潘孝本
- 作品数：39 被引量：77H指数：5
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用肝细胞系QSG－7701感染乙型肝炎病毒
- 应用肝细胞系QSG－7701感染HBV，包括如下步骤：培养的QSG－7701细胞直接感染HBV阳性血清中的或经纯化的HBV病毒颗粒。经DMSO处理或加入PEG可以辅助感染。肝细胞系QSG－7701来源获取容易；无须预分化...
- 潘孝本魏来
- 文献传递
- 磷酸酯酶抑制剂冈田酸对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒复制的影响
- 2007年
- 目的初步鉴定可能与HBV核心蛋白去磷酸化有关的磷酸酯酶。方法以磷酸酯酶2A抑制剂冈田酸(OA)处理体外培养的人肝癌HepG2.2.15细胞。将细胞分为4组,分别加入终浓度为0(对照组)、10、20、30ng/ml的OA(OA10ng组、OA20ng组、OA30ng组),每组各设5孔。在培养0、2、4、6d时分别收集各组细胞培养上清液,采用电化学发光方法检测HBsAg浓度,荧光实时定量PCR方法检测HBVDNA拷贝数。取培养2d时的各组细胞,采用蛋白质印迹方法检测HBcAg异质性,免疫荧光细胞化学染色方法检测HBcAg亚细胞定位。结果OA10ng组、OA20ng组各时间点细胞培养上清液HBsAg浓度、HBVDNA拷贝数分别与对照组相应各时间点比较,差异均无统计学意义;在培养2d时HBcAg电泳条带、亚细胞定位分别与对照组比较均无明显异常。OA30ng组在培养2、4、6d时细胞培养上清液HBsAg浓度(ng/ml)均明显低于对照组相应各时间点(分别为385.9±43.1vs510.2±63.3、346.5±39.6vs484.6±59.4、295.1±32.8vs467.2±52.9,P值分别为0.028、0.022、0.016);在培养2d时细胞培养上清液HBVDNA拷贝数(ml-1)明显高于对照组相应时间点(6.71±6.07vs6.34±5.72,P=0.022),而在培养4、6d时均明显低于对照组相应各时间点(分别为5.80±5.19vs6.29±5.68、4.75±4.15vs6.25±5.58,P值分别为0.008和0.005);在培养2d时HBcAg电泳条带明显增宽,约20%的HepG2.2.15细胞的细胞核内HBcAg红色荧光信号明显增强。结论短时间、高浓度的OA处理可提高HBVDNA的复制水平和核心蛋白的磷酸化水平,提示磷酸酯酶2A可能参与了HBV核心蛋白的去磷酸化过程。
- 潘孝本季颖朱凌王茜管文莉韩进超魏来
- 关键词：DNA复制
- PNA钳位实时定量PCR检测HBV线性DNA比例
- 本发明公开了一种PNA钳位实时定量PCR检测HBV线性DNA比例的方法，包括如下步骤：(1)用DNA聚合酶和核酸内切酶对HBV DNA模板进行预处理，产生相差12个碱基的不同模板；(2)利用引物对和肽核酸对dlDNA进行...
- 潘孝本魏来
- 文献传递
- 干扰素治疗慢性丙型肝炎转归预测蛋白芯片
- 本发明涉及一种蛋白芯片，用于慢性丙型肝炎转归预测。该蛋白芯片包括ISG56、ISG20等13条基因对应的蛋白片段。应用此项发明，在患者应用干扰素治疗的早期或治疗前，即对干扰素治疗的长期疗效进行预测，有助于慢性丙肝患者治疗...
- 潘孝本魏来
- 文献传递
- 肝/癌细胞系QSG-7701和HepG2支持不同的乙型肝炎病毒复制模式
- 潘孝本
- 关键词：乙型肝炎病毒转染基因差异表达细胞凋亡
- 干扰素治疗慢性丙型肝炎转归预测基因芯片
- 本发明涉及一种基因芯片，用于慢性丙型肝炎转归预测。该基因芯片包括ISG56、ISG20等12条基因片段。应用此项发明，在患者应用干扰素治疗的早期或治疗前，即对干扰素治疗的长期疗效进行预测，有助于慢性丙肝患者治疗方案的优化...
