高远梅
- 作品数：16 被引量：14H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>
- GINS2基因siRNA真核表达质粒的构建及其对NB4细胞凋亡的影响被引量：3
- 2012年
- 目的构建GINS2基因siRNA真核表达质粒,并检测其对NB4细胞凋亡的影响。方法人工合成针对GINS2基因的4组siRNA干扰序列和1组无同源性的序列,测序鉴定后转染低传代人早幼粒细胞系NB4细胞,经G418筛选后,通过QRT-PCR、Western blot检测重组质粒对NB4细胞中GINS2基因mRNA转录水平和蛋白表达水平的影响;流式细胞术检测NB4细胞的凋亡情况。结果 5组重组质粒经测序证明构建正确,4组干扰质粒转染NB4细胞后,细胞中GINS2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均有所降低,其中干扰组1基因干扰率达50%,蛋白相对表达量为56%;干扰组1细胞凋亡率为32.54%,较正常对照组和NC组明显上升(P<0.01)。结论成功构建了GINS2基因siRNA真核表达质粒,抑制GINS2基因的表达可促进NB4细胞的凋亡,为进一步研究GINS2基因在白血病中的作用奠定了基础。
- 高艳军刘北忠钟梁初晨吴秀娟黎亮张曦高远梅胡秀秀
- 关键词：RNA干扰NB4细胞细胞凋亡
- Sysmex XN-1000全自动血细胞分析仪性能评价
- 目的：对全自动血细胞分析仪Sysmex XN-1000的主要性能进行评价.方法;按照卫生行业标准WS/T406-2012 《临床血液学检验常规项目分析质量要求》,对Sysmex XN-1000血液分析仪的精密度、携带污染...
- 高远梅
- 干扰GINS2表达对HL60细胞增殖和凋亡的影响被引量：6
- 2013年
- 目的:探讨靶向抑制GINS2基因表达后对人早幼粒细胞白血病细胞株HL60增殖和凋亡的影响及其机制。方法:RT-PCR分别检测GINS2基因在三株白血病细胞HL60、U937、THP-1的表达。设计与合成针对GINS2基因的干扰序列,稳定转染高表达该基因的HL60细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况;RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞转染后mRNA和蛋白质水平;MTT法检细胞的增殖和凋亡情况;流式细胞术分析细胞的凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果:在三株白血病细胞株中,GINS2的表达量由低到高依次是:THP-1,U937,HL60。干扰质粒转染HL60细胞后,与阴性对照组及未处理组相比,干扰组GINS2的mRNA和蛋白质水平均显著降低,且细胞的增殖能力明显受抑。同时,凋亡相关蛋白Bax表达水平显著增高而Bcl2显著降低。结论:干扰GINS2基因表达后,其mRNA和蛋白质水平均显著降低,可通过上调Bax表达,下调Bcl2表达来抑制HL60细胞增殖并促进其凋亡。
- 张曦刘北忠高艳军黎亮高远梅胡秀秀马鹏鹏钟梁
- 关键词：细胞凋亡HL60细胞BAXBCL2
- 下调GINS2表达抑制HL60细胞周期调控因子被引量：6
- 2013年
- 目的观察下调GINS2的表达后对人白血病细胞系HL60周期调控因子的变化并探讨其机制。方法脂质体介导并稳定转染干扰质粒的细胞为干扰组,转染阴性对照质粒的细胞为阴性对照组,只加入脂质体的细胞为空白对照组,未转染的HL60细胞为未处理组。集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期;3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成;Western blot检测CDK1、cyclinB1等蛋白;RT-PCR检测ATM,CHK2,P53等mRNA水平;Western blot检测其蛋白水平。结果和其他3组相比,干扰组细胞G2期细胞数明显增加、DNA合成受阻、增殖减慢。与G2期相关周期调控蛋白CDK1,cyclinB1的表达随时间变化而明显降低。和其他3组相比,干扰组细胞ATM,CHK2,P53转录水平和翻译水平显著上调。结论下调GINS2表达后可抑制HL60细胞DNA复制并影响其G期进程,机制可能与ATM,CHK2,P53等基因相关。
- 张曦钟梁高远梅胡秀秀王慧朱新瑜刘北忠
- 关键词：HL60细胞G2期阻滞
- PML(NLS-)基因对白血病细胞HL-60的生物学功能影响
- 第一部分、重组腺病毒Ad-PML(NLS-)的构建及其鉴定 目的：构建携带PML(NLS-)的腺病毒并观察其对K562细胞增殖的影响。 方法：以质粒pCMV-HA-PML(NLS-)为模板，PCR扩增PML(NLS-...
