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王家融

作品数：7 被引量：12H指数：2
供职机构：苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室更多>>
发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅科研基金国防科技工业技术基础科研项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 6篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 5篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 4篇细胞
  • 4篇腺病
  • 4篇腺病毒
  • 4篇ING4
  • 3篇腺病毒载体
  • 3篇白血
  • 3篇白血病
  • 3篇RGD
  • 3篇病毒载体
  • 2篇凋亡
  • 2篇染色
  • 2篇染色体
  • 2篇人黑色素瘤
  • 2篇人黑色素瘤细...
  • 2篇基因
  • 2篇黑色素
  • 2篇黑色素瘤
  • 2篇黑色素瘤细胞
  • 2篇白血病细胞
  • 2篇PTEN

机构

  • 7篇苏州大学
  • 2篇上海交通大学

作者

  • 7篇王家融
  • 7篇盛伟华
  • 7篇杨吉成
  • 7篇缪竞诚
  • 2篇张凤娟
  • 1篇黄晨
  • 1篇韩亚丽
  • 1篇包婉蓉
  • 1篇郁心

传媒

  • 2篇中国生物工程...
  • 1篇中国肿瘤生物...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇北华大学学报...
  • 1篇内科理论与实...

年份

  • 2篇2016
  • 1篇2014
  • 1篇2013
  • 3篇2011
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响被引量：1
2011年
目的构建表达人白血病抑制因子（LIF）和抑瘤素M（OSM）双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞，并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34造血干／祖细胞体外增殖和分化的影响。方法以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。为基础，将OSM基因片段酶切后插入，构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM。将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化，获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM，通过包装，收获重组腺病毒（Ad-LIF-OSM）。将重组腺病毒感染饲养层细胞，经RT．PCR、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达；体外与CD34造血干／祖细胞共培养后，通过Transwell法和细胞计数检测，比较各实验组干／祖细胞体外扩增与分化情况。结果测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确；转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达；外源LIF和OSM基因在造血干／祖细胞体外培养中能够发挥作用。结论成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体（Ad-LIF-OSM），Ad-LIF．OSM在造血干／祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34造血干／祖细胞，并延缓其分化。
包婉蓉郁心盛伟华张凤娟王家融杨吉成缪竞诚
关键词：白血病抑制因子抑瘤素M
ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究被引量：8
2013年
目的用人肿瘤生长抑制因子(mING4)及人白介素24(IL-24)基因构建腺病毒双基因共表达载体(Ad-ING4-IL-24),并设Ad-ING4和Ad-IL-24单基因对照,研究双基因共表达载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用.方法首先将已构建成功的Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4及Ad-IL-24腺病毒感染QBI-293A细胞,经多轮扩增后获得高滴度的病毒子,测病毒效价后分别以100 MOI剂量感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING-4及IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法检测ING-4及IL-24基因表达对MG-63细胞的生长抑制效应;半定量RT-PCR法检测ING4及IL-24基因表达对MG-63细胞中的Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34等相关基因表达的影响.结果获得了高滴度的重组腺病毒Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4,Ad-IL-24和Ad-GFP;治疗后MG-63细胞中ING-4及IL-24双基因表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,ING-4及IL-24基因表达可通过上调细胞中Bax,Caspase3,p21和下调Bcl-2,CD34基因表达诱导细胞凋亡.在病毒子剂量为100 MOI时,Ad-ING4-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑制作用比对Ad-ING4和Ad-IL-24抑制效果更为显著.结论腺病毒介导的ING4或/和IL-24基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,且Ad-ING4-IL-24双基因比Ad-ING4和Ad-IL-24单基因的抑制效果更为显著,该现象可能是通过改变Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34基因表达水平来发挥抗肿瘤作用的.
王家融韩亚丽缪竞诚盛伟华杨吉成
关键词：ING4基因IL-24基因腺病毒载体
腺病毒介导的人抑瘤素M基因对A375人黑色素瘤细胞的抑制作用被引量：1
2011年
目的:构建抑瘤素M(OSM)重组腺病毒载体,研究其对人黑色素瘤细胞A375的抑制作用。方法:以PEGZ-OSM重组质粒为模板,通过PCR技术扩增出OSM片段,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人OSM氨基酸序列相同的重组腺病毒子Ad-OSM,感染A375细胞,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测OSM在A375细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A375细胞的形态学改变;MTT法和流式细胞术(FCM)检测Ad-OSM对A375细胞的生长抑制和细胞周期的抑制效应;半定量RT-PCR法检测OSM基因表达对A375细胞中的Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和PCR分析结果显示,成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体;RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A375细胞中的转录和表达;OSM基因的表达对A375细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体,感染OSM基因可明显抑制A375人黑色素瘤细胞的生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变Bax、Bcl-2基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。
