吴伟
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：苏州大学医学部放射医学与防护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校优势学科建设工程资助项目国防基础科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生核科学技术生物学更多>>
- 耐辐射球菌PprI蛋白质对人脐静脉血管内皮细胞的毒性及辐射细胞增殖作用
- 2014年
- 耐辐射球菌（Deinococcus radiodurans）是迄今为止地球上发现抗辐射能力最强的生物之一[1-2].这种超强抗辐射能力主要被归结为3个方面的机制：保护、耐受和修复[3].而耐辐射球菌中的PprI蛋白在抗辐射损伤中起着十分重要的作用.研究表明,PprI蛋白具有抗辐射损伤药物开发的潜在应用价值.但目前对于PprI原核蛋白的毒性少见报道.本研究探讨了PprI蛋白对体外细胞增殖和毒性的影响,旨在为该蛋白进一步用于临床提供细胞学研究资料.
- 吴伟陈洁毕洁静施怡文玲杨占山
- 关键词：蛋白质细胞增殖作用毒性抗辐射损伤
- 耐辐射球菌PprI蛋白在毕赤酵母中的表达、发酵和纯化技术的研究
- 目的：利用毕赤酵母高效表达耐辐射奇球菌PprI蛋白，对pxxx//YYY毕赤酵母重组工程菌株诱导表达，并对PprI蛋白的诱导表达、纯化和发酵条件进行研究，并建立相应的表达、纯化和发酵技术路线，获得大量的PprI蛋白，为进...
- 吴伟
- 关键词：耐辐射奇球菌毕赤酵母发酵纯化
- 文献传递
- 耐辐射奇球菌PprI蛋白质在毕赤酵母菌中的高效表达及纯化被引量：1
- 2016年
- 目的 利用真核毕赤酵母高效表达原核的耐辐射奇球菌pprI基因,建立高效表达及纯化PprI蛋白质的技术路线。方法 根据毕赤酵母密码子的偏爱性,改造耐辐射奇球菌pprI基因的编码序列,利用PCR技术全合成改造过的pprI基因,并在其N末端添加一个6×His标签。PCR产物经纯化后克隆到毕赤酵母表达载体pHBM-905A中,利用Cop I和Not I双酶切并回收线性化的目的片段后,转化毕赤酵母GS115菌株。将获得的毕赤酵母转化子诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和质谱检测培养上清液,用Ni-NTA柱纯化目的蛋白,BCA法测定蛋白浓度。结果 新合成的耐辐射奇球菌pprI基因编码序列正确,毕赤酵母转化菌株的培养上清液经SDS-PAGE和Western blot均可检测到相对分子质量为43000的目的蛋白条带,经质谱检测证实该目的蛋白为耐辐射奇球菌PprI蛋白。选用Ni-NTA柱获得了大量纯化的PprI蛋白,应用浓度为250 mmol/L的咪唑淋洗时,PprI蛋白洗脱率最高。BCA法测得纯化蛋白浓度为0.35 mg/ml。结论 建立了一种新的适于毕赤酵母表达的耐辐射奇球菌pprI基因,成功构建了分泌表达PprI蛋白质的重组毕赤酵母工程菌株,建立了高效表达目的蛋白的技术路线,并获得了高效表达和纯化的PprI蛋白。
- 任丽丽吴伟施怡岳凌杨占山
- 关键词：耐辐射奇球菌毕赤酵母纯化
- 耐辐射球菌pprI基因转染对受照酵母菌抗氧化能力的影响被引量：4
- 2013年
- 研究不同剂量60Coγ射线对转染了耐辐射球菌pprI基因的毕赤酵母菌过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,探讨耐辐射球菌pprI基因在酵母菌中的表达对辐射细胞抗氧化能力的作用。Western blot检测酵母菌培养上清液中目的蛋白PprI的表达分泌。分别通过可见光法、单胺氧化法、分光光度比色法测定CAT、SOD和GSH-Px的活性。转染耐辐射球菌pprI基因的毕赤酵母菌中检测到PprI蛋白质的表达。当γ射线剂量为2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy时,不论是转基因毕赤酵母组还是对照组,CAT、SOD、GSH-Px活性均随着剂量的增加出现先升高后降低的趋势,并且受照后转基因毕赤酵母菌中3种酶的活性均显著高于对照组(p<0.01)。耐辐射球菌pprI基因在酵母菌中的表达能显著增强辐射细胞的抗氧化能力,这可能是原核pprI基因转染增强真核细胞抗辐射能力的机理之一。
- 丛瑛吴伟文玲杨占山
- 关键词：毕赤酵母过氧化氢酶谷胱甘肽过氧化物酶