- 潘孝本魏来
- 文献传递
- 粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞促进大鼠部分肝移植物的肝再生被引量：20
- 2005年
- 目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体骨髓干细胞是否会促进部分肝移植物的再生,减轻肝损伤。方法建立性别交叉的大鼠(雌性→雄性)50%部分肝移植模型(PLTx),移植前动员组:移植前受体皮下注射G-CSF5d;移植后动员组:移植后3h,注射G-CSF5d;未动员组:移植后3h,皮下注射生理盐水5d。分别与1、3、5、7和14d取肝脏。检测移植物内CD34干细胞标志,确定干细胞迁移入肝脏的情况,观察肝脏的有丝分裂相和溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)掺入检测肝再生情况,并检测sry+细胞确认细胞来源。结果用G-CSF动员后发现,移植后动员组14d生存率(90%)较移植前动员组(60%)和未动员组(50%)高,差异有统计学意义。与未动员组相比,移植后第3天,肝坏死灶少,有丝分裂指数高(30%±5%vs24%±6%,P<0·05),BrdU掺入高(42%±6%vs34%±4%,P<0·05),差异有统计学意义。移植后第3至14天,移植后动员组汇管区可见较多的CD34+的成堆或散在分布的淋巴细胞样细胞;移植后第3天,移植前动员组见汇管区较多的CD34+细胞。移植后第5天各组在肝窦和汇管区偶见sry阳性细胞,第14天,G-CSF动员两组汇管区周围sry阳性细胞增多,未动员组较少。结论移植后用G-CSF动员自体骨髓干细胞,受体生存率高,移植肝再生明显,肝损伤轻。
- 刘峰潘孝本陈国栋蒋栋丛旭费然魏来
- 关键词：肝移植干细胞粒细胞集落刺激因子肝再生
- 乙型肝炎病毒促进CTGF和TGF-β1在肝星状细胞中的表达被引量：10
- 2008年
- 目的:研究转染乙型肝炎病毒(HBV)的HepG2.2.15细胞株在体外促进肝星状细胞中CTGF和TGF-β1的表达,进而探讨HBV促肝细胞纤维化的机制.方法:将HepG2和HepG2.2.15细胞株分别在体外与肝星状细胞(LX-2)共培养,以单独培养的肝星状细胞为对照组.培养24,48,72 h后,以Real-time PCR定量检测肝星状细胞中CTGF和TGF-β1 mRNA的表达,以Western blot定量检测其蛋白表达结果:与对照组比较,在24、48、72 h时点,CTGF和TGF-β1 mRNA分别增高约1.7、4.2、9.6倍(P<0.01)和2.2、6.1、8.1倍(P<0.01),以72 h差异最为显著;而与HepG2细胞共培养实验组LX-2细胞CTGF和TGF-β1 mRNA在三个时间点分别增高约1.7、1.2、1.3倍(P<0.05)和2.7、1.9、2.1倍(P<0.05).CTGF和TGF-β1蛋白表达量分别增高约2.1、2.6、2.5倍(P<0.01)和1.7、3.3、3.1倍(P<0.01),以48 h差异最为显著:而与HepG2细胞共培养实验组LX-2细胞CTGF和TGF-β1蛋白表达量在三个时间点分别增高约1.6、1.1、0.9倍(P<0.05)和1.1、1.4、2.5倍(P<0.05).结论:与HepG2.2.15细胞株共培养后,肝星状细胞中肝纤维化相关因子的表达明显增强.体外实验证明HBV具有诱导肝细胞纤维化的重要作用.
- 哈明昊饶慧瑛刘峰潘孝本封波陈红松魏来
- 关键词：乙型肝炎病毒细胞共培养转化生长因子Β1
- 应用CRISPR／Cas9系统靶向切割细胞内乙型肝炎病毒基因组的研究被引量：2
- 2016年
- 目的应用近年发展的基因编辑技术成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeat，CRISPR）引导的Cas9核酸酶特异性靶向切割HBVDNA基因。方法基于慢病毒载体的lentiCRISPRv2系统，我们设计了3个特异靶向HBV基因组的向导RNA序列（guideRNA，gRNA）。质粒pUC18-HBV1．2和lentiCRISPR-gRNAs共转染HepG2细胞，或lentiCRISPR-gRNAs与相关慢病毒载体转染293T细胞后产生相应慢病毒。用慢病毒处理整合了HBVDNA的HepG2．2．15细胞或者HepDE19细胞系：并用慢病毒处理基于C57BL／6小鼠腺相关病毒HBV复制模型。结果单靶向CRISPR／Cas9切割可以抑制30％～50％病毒蛋白产生。两个或三个靶向切割则显著提高抑制效率，可达70％-90％。以慢病毒体系处理HepG2．2．15或HepDES19细胞时，HepDES19细胞中HBeAg下降幅度约为HepG2．2．15细胞中的3倍。HBV复制小鼠模型在CRISPR／Cas9慢病毒处理后，血清中HBsAg和HBeAg可转为阴性。结论CRISPR／Cas9系统多位点靶向切割可高效清除细胞内基因组，相对于整合于染色体的基因组，游离于细胞核的HBV基因组对此靶向切割系统更加敏感。
- 鲁宇青韩进超丛旭魏来潘孝本
- 关键词：共价闭合环状DNA基因抗病毒
- 环孢素A促进HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒核心蛋白入核的研究被引量：1
- 2007年
- 目的观察磷酸脂酶抑制剂环孢素A(CSA)对HBcAg表达和定位的影响,了解HBV生活的周期。方法以30μg/ml的CSA处理HepG2.2.15细胞2d或4d;共聚集显微镜观察细胞内HBcAg和HBsAg亚细胞定位;TUNEL方法检测细胞凋亡。结果对照组HepG2.2.15细胞中HBcAg主要定位于胞质。CSA处理2d后可使胞质中HBcAg和HBsAg水平下降,细胞核内HBcAg水平升高,可见约5%细胞发生凋亡。CSA处理4d后细胞核内HBcAg水平进一步提高,约25%细胞核内表达强度明显高于胞质,并约有30%细胞发生凋亡。结论CSA可促使HepG2.2.15细胞内HBcAg进入细胞核。HBcAg的核内表达定位增强可能与蛋白磷酸化水平增高,及细胞衰老或者凋亡有关。
- 潘孝本韩进超高燕魏来
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒核心蛋白质类环孢菌素