- 高远梅
- 关键词：白血病HL-60细胞细胞增殖大黄素
- Ad-NLS-RARα对HL-60细胞增殖及ATRA诱导的HL-60细胞分化的影响及其机制被引量：1
- 2013年
- 目的将已构建验证成功的重组腺病毒Ad—NL＆RARα感染至HL-60细胞中，探讨其对HL-60细胞增殖及全反式维甲酸（ATRA）诱导的HL-60细胞分化的影响及机制。方法将验证正确的腺病毒经Protaminesulfate辅助感染Hl-60细胞，检测感染效率，用RT-PCR和Westernblot检测目的基因在HL-60细胞中的表达情况。MTT法检测细胞增殖情况。病毒感染HL-60细胞24h后，用2．5μmol／LATRA处理，流式细胞术（FCM）检测细胞表面分化抗原CDllb的表达。RT—PCR和Western blot检测GMYC基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果在Protamine sulfate辅助感染作用下，重组腺病毒Ad—NLS-RARα和阴性对照腺病毒Ad—KZ对HL-60细胞的感染效率可达70％～80％。NL＆RARα基因的RT—PCR和Westernblot结果显示，感染了重组腺病毒Ad—NL＆RAR口的HL-60细胞的NLS-RAR口基因的mRNA及蛋白表达水平明显增高（P〈0．05）。MTT法检测表明感染了重组腺病毒Ad-NLS-RARα的细胞增殖能力增高（P〈O．05）。FCM检测结果显示，经ATRA处理后，感染Ad—NLS-RAR口重组腺病毒的HL-60细胞，CDllb表达较阴性对照组和未感染组下调（P〈O．05）。C-MYC基因的RT—PCR和Westernblot检测结果表明，经ATRA处理后，感染Ad—NLS-RARα重组腺病毒的细胞C—MYC基因的mRNA和蛋白水平均高于其他两组（P〈0．05）。结论重组腺病毒Ad—NL-SRARα可以促进HL-60细胞的增殖，并通过上调GMYC基因的表达，抑制ATRA诱导的HL-60细胞分化。
- 胡秀秀刘北忠钟梁高远梅张曦吴秀娟王慧朱新瑜
- 关键词：重组腺病毒HL-60细胞细胞分化
- XN-1000全自动血细胞分析仪体液模式检测性能验证被引量：1
- 2017年
- 目的对XN-1000全自动血细胞分析仪(XN-1000分析仪)体液模式检测性能进行验证。方法对XN-1000分析仪体液模式检测白细胞总数(WBC-BF)、红细胞总数(RBC-BF)、单个核细胞百分比(MN%)、多个核红细胞百分比(PMN%)进行性能验证,包括本底计数、精密度、携带污染率、线性范围;与XT-4000i全自动血细胞分析仪和镜检法检测结果比较,验证准确度。结果稀释液WBC-BF、RBC-BF本底计数均为0.00。WBC-BF、RBC-BF检测携带污染率分别为0.1%、0.0%。WBC-BF、RBCBF检测变异系数分别为0.68%和2.50%。WBC-BF、RBC-BF、PMN%、MN%检测结果与镜检法检测结果的回归方程相关系数平方(R^2)分别为0.998 7、0.974 3、0.931 3和0.901 4。结论 XN-1000分析仪体液模式检测性能较好,可用于临床体液标本的检测。
- 高远梅秦旖璐
- 关键词：全自动血细胞分析仪体液性能评价
- 重组腺病毒Ad-PML(NLS)-的构建及鉴定
- 2013年
- 目的构建携带PML(NLS-)基因的重组腺病毒,并观察其对白血病K562细胞增殖的影响。方法以质粒pCMV-HA-PML(NLS-)为模板,PCR扩增PML(NLS-)基因,与穿梭质粒pAdTrace-TO4连接,构建重组穿梭载体pAdTrace-TO4-PML(NLS-),经PmeⅠ酶切线性化后,转化入感受态BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-PML(NLS-),经PacⅠ酶切后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-PML(NLS-),经4轮扩增后,检测其滴度。采用RT-PCR法和Western blot法分别检测重组腺病毒中PML(NLS-)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;将重组腺病毒感染K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖活力的影响。结果重组腺病毒质粒pAd-PML(NLS-)经PCR和单酶切鉴定,证明构建正确;经4轮扩增,重组腺病毒的滴度为1×1010pfu/ml;Ad-PML(NLS-)携带的PML(NLS-)能够在AD293细胞中稳定表达;与未感染组和空载病毒感染组相比,重组腺病毒Ad-PML(NLS-)感染的K562细胞的增殖活力明显增强(P<0.05)。结论成功构建了重组腺病毒Ad-PML(NLS-),其可促进K562细胞的增殖,表明PML(NLS-)可能具有促癌基因的作用。
