王保宁
- 作品数：89 被引量：125H指数：5
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技厅科技支撑计划项目湖北省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析被引量：3
- 2010年
- 目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确定质粒的转染率；用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体，采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况。结果：成功构建了ureI和ctB—ureI的真核表达质粒pIRES—RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB—ureI，用此质粒转染HEK293T细胞48～72h后，荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80％；用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性，表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近，ctB—ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外。结论：成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB—ureI，目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性。
- 王保宁杨远邝玉曹康李明远李婉宜
- 关键词：真核表达
- 清热解毒口服液在小鼠体内抗甲型流感病毒的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的观察清热解毒口服液在BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用。方法将BALB/c小鼠随机均分为正常对照组、流感病毒感染模型组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组及清热解毒口服液高、中、低剂量组。小鼠感染流感病毒后ig给药,以生存情况、死亡保护率及延长生命率作为指标,观察清热解毒口服液抗流感病毒的作用。结果清热解毒口服液各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状;死亡保护率为50%～60%;延长生命率为61.56%～73.84%。与阳性药物利巴韦林片及连花清瘟胶囊比较,差异无统计学意义。结论清热解毒口服液在BALB/c小鼠体内有抗甲型H1N1流感病毒的作用,其机制有待深入研究。
- 王保宁张玉芬任来峰左斌李婉宜蒋忠华李明远黄媛莉
- 关键词：清热解毒口服液甲型流感病毒BALB/C小鼠
- 重组鼠β-防御素3多肽及其制备方法与用途
- 本发明通过基因工程技术构建鼠β-防御素3基因(Mbd-3)的原核重组质粒，将原核重组质粒转入工程菌进行诱导高效表达鼠β-防御素3多肽(MBD-3)并进行表达产物的提取、纯化和凝血酶酶切释放出有活性的MBD-3成熟肽。本发...
- 李明远江滟李婉宜王月玲巩天祥王保宁杨远王欢蒋忠华
- 文献传递
- 不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白免疫抗小鼠急性感染的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的：观察重组Hap蛋白免疫抗不可分型流感嗜血杆菌（NHTi）感染的免疫保护效果，初步探讨其保护机制。方法：用纯化的Hap重组蛋白与黏膜免疫佐剂霍乱肠毒素B亚单位（CT-B）联合鼻腔免疫C57BL／6小鼠。NHTi琼脂珠悬液对免疫小鼠进行气管内注射，建立小鼠NHTi急性肺部感染模型。NHTi攻击5d后，收集实验小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞计数，并取其肺组织进行肺部荷菌数检测及肺组织的病理检测。结果：Hap重组蛋白与CT—B的联合免疫能显著降低小鼠BALF中的白细胞总数、中性粒细胞渗出（P〈0．05）及感染小鼠肺组织内NTHi的荷菌数，并减轻感染小鼠支气管、细支气管周围及肺泡内的炎性浸润程度，明显改善其肺组织的病变。结论：鼻腔免疫的Hap重组蛋白在动物体内能发挥良好抗NTHi感染的免疫保护作用，为NTHi新型疫苗的研发提供了理论基础和实验依据。
- 李婉宜王保宁左凤琼曾蔚丰锋邝玉蒋中华李明远
- 关键词：黏膜免疫
- 小鼠β防御素2、3融合基因载体构建及其抗流感病毒作用被引量：2
- 2010年
