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危敏
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- 所属机构:深圳市南山区妇幼保健院
- 所在地区:黑龙江省 鹤岗市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:广东省自然科学基金
相关作者
- 马文丽
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- 研究主题：基因芯片 产气荚膜梭菌 聚合酶链反应 血液流变学 SYSMEX
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- 研制和优化寡核苷酸芯片以初步实现对多种常见HPV（Human papillomavirus）病毒的分型检测．应用生物学软件对四型常见HPV病毒（6、11、16、18型）的全基因组序列进行分析，设计具有型特异性、熔解温度（Tm）相近的-60mer寡核苷酸探针，对玻片片基进行优化处理后，点样制备成寡核苷酸基因芯片．将含HPV全长基因序列的质粒作为阳性标准品，利用梯度限制性荧光标记技术对其进行荧光标记，标记好的样品与芯片杂交．结果显示HPV样品与相应的型特异性探针杂交有明显的荧光信号，而与阴性对照探针和空白对照探针没有杂交信号．通过对芯片片基处理和样品荧光标记方法的优化，可以提高芯片检测的杂交特异性和荧光信号强度．
- 危敏马文丽孙朝晖张晋芳李凌郑文岭
- 关键词：寡核苷酸芯片
- 应用寡核苷酸芯片对乙型肝炎病毒转染HepG2细胞基因表达谱的研究
- 2008年
- HBV与肝细胞之间相互作用的分子机制还不清楚，对HBV蛋白调控宿主细胞基因表达情况也了解甚少。本实验选用基因芯片进行HBV基因表达谱改变的研究，筛选HBV感染应答基因，探讨HBV感染的分子致病机制，寻找预防和治疗HBV感染的靶点。
- 孙朝晖杨慧兰危敏王从容石玉玲
- 关键词：表达谱
- 长链非编码RNA SPATA31D5P吸附微小RNA-320a促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭
- 2021年
- 目的乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA(lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关。本研究旨在探讨lncRNA SPATA31D5P在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。方法收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平。选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)法、Transwell小室实验和细胞划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变。采用生物信息学方法筛选可与SPATA31D5P互补结合的miRNAs,Real-time PCR及双荧光素酶报告实验验证SPATA31D5P对miR-320a的调控作用。结果乳腺癌组织中SPATA31D5P水平显著高于邻近正常乳腺组织,各乳腺癌细胞系中SPATA31D5P表达都高于正常乳腺上皮细胞MCF10 A。siRNA干扰组的SPATA31D5P水平为0.288±0.052,低于空白对照组的1.114±0.096和阴性对照(NC)组的1.079±0.128(P<0.01)。与NC组和空白对照组相比,干扰组MDA-MB-231细胞的增殖活力明显下降并出现G_(1)期阻滞,凋亡率明显增加(P<0.01);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(14.36±1.75)%和(26±1.52)个,低于NC组的(52.25±1.87)%和(67.33±2.91)个(P<0.01)。双荧光素酶实验证实,SPATA31D5P能够直接调控miR-320a的表达及荧光素酶活性。结论 SPATA31D5P在乳腺癌中高表达,干扰其表达能有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控miR-320a有关。
- 危敏余海浪王涵多郜蕊雷洁
- 关键词：乳腺癌长链非编码RNA实时定量聚合酶链反应
- 青蒿素作用前后K562细胞基因表达谱的改变被引量：2
- 2009年
