施怡
- 作品数：10 被引量：4H指数：2
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校优势学科建设工程资助项目国防基础科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学语言文字更多>>
- 耐辐射球菌PprI蛋白质对人脐静脉血管内皮细胞的毒性及辐射细胞增殖作用
- 2014年
- 耐辐射球菌（Deinococcus radiodurans）是迄今为止地球上发现抗辐射能力最强的生物之一[1-2].这种超强抗辐射能力主要被归结为3个方面的机制：保护、耐受和修复[3].而耐辐射球菌中的PprI蛋白在抗辐射损伤中起着十分重要的作用.研究表明,PprI蛋白具有抗辐射损伤药物开发的潜在应用价值.但目前对于PprI原核蛋白的毒性少见报道.本研究探讨了PprI蛋白对体外细胞增殖和毒性的影响,旨在为该蛋白进一步用于临床提供细胞学研究资料.
- 吴伟陈洁毕洁静施怡文玲杨占山
- 关键词：蛋白质细胞增殖作用毒性抗辐射损伤
- 耐辐射球菌PprI和TAT-PprI蛋白在毕赤酵母中的表达及其抗辐射作用与机理的研究
- 目的：耐辐射球菌是一种对电离辐射、紫外线等辐射引起的致死和突变效应具有极强抗性的微生物。这类超强的辐射抗性和它自身拥有的完善高效的DNA损伤修复通路密切相关。PprI是耐辐射球菌中一个独有的功能蛋白，它在DNA损伤修复的...
- 施怡
- 关键词：耐辐射球菌毕赤酵母抗辐射作用DNA损伤修复
- 文献传递
- 耐辐射奇球菌PprI蛋白质在毕赤酵母菌中的高效表达及纯化被引量：1
- 2016年
- 目的 利用真核毕赤酵母高效表达原核的耐辐射奇球菌pprI基因,建立高效表达及纯化PprI蛋白质的技术路线。方法 根据毕赤酵母密码子的偏爱性,改造耐辐射奇球菌pprI基因的编码序列,利用PCR技术全合成改造过的pprI基因,并在其N末端添加一个6×His标签。PCR产物经纯化后克隆到毕赤酵母表达载体pHBM-905A中,利用Cop I和Not I双酶切并回收线性化的目的片段后,转化毕赤酵母GS115菌株。将获得的毕赤酵母转化子诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和质谱检测培养上清液,用Ni-NTA柱纯化目的蛋白,BCA法测定蛋白浓度。结果 新合成的耐辐射奇球菌pprI基因编码序列正确,毕赤酵母转化菌株的培养上清液经SDS-PAGE和Western blot均可检测到相对分子质量为43000的目的蛋白条带,经质谱检测证实该目的蛋白为耐辐射奇球菌PprI蛋白。选用Ni-NTA柱获得了大量纯化的PprI蛋白,应用浓度为250 mmol/L的咪唑淋洗时,PprI蛋白洗脱率最高。BCA法测得纯化蛋白浓度为0.35 mg/ml。结论 建立了一种新的适于毕赤酵母表达的耐辐射奇球菌pprI基因,成功构建了分泌表达PprI蛋白质的重组毕赤酵母工程菌株,建立了高效表达目的蛋白的技术路线,并获得了高效表达和纯化的PprI蛋白。
- 任丽丽吴伟施怡岳凌杨占山
- 关键词：耐辐射奇球菌毕赤酵母纯化
- 原核pprI基因活体转染对BALB/c小鼠急性放射损伤保护作用的研究被引量：3
- 2015年
- 目的 研究耐辐射奇球菌pprI基因活体转染对小鼠急性放射损伤的防护作用.方法 采用SPF级纯品系BALB/c雄性小鼠,应用活体电转染技术,将pEGFP-c1空载质粒及pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转入小鼠股前肌肉.应用60Coγ射线进行全身照射,死亡率观察组吸收剂量为6 Gy,观察照后30 d内小鼠死亡率的变化;放射效应观察组吸收剂量为4 Gy,于照后1、7、14、28和35 d观察小鼠外周血象、胸腺、脾脏和骨髓细胞的凋亡率,并于照后第7和28天观察小鼠肺脏和睾丸组织的病理变化.结果 质粒注射剂量为50 μg/50μl,电场强度为200 V/cm时转染肌细胞的效率最高.pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠急性辐射死亡率为30％,显著低于单纯照射组（60.0％）和空载体组（63.3％）（x2=4.90、6.24,P＜0.05）.与单纯照射组、空载体组比较,pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠的外周血白细胞计数在照后1、7、14和28 d显著增高（F=16.26、8.10、6.37、10.74,P＜0.05）,血小板计数在照后第7和14天显著增高（F=7.36、5.71,P＜0.05）,淋巴细胞百分率在照后7d显著增高（F=18.43,P＜0.05）;胸腺和骨髓细胞凋亡率均在照后第1、7、14、28和35天显著降低（F=3.88、14.91、14.14、39.86、5.65,P＜0.05;F=53.70、11.75、21.78、41.40、4.54,P＜0.05）;脾脏细胞凋亡率在照后第1、7、14和28天显著降低（F=97.95、56.61、33.55、14.71,P＜0.05）.pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠肺脏和睾丸的放射病理损伤较轻并且恢复较快.结论 耐辐射奇球菌pprI基因活体电转染对BALB/c小鼠急性放射损伤具有显著的保护作用,为进一步临床应用奠定了实验基础.
