陈虹 作品数:74 被引量:305 H指数:8 供职机构: 中国医学科学院基础医学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
类固醇激素受体RNA激活因子研究进展 2006年 傅成波 陈虹 黄秉仁关键词:类固醇激素受体 配体结合域 靶基因表达 细胞转录因子 DNA序列 IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响 被引量:2 2014年 目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位。用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用。用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响。结果成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上。细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在。细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达。结论证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据。 杨霞 张俊文 黄秉仁 陈虹关键词:TRAF6 NF-ΚB ISRE 相互作用 HRSP12慢病毒表达载体的构建及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及增殖的影响 2014年 目的构建热反应蛋白12(heat-responsive protein 12,HRSP12)慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装慢病毒颗粒并感染宫颈癌细胞HeLa,分析过表达的HRSP12对HeLa细胞凋亡和增殖的影响。方法用反转录PCR扩增HRSP12全长编码顺序,构建慢病毒表达载体,利用人胚肾细胞HEK293T包装重组的慢病毒颗粒,感染HeLa细胞,用蛋白免疫印迹法检测剪切的半胱氨酸/天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)并用MTS比色法检测HeLa细胞增殖的情况。结果编码全长HRSP12的cDNA片段为414bp,克隆至pWPI-linker载体成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装的慢病毒颗粒能够高效感染HeLa细胞,在细胞内表达Flag-HRSP12融合蛋白。HRSP12的过表达能够引起HeLa细胞caspase-3的剪切体增多,能够抑制HeLa细胞的增殖。结论成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,初步结果表明,HRSP12可能具有诱导HeLa细胞凋亡、抑制细胞增殖的活性,为进一步研究HRSP12的生物学功能奠定了基础。 谭宽 张璇 马晓骊 黄秉仁 陈虹 陈等关键词:慢病毒载体 细胞凋亡 人SRY基因表达及表达蛋白的结合功能研究 被引量:18 1998年 目的研究人类性别决定基因(sexdeterminingregionontheYchromosome,SRY)表达蛋白对下游基因的调节作用。方法将SRY基因HMG结构域片段与表达载体PET-15b-进行重组,构建了SRY基因的表达质粒PETSY,转入大肠杆菌中表达,组氨酸结合树脂柱纯化表达蛋白,与苗勒氏管抑制因子基因(Mülerianinhibitingsubstance,MIS)启动子区片段进行凝胶电泳阻滞试验及竞争试验。结果获得SRY基因表达蛋白,分子量接近20.8U(21kD),凝胶电泳阻滞试验及竞争试验表明,SRY表达蛋白能特异结合位于19号染色体的MIS基因的启动子区。结论提示SRY基因对MIS基因转录具有调节作用。 杜晓娟 伏瑾 蔡玲玲 陈虹 黄秉仁关键词:性别决定基因 基因表达 MIS 46,XX真两性畸形的基因诊断 被引量:1 1994年 睾丸决定因子(Testis-determiningfactor,TDF)位于Y染色体短臂上,它的表达产物诱导睾丸组织的发生。SRY基因(Sex-determiningregionoftheY)位于Y染色体的性别决定区内,许多特征显示SRY可能就是TDF。采用多聚酶链反应(PCR)结合斑点杂交对3例46,XX真两性畸形性腺组织的石蜡切片中SRY基因进行检测,2例检测到SRY基因,1例未检测到。性腺组织病理检查均为卵睾组织。为探讨两性畸形的发病机理提供了资料。 