- 目的构建mBD2与mBD3融合基因的真核表达载体,检测其在MDCK细胞中的表达情况,并探讨其抗病毒特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD2与mBD3基因片段,通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD2与mBD3通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD2与mBD3。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光检测融合蛋白表达情况,最后采用CCID50测定并分析抗流感病毒作用。结果经鉴定后证实,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,CCID50实验结果说明有较好的抗流感活性。结论本研究成功构建mBD2-mBD3融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,该结果为进一步研究防御素抗病毒机制奠定了坚实的基础。
- 张强李明远丰锋巩天祥李婉宜刘冯欢冯艳邝玉王保宁
- 关键词：Β防御素甲型流感病毒融合基因重叠延伸PCR免疫荧光
- 小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究
- 2010年
- 目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e。鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌。免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达。结果融合基因mBD6-M2e真核表达载体pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖。免疫小鼠细胞因子表达改变。结论融合基因mBD6-M2e真核表达载体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础。
- 冯伟李婉宜李明远张强巩天祥刘冯欢罗俊邝玉王保宁蒋忠华
- 关键词：甲型流感病毒
- 流感病毒受体结合表位真核载体的构建及表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段多肽接头Gly4Ser融合为SP-RB、SP-RBT和SP-RBT,将其分别插入pcD-NA3.1(+)载体,构建质粒,鉴定正确后转染MDCK细胞,RT-PCR、免疫荧光、MTT检测该质粒的表达和分泌。结果融合基因真核表达质粒构建成功,在MDCK细胞中成功表达,转染细胞培养上清能刺激淋巴细胞增殖。结论SP-RB、SP-RBT、SP-RBB真核表达载体成功构建,表达产物能刺激淋巴细胞增值,为流感病毒唾液酸受体结合部位的T、B细胞表位免苗研究提供初步依据,也为流感核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 罗俊王欢戴军左斌裴德翠丰峰李婉宜邝玉王保宁蒋忠华李虹李明远
- 关键词：流感病毒T细胞表位B细胞表位免疫荧光技术
- 口胃幽门螺杆菌临床分离株耐药基因的分子进化研究被引量：8
- 2018年
- 目的探讨西藏地区胃病患者口胃幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）临床分离株耐药基因的分子进化，并通过对10株不同来源Hp的基因组测序分析并对9株Hp代表株进行药敏实验，从耐药表型和耐药基因信息学分析Hp对于常用抗生素的耐药性，为临床治疗Hp感染提供依据。方法从西藏地区临床胃病患者口腔和胃粘膜组织分离和培养Hp，并对9株临床菌株（5株口腔临床分离菌株和1株临床胃组织分离株，3株SS国际标准株的动物模型适应株代表菌株）进行常见抗生素的耐药性检测，并增加1个ACTT11637国际标准株共10株Hp，用基因组重测序技术，获得耐药基因序列，将不同来源的Hp耐药基因与NCBI中Hp代表菌株的耐药基因进行比对分析，并结合耐药实验结果，分析其分子进化和耐药机制间的关系。结果从217例胃病患者胃粘膜组织和唾液组织中检出Hp89株，总感染率为41．01％（89／217）。9株代表Hp对克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、左氧氟沙星和四环素的耐药率分别为77．8％、77．8％、44．4％、77．8％、77．8％。与参考株相比，克拉霉素耐药基因相似性达99％，阿莫西林和甲硝唑耐药基因相似性为96％～97％。同时也发现其中3株菌克拉霉素耐药基因A2143G的突变。结论目前西藏地区Hp对于甲硝唑的敏感性较高，对于克拉霉素、阿莫西林、左氧氟沙星、四环索的敏感性较差。耐药基因突变与耐药情况一致。
- 王保宁万里周永君别明江安振梅黄亨建唐成志
- 关键词：幽门螺杆菌药敏实验耐药基因分子进化
- 一种基于16s rRNA的牛链球菌引物组及其LAMP检测方法
- 本发明提供了一种基于16s rRNA的牛链球菌引物组及其LAMP检测方法，该技术涉及分子诊断的快速检测技术领域。所述引物组包括引物F3‑3、B3‑3、FIP‑3、BIP‑3、FL‑3和BL‑3；所述引物F3‑3、B3‑3...
- 王保宁陈昱作刘人捷索朗斯珠
- 一种幽门螺杆菌双靶点的引物组合及其LAMP检测方法和应用
- 本发明提供了一种幽门螺杆菌双靶点的引物组合及其LAMP检测方法和应用，引物组合包括：UreB引物组和CagA引物组；所述UreB引物组包括引物F3‑1、B3‑1、FIP‑1、BIP‑1、LooF‑1、LooB‑1；所述C...
- 王保宁陈昱作唐智慧符立法刘人捷周博彦潘吉祥王明辉袁鑫陈柯帆