- 施怡文玲任丽丽杨占山
- 关键词：耐辐射奇球菌BALB/C小鼠急性放射损伤
- 一种DNA分子及毕赤酵母重组质粒和高效表达耐辐射球菌PprI蛋白的毕赤酵母重组菌
- 本发明涉及生物技术领域，公开了包含SEQ ID NO:1所示序列的DNA分子，以及插入所述DNA分子的毕赤酵母重组质粒和转化所述毕赤酵母重组质粒到毕赤酵母感受态细胞并高效表达耐辐射球菌PprI蛋白的毕赤酵母重组菌。本发明...
- 杨占山吴伟乔惠萍文玲施怡任丽丽于冬
- 文献传递
- 耐辐射球菌pprI基因真核表达载体的构建及其抗辐射作用被引量：2
- 2014年
- 目的 研究耐辐射球菌pprI原核基因的真核表达载体的构建及其转染对离体真核细胞急性放射损伤的防护作用.方法 应用DNA重组技术构建pEGFP-c1-pprI质粒;采用脂质体转染技术分别将空载体质粒pEGFP-c1和重组质粒pEGFP-c1-pprI转入人肺上皮细胞系Beas-2B细胞,筛选稳定转染细胞系;应用集落形成实验检测受照转染细胞的生存能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化;荧光显微镜观察受照细胞ROS荧光强度;免疫荧光实验观察受照细胞不同时间γ-H2AX焦点数目.结果 成功地构建了pprI原核基因的真核表达载体,并在Beas-2B细胞中表达了PprI融合蛋白,建立了稳定转染细胞系.与空白对照组和空载体组相比,细胞克隆生存曲线显示转染了pprI基因的Beas-2B细胞经不同剂量辐射,其存活分数SF增加,该曲线参数D0、Dq、N增高;转染了pprI基因的Beas-2B细胞受照后的ROS的荧光强度和不同时间（1、2、4 h） γ-H2AX的焦点数均显著减低（F=16.73、19.47、6.94,P＜0.05）;此外,该细胞G2期阻滞（F=139.73、237.92,P＜0.05）和凋亡率显著减低（F=626.02、2 052,P＜0.05）.结论 耐辐射球菌pprI原核基因可在离体真核细胞中稳定表达,并且显著提高受照真核细胞的辐射抗性.
- 文玲施怡任丽丽丛瑛杨占山
- 关键词：耐辐射球菌急性放射损伤辐射抗性
- 一种新的耐辐射球菌PprI蛋白的用途及药物
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及PprI蛋白的用途及药物。本发明提供了PprI蛋白在制备防治高等真核生物辐射损伤药物中的应用。本发明研究发现PprI蛋白对人类细胞和小鼠急性放射损伤具有至关重要的防治作用，并增强了抗氧化和...
- 杨占山施怡任丽丽岳凌杨巍张舒羽
- 文献传递
- 耐辐射球菌PprI蛋白在毕赤酵母高效表达和纯化的研究
- 目的:利用毕赤酵母高效表达耐辐射球菌PprI 蛋白,并对PprI 蛋白的诱导表达、纯化和发酵条件进行研究,并建立相应的表达、纯化和发酵技术路线,获得大量的PprI 蛋白,以便进一步研究PprI 蛋白对放射损伤的防治作用和...
- 杨占山吴伟乔惠萍文玲施怡
- 模因论视域下的纪录片字幕翻译研究——以《美丽中国》为例
- Nowadays,as globalization brings more opportunities for cultural communication,film has become a great modern ...
- 施怡
- 关键词：汉英翻译模因论
- 一种有机材料蒸发源
- 本实用新型公开了一种有机材料蒸发源，包括置物容器，所述置物容器的顶部呈开口式设置，且置物容器的底部固定连接有底座，所述置物容器内插设有螺旋设置的加热丝，且加热丝的两端固定插设在底座的上侧壁并贯穿底座的下侧壁设置，所述置物...
- 周东营施怡冯莱