杜晓娟 熊健 陈虹关键词:两性畸形 聚合酶链反应 斑点杂交 一种改进的重复多色荧光原位杂交技术 被引量:1 2005年 多色荧光原位杂交技术是在常规荧光原位杂交技术基础上建立的一种染色体分析手段,已广泛应用于肿瘤遗传学的研究,尤其是用于染色体隐匿性重排及复杂核型分析。本研究旨在利用现有实验条件,建立一种可靠的人类全染色体分析方法———重复多色荧光原位杂交技术(repetitive multicolour fluorescence in situ hybridization,RM-FISH)。采用特异的全染色体涂染探针,分别用Cy3、Cy5、FITC3种荧光素直接标记,组合制备4组六色的探针池,对同一染色体片先后进行4次杂交,通过装备了4组滤镜的荧光显微镜捕获信号。RM-FISH技术结合反相DAPI显带对1例原发性食管鳞癌进行核型分析,获得了全部染色体的特异信号。本研究建立的RM-FISH简便、易行,是光谱核型分析的一种较理想的替代技术。 杨壹羚 徐昕 陈虹 李锋 韩亚玲 罗曼莉 吴玉鹏 蔡岩 张钰 詹启敏 吴旻 王明荣关键词:荧光原位杂交 核型 染色体 脆性X综合征基因诊断与优生 被引量:1 1998年 脆性X综合征是一种严重影响人类智力发育的遗传性疾病,通过对脆性X基因FMR—1的DNA分析,建立了脆性X基因诊断的方法,可用于智力低下患者及群体的筛查,检出脆性X患者、携带者,开展产前诊断,这对预防X连锁智力低下,提高人口素质有重要意义。 丁秀原 陈虹关键词:脆性X综合征 基因诊断 产前诊断 优生 在毕赤酵母中表达的重组人血管内皮生长因子(rhVEGF_(121))为氨基端4个氨基酸缺失的异构体 被引量:1 2004年 为获得重组人血管内皮生长因子 ,采用重叠PCR扩增出含Kozak顺序、α因子前导肽和hVEGF12 1的融合基因 ,经DNA测序无误后 ,插入Pichiapastoris酵母载体 ,并体外构建 4拷贝表达单元质粒pAO81 5 4KαVEGF12 1。表达载体转化酵母宿主菌GS1 1 5 ,筛选出高效表达hVEGF的转化子。摇瓶培养并 1 %甲醇诱导 80h的VEGF分泌性表达量可达 30mg L。表达产物经S Sepharose离子交换层析纯化后测活表明表达产物二聚体具有良好生物活性。SDS PAGE分析、Western印迹表明表达产物具有适宜的分子量和抗原性。VEGF蛋白经氨基端氨基酸测序证实纯化后的不同糖化程度产物为同一蛋白质 ,但均为氨基端缺失了 4个氨基酸的全长为 1 1 7个氨基酸的VEGF。 陈工 马晓骊 陈虹 王欣 黄秉仁关键词:毕赤酵母 氨基酸 胰岛素样生长因子结合蛋白-3与甲状腺激素受体α1的相互作用及其对甲状腺激素应答性基因转录的调节 被引量:1 2011年 目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之间的相互作用;激光共聚焦显微镜观察两种蛋白在细胞中的分布;采用双萤光素酶实验检测过表达IGFBP-3对甲状腺素T3激活的生长激素启动子的影响。结果谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验结果证明IGFBP-3与TRα1在体内和体外都可以相互作用,激光共聚焦显微镜观察IGFBP-3和TRα1可以共定位于HEK-293细胞的细胞核。通过双萤光素酶实验检测到过表达IGFBP-3可以抑制甲状腺激素对生长激素启动子的激活作用(P<0.01)。结论 IGFBP-3通过与TRα1相互作用抑制甲状腺激素应答性基因的转录,为IG-FBP-3在核内发挥胰岛素样生长因子非依赖的作用提供了新的实验依据。 裘佳 马晓骊 王欣 陈虹 黄秉仁关键词:胰岛素样生长因子结合蛋白-3 三碘甲状腺原氨酸 RANTES基因启动子区多态性对其蛋白表达的影响 被引量:2 2005年 目的探讨调节正常T细胞表达和分泌活性因子(RANTES)基因启动子区单核苷酸多态性对其蛋白表达的影响。方法分别测定44例正常儿童、44例哮喘患儿血清中及45例哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清中RANTES的含量,同时对45例哮喘患儿DNA样本进行RANTES基因型确定。结果哮喘患儿血清中RANTES的水平显著高于正常对照儿童(P<0.01)。未发现RANTES-403(G/A)、-28(C/G)两位点的不同基因型显著影响哮喘患儿血清RANTES蛋白的水平(P>0.05),但两位点的不同基因型哮喘患儿,其PBMC分泌的RANTES水平有所不同:-403GA及-403AA基因型个体低于-403GG纯合型(P=0.06),-28CG杂合型个体低于CC纯合型(P<0.05)。结论趋化因子RANTES在哮喘的发病中具有重要作用,RANTES基因启动子区单核甘酸多态性可能通过影响其基因的表达,进而影响蛋白的表达,最终影响哮喘的发病过程和严重程度。 刘传合 陈虹 胡良平 伏瑾 张惠芹 张嘉芹 张嘉琳 陈育智关键词:趋化因子 基因 多态性