- 高远梅刘北忠张曦胡秀秀钟梁
- 关键词：重组腺病毒K562细胞细胞增殖
- 重组腺病毒Ad-NLS-RARα的构建及其在K562细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建含NLS-RARα基因的重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并检测其在K562细胞中的表达。方法以质粒pGBKT7-PML-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,与穿梭质粒dTrace-TO4连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TO4-NLS-RARα,经PmeⅠ酶切线性化后,转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒pAd-NLS-RARα,经PacⅠ酶切线性化后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-NLS-RARα,经4轮扩增后,测定重组腺病毒滴度,并进行PCR及测序鉴定;将重组腺病毒感染K562细胞,采用流式细胞术测定感染效率,RT-PCR法和Western blot法检测NLS-RARα在K562细胞中的转录及表达水平。结果重组腺病毒Ad-NLS-RARα经4轮扩增后,滴度可达6.9×108pfu/ml,PCR及测序鉴定证明构建正确,对K562细胞的感染效率可达70%左右;重组腺病毒Ad-NLS-RARα携带的NLS-RARα基因可在K562细胞中高效表达。结论已成功构建了重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并在K562细胞中高效表达了NLS-RARα基因。
- 胡秀秀刘北忠钟梁高远梅张曦吴秀娟王慧朱新瑜
- 关键词：腺病毒K562细胞基因表达
- PML(NLS~–)蛋白在NB4细胞及其裸鼠移植瘤中定位的验证
- 2014年
- 验证中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)切割PML-RARα后,PML(NLS–)蛋白的存在和定位。将质粒pCMV-HA-NE电转染NB4细胞,用Western blot法验证质粒转染成功;提取电转染质粒成功的NB4细胞的胞浆蛋白,用Western blot法检测NB4细胞中PML(NLS–)蛋白的表达;免疫荧光法和激光共聚焦检测电转染质粒成功的NB4细胞中PML(NLS–)蛋白的表达及定位;同时,建立NB4细胞、K562细胞和电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠皮下瘤模型,用Western blot、免疫组化法检测PML(NLS–)蛋白在移植瘤组织细胞中的表达与定位。结果表明,Western blot检测电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞成功表达NE蛋白;NE酶成功切割PML-RARα,Western blot检测到电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞表达PML(NLS–)蛋白;免疫荧光和激光共聚焦均可检测到电转染质粒成功的NB4细胞中PML(NLS–)蛋白定位于细胞胞浆;Western blot和免疫组化法检测到电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠移植瘤中的PML(NLS–)蛋白的表达且定位于细胞胞浆,而NB4和K562细胞裸鼠皮下瘤中PML蛋白主要定位于胞核。综上所述,该文成功将质粒pCMV-HA-NE电转染NB4细胞并用Western blot、免疫荧光、激光共聚焦、免疫组化验证PML(NLS–)蛋白存在于NB4细胞胞浆,这一现象可以为急性早幼粒细胞白血病的临床早期诊断与治疗提供新的依据。
- 朱新瑜刘北忠高远梅马鹏鹏王慧钟梁
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病NB4细胞