张凤娟杨吉成盛伟华王家融缪竞诚
关键词：腺病毒载体黑色素瘤凋亡
Ad.RGD-ING4和PTEN对白血病细胞株抑癌作用
2016年
目的：构建RGD修饰的生长抑制因子4（ING4）和（或）10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法：在本科室已成功构建的p Ad Track-巨细胞病毒（CMV）-多腺苷酸（poly A）启动子腺病毒载体上,通过常规的分子生物学方法,获得RGD修饰的ING4和（或）PTEN单、双基因重组腺病毒,将其与未经RGD修饰的基因重组腺病毒同时感染QBI-293A细胞,检测和比较病毒的效价,并以10、50、100、200感染复数（MOI）不同剂量感染不同肿瘤细胞和人胚肺正常二倍体细胞系WI-38,培养48 h后在荧光显微镜下观察和用流式细胞仪检测,通过比较各组细胞中绿色荧光蛋白（GFP）阳性细胞比例来检测其对不同肿瘤细胞的感染效率。结果：经荧光显微镜观察各组重组腺病毒可见GFP的表达,反转录（RT）-PCR鉴定结果表明均可产生预期大小750 bp的ING4和1 209 bp的PTEN PCR产物,基因测序结果与预期序列相一致。RGD修饰的基因重组腺病毒载体效价分别比未经修饰的基因重组腺病毒效价高3～4倍（P=0.027）。流式细胞仪检测显示RGD修饰的基因重组腺病毒比未经修饰的基因重组腺病毒载体对各组肿瘤靶细胞有更高的GFP表达,感染效率明显提高,尤其对人白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01差异最为明显,未经改造的腺病毒载体感染白血病细胞后GFP阳性率仅3.16%～5.01%,而带有RGD的腺病毒载体感染后GFP阳性率可达到23.11%～31.58%（P=0.001 3）。结论 ：成功构建了RGD修饰的ING4和（或）PTEN单、双基因重组腺病毒载体。RGD修饰的ING4和（或）PTEN基因重组腺病毒明显提高了腺病毒的效价,在各种肿瘤细胞感染效率中以白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01最为明显。
韩亚丽王家融杨吉成盛伟华缪竞诚
关键词：RGD白血病细胞株生长抑制因子4
Ad.RGD-ING4-PTEN对MEG01人白血病细胞的抑制作用被引量：1
2014年
目的:构建RGD修饰的ING4和PTEN双基因共表达重组腺病毒载体(Ad.RGD-ING4-PTEN),研究其对人白血病细胞MEG01的抑制作用。方法:采用AdEasyTM腺病毒重组系统,在本科室已成功构建的pAdTrack-CMV-ING4-polyA-promoter、pAdTrack-CMV-polyA-promoter腺病毒转移质粒的基础上,在多克隆酶切位点的Not I、Xho I间插入PTEN片段,得到pAdTrack-CMVING4-polyA-promoter-PTEN重组转移载体,与RGD-4C修饰的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(RGD)同源重组后,经包装和扩增获得ING4和PTEN双基因共表达重组腺病毒Ad.RGD-ING4-PTEN。将Ad.RGD-ING4-PTEN体外感染人白血病细胞MEG01,检测腺病毒对MEG01细胞的感染效率,Western blot法检测外源基因ING4和PTEN在MEG01细胞中的表达,CCK8法检测外源基因的导入对MEG01细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测外源基因导入对MEG01细胞的凋亡和周期的影响。结果:鉴定结果显示,成功构建了Ad.RGD-ING4-PTEN双基因共表达腺病毒,其能有效地感染MEG01细胞。Western blot检测到ING4和PTEN在MEG01细胞中的表达;ING4和PTEN基因能明显抑制MEG01细胞的生长,诱导其凋亡并产生G2/M期阻滞作用,且双基因联合作用较单基因作用更明显。结论:成功构建了RGD-4C修饰的ING4和PTEN双基因共表达腺病毒载体Ad.RGD-ING4-PTEN。收获的腺病毒能有效感染人白血病MEG01细胞。Ad.RGD-ING4-PTEN具有抑制MEG01细胞的生长、诱导其凋亡及G2/M期阻滞的作用。
黄晨王家融杨吉成盛伟华缪竞诚
关键词：腺病毒ING4PTEN白血病
腺病毒介导的人抑瘤素M基因对A375人黑色素瘤细胞的抑制作用
目的：构建抑瘤素M(OSM)重组腺病毒载体，研究其对人黑色素瘤细胞A375的抑制作用。方法：以PEGZ-OSM重组质粒为模板，通过PCR技术扩增出OSM片段，采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人OSM氨基酸...
张风娟杨吉成盛伟华王家融缪竞诚
关键词：腺病毒载体黑色素瘤细胞凋亡基因重组
Ad.RGD-ING4-PTEN对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡及侵袭的影响被引量：2
2016年
目的:探讨经RGD修饰的生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因与第10染色体缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)双基因共表达的腺病毒载体(Ad.RGD-ING4-PTEN)体外对神经胶质瘤U87细胞的增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:以Ad.RGD-ING4-PTEN为实验组,Ad.RGD-ING4/-PTEN为单基因对照组,PBS、Ad.RGD/Ad-GFP为空白对照组,分别体外感染U87神经胶质瘤细胞。Western blotting检测目的基因ING4和PTEN在U87细胞中的表达,MTT法检测实验组病毒感染对U87细胞增殖的影响,流式细胞术及Real-time PCR法检测神经胶质瘤细胞凋亡及凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、caspase-3、HIF-1α)表达变化,划痕实验及Transwell实验检测实验组病毒感染对U87细胞迁移及侵袭能力的影响,Real-time PCR法检测侵袭相关基因(MMP-2、MMP-9)表达变化。结果:成功检测到ING4和PTEN仅在实验组及相应单基因对照组中表达。实验组第5天细胞抑制率可达(83.1±4.6)%、凋亡率可达(40.7±4.3)%,与单基因组及空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);实验组能明显上调U87细胞中Bax、caspase-3和下调HIF-1α、Bcl-2等细胞凋亡相关蛋白的表达(均P<0.05),而且肿瘤侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达也明显下调(均P<0.05);实验组细胞迁移距离[(70.1±6.2)μm]和穿膜细胞数[(26.6±3.5)个]均明显减少,与单基因组及空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:与单基因腺病毒相比,Ad.RGD-ING4-PTEN双基因具有更显著的抑制U87神经胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,并抑制其迁移及侵袭能力。
韩亚丽王家融杨吉成盛伟华缪竞诚
关键词：神经胶质瘤
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