- 目的:利用基因表达谱芯片研究青蒿素对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法:青蒿素处理K562细胞24h后,分别提取处理组和对照组细胞的总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用Cy3和Cy5两种不同的荧光染料进行线性扩增标记,与人全基因组基因表达谱芯片杂交,采用生物信息学方法分析青蒿素处理前后K562细胞基因表达谱的改变。结果:总共发现差异基因238个,其中上调基因136个,下调基因102个,并对其进行生物学功能分类。结论:应用全基因组表达谱芯片并结合Panther生物学软件分析差异表达基因,青蒿素作用K562细胞主要是通过细胞毒作用诱导细胞凋亡,而抑制细胞生长作用并不明显。
- 丁大鹏马文丽吴清华周珏宇危敏郑文岭
- 关键词：青蒿素基因芯片基因表达谱K562
- 八年制医学教育PCR教学模式的系统构建与实践被引量：4
- 2012年
- 为培养八年制医学教育的高层次人才,本研究将PBL/CBL/RBL三种教学法进行系统整合、构建PCR教学模式,并应用于两个年级八年制生物化学教学。以问卷调查评价教学效果。结果表明,该教学模式在学生的能力培养等方面具有显著优势,具有重要的示范意义及推广价值,可望如聚合酶链式反应(PCR)技术的作用一样将教学质量进行高效"扩增"放大。
- 李凌朱利娜张宝肖维威危敏马文丽
- 关键词：医学教育PCR教学模式
- 血浆循环DNA检测在鼻咽癌诊断研究中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的建立并完善一种新的体外循环DNA(cDNA)检测方法,并探讨cDNA检测在鼻咽癌(nasopharyr-geal carcinoma,NPC)患者诊断中的应用价值。方法对196例经病理证实的NPC患者以微量基因组抽提试剂盒抽提血浆DNA,以荧光定量Real-time PCR测定含量,并以健康体检者125例作为对照组。结果临床分期各组与治疗前相比,P均<0.05,可见有明显差异;不论治疗前后,NPC患者各组与正常对照组相比,均有明显差异,P均<0.05;cDNA含量与临床分期的关系:根据Ct值的逐渐减少,可见含量水平随着临床分期增加呈增高的趋势,但组间比较并无统计学意义(P>0.05)。结论利用Real-time PCR法测定NPC患者cDNA,对临床NPC的诊断、疗效判断有较大的价值。
- 孙朝晖石玉玲危敏王蜀燕
- 关键词：循环DNA鼻咽部肿瘤
- 肝炎病毒诊断分型寡核苷酸芯片的制备与应用被引量：1
- 2007年
- 目的研制联合诊断HBV、HDV、HCV及HCV分型的寡核苷酸（Oligo）芯片，并进行系列优化及临床应用性研究。方法从GenBank数据库获取HBV全长DNA序列，HDV及HCV4个基因型全长cDNA序列，根据BLAST分析结果获得HBV、HDV种属保守序列及HCV各型特异性序列，以作为设计Oligo探针的备选序列。用Array designer 3．0分别对BLAST检索所得的HBV、HDV种属保守序列和HCV型特异性序列逐一进行分析，设计长度均一的60mer Oligo探针。从HBV、HDV、HCV种属保守序列和HCV型特异性序列中分别挑选出16、8、68条60 mer Oligo探针。Oligo探针合成和纯化后，用芯片打印仪固定在玻片上。为便于研究，先后制备了2种芯片，包括HBV、HDV诊断芯片、HCV分型芯片。采用限制性显示PCR技术进行样品荧光标记后与芯片杂交，并根据杂交结果筛除了有非特异杂交和信噪比低于4．0的探针，选取高特异的探针制备了HBV、HDV、HCV联合诊断分型芯片。结果从杂交效果来看，研制的Oligo芯片特异性较高，可有效用于HBV、HDV、HCV的联合诊断及HCV的分型。为了适应临床诊断的要求，对芯片进行了实验条件摸索和一些优化，均取得较好的效果。结论制备的肝炎病毒诊断分型芯片检测敏感性、特异性均佳，具有较为广阔的应用前景，为下一阶段进行中试规模的临床血清样品检测做好了准备。
- 孙朝晖杨慧兰危敏王蜀燕王从容石玉玲马文丽
- 关键词：肝炎病毒寡核苷酸类杂交基因芯片
- 诺贝尔奖案例学习在蛋白质双语教学中的应用被引量：3
- 2014年
- 双语教学是培养高素质国际化医学人才的重要途径,医学生物化学双语教学存在专业术语难度大、跨度广、内容复杂等问题。"蛋白质的结构与功能"章节与生物化学突破性进展密切相关,在临床八年制及卓越创新班中,通过学生收集与课程相关诺贝尔奖案例的英文材料,"以学生为主体,以案例为中心"的双语教学新模式得到了实践。文章总结了双语教学的实施方法及教学效果评价。
- 石嵘马文丽郑文岭周珏宇危敏
- 关键词：生物化学双语教学
- 人乳头瘤病毒芯片寡核苷酸探针的研究
- 2006年
- 高危型人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌的主要致病因子。利用Arraydesigner2·0和BLAST等生物学软件对10种型别的人乳头瘤病毒全基因组序列进行分析,设计高特异性、熔解温度(Tm)和GC含量相近的60merHPV型特异性寡核苷酸探针,用于HPV检测芯片的制备,并对其中四型最常见HPV病毒(HPV6,11,16,18探针的有效性进行初步验证,结果表明设计所得的探针型特异性好,可以应用于HPV的检测与分型。
- 危敏马文丽李凌张宝郑文岭
- 关键词：人乳头瘤病毒寡核苷酸芯片
