宋天琪
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
- 2017年
- 试验旨在构建牛分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物学活性。采用PCR技术扩增并克隆牛分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261-Mbeis,经双酶切和测序鉴定其正确性,利用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blotting技术检测牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达,质谱鉴定目的蛋白氨基酸序列。研究结果表明,成功构建了牛分枝杆菌eis基因穿梭表达载体pMV261-Mbeis;生长曲线表明负载重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blotting检测证实了牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中可表达出分子质量约44ku的eis蛋白;质谱检测证明了该蛋白即为牛分枝杆菌eis蛋白。本研究构建的牛分枝杆菌eis基因穿梭表达质粒pMV261-Mbeis在耻垢分枝杆菌中具有生物学活性,为下一步研究表达产物eis蛋白的功能奠定了基础。
- 张通明宋天琪鑫婷朱鸿飞贾红
- 关键词：耻垢分枝杆菌
- CDV强毒BJ16B2株H基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定被引量：1
- 2018年
- 试验旨在获得具有天然构象且抗原性良好的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)强毒株的H蛋白。以分离的CDV强毒株BJ16B2为模板,RT-PCR特异扩增H基因,克隆至表达载体pFastBacTMHTA上,酶切及测序鉴定正确后比对分析H基因同源性,并将重组质粒pFastBacTMHTA-H转化大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞,同源重组构建穿梭质粒rBacmid-H,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒。利用IFA和Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。结果显示,重组质粒pFastBacTMHTA-H酶切测序鉴定正确,该H基因属于Asia-1强毒株,与参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.8%~99.3%和89.6%~99.5%。在杆状病毒中所表达的H蛋白能与CDV阳性血清及His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定能够产生特异性绿色荧光,且在68ku左右出现蛋白条带,表明H蛋白成功表达且具有良好的反应原性。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,为后续蛋白结构和抗原特性差异分析、单抗制备、CDV亚单位疫苗的开发奠定了基础。
- 陈美荣林伟东宋天琪鑫婷郭晓宇黄克和贾红
- 关键词：H基因昆虫杆状病毒表达系统
- 重组犬α6干扰素的酵母表达及其抗病毒活性评价被引量：2
- 2019年
- 试验旨在构建犬α6干扰素毕赤酵母表达系统,并对其进行优化和筛选,以期获得高活性的重组犬α6干扰素(CaIFN-α6)。根据CaIFN-α6基因序列,按毕赤酵母菌密码子偏好性对CaIFN-α6全基因序列进行优化与合成,用XhoⅠ和NotⅠ双酶切将其连接至载体pPICZαA中,构建pPICZαA-CaIFN-α6重组表达质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取质粒pPICZαA-CaIFN-α6并线性化,电转入酵母感受态细胞X33中制备重组菌。采用甲醇进行诱导表达,收集上清,超滤浓缩,最终获得纯化的重组CaIFN-α6。利用BCA法测得纯化后的CaIFN-α6蛋白浓度为1.5 mg/mL,Western blotting分析表明CaIFN-α6蛋白具有良好的反应原性,SDS-PAGE显示其纯度约在95%以上,MDCK/VSV法检测其效价为2.37×10^7 IU/mL,比活性为1.58×10^7 IU/mg。结果表明犬α6干扰素在毕赤酵母pPICZαA表达载体系统中成功表达,且具有较高的生物活性,为后期的犬病毒病的临床预防与治疗提供了良好的支撑。
- 宋天琪侯绍华侯绍华郭晓宇鑫婷姜一曈袁维峰朱鸿飞
- 关键词：真核表达抗病毒活性
- 重组犬α2干扰素的原核表达及其抗病毒活性评价被引量：5
- 2018年
- 试验旨在构建犬α2干扰素(CaIFN-α2)大肠杆菌表达系统,并进行优化和筛选,评价其表达的重组犬α2干扰素的抗病毒活性。根据GenBank中CaIFN-α2的基因序列,按大肠杆菌密码子偏好性对CaIFN-α2全基因序列进行优化与合成,连接至pET-32a表达载体中,构建pET-32a-CaIFN-α2重组表达质粒。设计1对含NdeⅠ/BamHⅠ酶切位点的特异性引物,克隆CaIFN-α2成熟肽基因,连接至pET-21a表达载体中,构建pET-21a-CaIFN-α2重组表达质粒。将两种重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物均以包涵体形式存在。表达菌经超声破碎、变性、复性和分子筛层析后,得到纯化的CaIFN-α2蛋白,纯度约为90%。采用细胞病变抑制法在MDCK-VSV系统中测定其抗病毒活性,结果显示,纯化后pET-32a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性为1.5×103IU/mL,而纯化后pET-21a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性高达1.0×107IU/mL。本试验结果表明CaIFN-α2在pET-32a及pET-21a载体系统中均能成功表达,且具有抗病毒活性,但在pET-21a载体系统中表达产物的活性更高,试验结果为进一步开发和利用犬干扰素制剂奠定了基础。
- 宋天琪金红岩张通明陈美荣朱鸿飞贾红
- 关键词：原核表达抗病毒活性
- 犬瘟热病毒BJ16B2株的分离鉴定及H基因遗传进化分析被引量：7
- 2018年
- 采用Vero/SLAM细胞,从疑似犬瘟热病毒（CDV）感染犬的眼鼻分泌物拭子中分离到1株病毒,经细胞病变（CPE）观察、RT-PCR检测和间接免疫荧光试验鉴定,确定该分离株为CDV,命名为BJ16B2。对其H基因进行克隆和测序分析,BJ16B2株属于Asia-1型;潜在N-糖基化位点分析,共有9个位点,且在309~311位点,为强毒株。同源性比对分析发现,BJ16B2与参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为88.7%~99.5%和86.5%~99.5%。其中与Asia-1型SY株同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性均为99.5%,与疫苗株Snyder Hill、CDV3、Convac以及Onderstepoort亲缘关系较远,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.6%~91.1%和90.3%~91.4%。强毒株BJ16B2的成功分离以及对其H基因序列分析,有利于进一步了解当前中国CDV流行株变异情况,为CDV毒力变化和宿主嗜性的研究提供参考依据。
- 陈美荣林伟东宋天琪贾红朱鸿飞黄克和
- 关键词：犬瘟热病毒H基因
- 犬重组干扰素-α6及其制备方法与应用
- 本发明提供了一种犬重组干扰素‑α6及其制备方法与应用。该犬重组干扰素‑α6的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了犬重组干扰素‑α6的制备方法，利用毕赤酵母菌株表达系统表达含有本发明密码子优化了的犬重组干...
- 贾红鑫婷郭晓宇侯绍华朱鸿飞姜一曈宋天琪
- 文献传递
- 犬干扰素-α2重组蛋白的制备方法
- 本发明提供一种犬干扰素‑α2重组蛋白的制备方法,对犬干扰素‑α2基因进行密码子优化后，克隆至pET‑21a或pET‑32a中构建重组表达质粒，转化至大肠杆菌感受态细胞BL21中，制备重组菌，通过发酵、诱导表达、纯化，获得...
- 贾红朱鸿飞宋天琪鑫婷侯绍华姜一曈
- 文献传递
