠定了基础.
- 秦臻王红仁黄筱钧罗俊游江舟李婉宜杨远周琳琳李明远
- 关键词：甲型流感病毒肺炎链球菌自噬凋亡
- 口腔幽门螺杆菌基因定量测定方法的建立及其应用评价被引量：5
- 2017年
- 目的建立一种通过口腔唾液的特异、灵敏测定幽门螺杆菌核酸DNA的荧光定量PCR方法,并对其进行临床比对评价,为快速、准确、无创检测幽门螺杆菌感染提供新方法。方法以高度保守的幽门螺杆菌16srRNA序列为靶序列设计引物,经Blast软件对相似序列比对后,筛选出一对最优并与常见胃肠道细菌无交叉反应的引物;用荧光定量PCR扩增,对引物的退火温度及反应体系进行优化,确立反应条件;用已知菌落数(CFU/ml)的幽门螺杆菌菌悬液与唾液混合,梯度稀释扩增测试后进行灵敏度分析,建立幽门螺杆菌菌落数(CFU/ml)和荧光定量PCR循环数(Ct)关系的标准曲线;用乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌的基因进行特异性分析;利用此方法对150例来自临床胃镜中心的已完成尿素酶(URT)测定,并自愿参加研究者的口腔唾液标本进行收集检测,结果与同一病人的14 C呼气实验检测结果进行比对分析,计算阳性率、阴性率和符合率。结果本检测方法的引物退火温度是62℃,反应体系10μl;对幽门螺杆菌的检测敏感度为102 CFU/ml;本检查与乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌无交叉反应;本方法与14 C呼气实验检测结果比较灵敏度74.12%,特异度86.15%,符合率79.33%,Kappa值为0.59。结论建立了口腔唾液幽门螺杆菌基因检测的分子诊断方法;该方法的特异性好,灵敏度高,为临床检测口腔幽门螺杆菌提供了一个无创、方便的新方法。
- 别明江严谨王保宁谢艳祝捷王馨田王红仁李明远杨靖李尤玲
- 关键词：唾液幽门螺杆菌基因
- HPV16 E7“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达特性研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染BHK-21细胞,然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400 bp的目的基因片段,测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100%同源。免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实,pSCA/E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA/E7,该重组质粒可在BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡。
- 王红仁王保宁李婉宜左凤琼李虹蒋忠华施桥发李明远
- 关键词：人乳头瘤病毒治疗性疫苗
