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糖基化终末产物对人牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞骨向分化能力影响的比较研究被引量：8: 2013年; 目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)及人颌骨骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)骨向分化能力的影响。方法:组织块法和有限稀释法克隆化培养hPDLSCs及hBMMSCs,流式细胞仪检测两种细胞表型分子表达,取第3代细胞分别在10μg/mL AGEs刺激下进行矿化诱导,于诱导的21 d,茜素红染色、十六烷基吡啶定量观察钙结节形成情况、诱导7 d,碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real time PCR)和Western blot检测成骨相关基因及蛋白表达情况。结果:流式细胞仪显示两种细胞均阳性表达CD44、CD146、stro-1、CD90。成骨诱导21 d后茜素红染色和定量分析显示,hPDLSCs AGEs组矿化能力低于对照组;而hBMMSCs AGEs组矿化能力高于对照组(P<0.05)。成骨诱导7 d后,ALP染色显示,两种细胞ALP活性变化趋势与茜素红定量分析相同;RT-PCR检测hPDLSCs中ALP、Runx-2、Col-1、Runx-2mRNA表达水平均低于对照组,而hBMMSCs中各基因均高于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示,各组Runx-2蛋白表达趋势与RT-PCR结果趋势相同。结论:AGEs抑制hPDLSC的骨向分化,促进hBMMSC骨向分化。; 杨琨崔晓霞邓超伍燕刘琪金岩; 关键词：糖基化终末产物人牙周膜干细胞骨向分化

糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化过程中的Wnt经典信号通路研究被引量：12: 2015年; 目的探讨Wnt经典通路相关因子Dickkopf蛋白1(DKK-1)、β-链蛋白(β-catenin)在糖基化终末产物(AGEs)介导的人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨分化过程中的变化。方法通过体外组织块法和有限稀释法克隆化培养获取h PDLSCs,实验分两组:正常h PDLSCs组(N-h PDLSCs组)和AGEs刺激的正常h PDLSCs组(A-h PDLSCs组)。对2组细胞成骨矿化诱导后行碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色;实时聚合酶链反应(real time PCR)检测成骨基因,以及Wnt经典通路中相关因子DKK-1、β-catenin;Western blot检测相关成骨蛋白、细胞核蛋白β-catenin。结果成骨诱导后,A-h PDLSCs组ALP染色明显浅于N-h PDLSCs组;茜素红染色A-h PDLSCs组钙化结节少于N-h PDLSCs组;real time PCR与Western blot的结果显示A-h PDLSCs组BSP、ALP、Runx-2的表达都较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Wnt经典信号通路中相关因子:A-h PDLSCs组β-catenin表达高于N-h PDLSCs组,A-h PDLSCs组DKK-1表达明显低于N-h PDLSCs组,并且Weston blot显示A-h PDLSCs组核蛋白β-catenin的表达高于N-h PDLSCs组。结论 AGEs可以使h PDLSCs骨向分化过程中Wnt经典通路的抑制因子DKK-1下调,细胞核中的β-catenin表达升高,激活了Wnt经典通路,并且抑制了骨分化。; 伍燕邓超杨琨崔晓霞刘琪金岩; 关键词：糖基化终末产物人牙周膜干细胞骨向分化

微小RNA-17在糖基化终末产物刺激下人牙周膜干细胞骨向分化过程中的调控作用被引量：5: 2015年; 目的检测微小RNA-17(mir-17)在糖基化终末产物(AGEs)刺激下人牙周膜干细胞(HPDLSCs)骨向分化过程中的表达,并分析其对该过程的影响。方法体外组织块法和有限稀释法克隆化培养HPDLSCs。实时定量聚合酶链反应(real time PCR)检测实验组细胞在骨向分化过程中不同时间点mir-17的表达;采用细胞转染技术过表达和抑制mir-17的表达,real time PCR和Western blot分别检测转染前后其成骨基因mRNA水平和蛋白水平的表达情况。结果成骨诱导3、7、14 d后,对照组和实验组mir-17的表达均下调,差异有统计学意义(P<0.05)。上调mir-17后,与对照组相比,实验组骨涎蛋白(BSP)、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子-2(Runx-2)mRNA表达水平以及Runx-2蛋白水平均明显降低;下调mir-17后,实验组BSP、ALP、Runx-2 mRNA表达水平以及Runx-2蛋白水平均高于对照组。结论 AGEs通过影响HPDLSCs骨向分化过程中mir-17的表达从而抑制了HPDLSCs的骨向分化。; 邓超伍燕杨琨崔晓霞刘琪金岩; 关键词：糖基化终末产物人牙周膜干细胞

糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化能力影响的研究被引量：5: 2012年; 目的:探讨糖基化终末产物(AGEs-HSA)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)骨向分化能力的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,流式细胞仪检测牙周膜细胞表型分子CD44、CD146、stor-1、CD90,对其进行干细胞鉴定,将培养出的牙周膜干细胞与不同浓度的AGE-HSA共同培养,并矿化诱导后茜素红染色观察钙结节形成情况、碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real timePCR)检测成骨基因表达情况。结果:流式细胞仪细胞表型分析CD44、CD146、stor-1、CD90表达呈阳性。成骨诱导21 d后茜素红染色,对照组和实验组均出现不同程度的矿化结节,定量分析显示1、10、100、200μg/mLAGEs组矿化能力均比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间矿化能力均有统计学差异(P<0.05),且随着AGEs浓度的升高,矿化能力逐渐降低。成骨诱导7 d ALP染色比较发现各实验组均比对照组减弱。成骨诱导1周后RT-PCR检测各实验组的成骨基因ALP、Runx-2、Col-1、Runx-2 mRNA表达水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间各成骨基因的表达也有统计学差异(P<0.05)。结论:AGEs能抑制HPDLSC的骨向分化,并在一定范围内呈浓度依赖性。; 邓超伍燕杨琨崔晓霞夏佳佳王岚刘琪金岩; 关键词：糖基化终末产物人牙周膜干细胞骨向分化

糖基化终末产物对牙周膜干细胞增殖及其Wnt经典信号通路相关基因表达的影响被引量：6: 2012年; 目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)增殖及其Wnt经典信号通路相关基因DKK-1、β-catenin表达的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养HPDLSC,并与100μg/mL AGEs共同培养,通过细胞克隆形成率、细胞生长曲线观察AGEs对HPDLSC增殖能力的影响;RT-PCR和Western Blot检测实验组和对照组DKK-1、β-catenin mRNA以及核蛋白β-catenin的表达量。结果:经100μg/mL AGEs刺激的HPDLSC,其克隆形成率、增殖速度以及β-catenin mRNA和核蛋白β-catenin的表达量均明显低于对照组(P<0.05);而DKK-1 mRNA则明显高于对照组(P<0.05)。结论:AGEs能抑制HPDLSC的增殖及其Wnt经典信号通路。; 伍燕邓超杨琨崔晓霞夏佳佳王岚刘琪金岩; 关键词：糖基化终末产物牙周膜干细胞

糖基化终末产物介导的牙周膜干细胞成骨分化过程中Wnt经典信号通路相关作用机制的研究被引量：12: 2013年; 目的:探讨人牙周膜干细胞(human periodontal stem cells,HPDLSCs)成骨分化过程中在糖基化终末产物(AGE-HSA)介导下Wnt经典通路β-catenin的变化。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,流式细胞仪进行干细胞表型分子鉴定后,根据不同刺激环境随机分为OS组(单纯成骨诱导对照组)、OSA组(成骨诱导液+10μg/mL AGEs)、OSDKK-1组(成骨诱导液+100μg/mL DKK-1)、OSA+DKK-1组(成骨诱导液+10μg/mL AGEs+100 ng/mL DKK-1)4组,并进行相应的诱导培养。诱导培养7 d后,碱性磷酸酶染色检测ALP活性;RT-PCR检测Wnt经典通路基因β-catenin mRNA以及成骨相关基因Runx2、ALP mRNA的表达变化情况;Western Blot检测细胞核蛋白β-catenin和细胞总蛋白Runx2的表达变化情况。结果:纯化的人牙周膜干细胞各表型分子CD29、CD90、CD146、stro-1均阳性表达,ALP染色结果显示:OSA组颜色最浅,OSDKK-1组颜色最深,OSA+DKK-1组颜色介于两者之间;RT-PCR及Western Blot结果显示:与OS组相比,OSDKK-1组β-catenin的表达水平明显降低,Runx2、ALP的表达水平明显升高(P<0.05),表明DKK-1抑制了经典wnt通路,而使HPDLSCs的成骨能力增强;而OSA组β-catenin的表达水平明显升高,Runx2、ALP表达水平明显降低(P<0.05),表明激活了经典wnt通路,而使HPDLSCs的成骨能力下降;当联合加入AGEs和DKK-1(OSA+DKK-1组)时,成骨能力与OSDKK-1组相比明显降低,而与OSA组相比明显升高(P<0.05)。结论:在HPDLSCs成骨分化过程中,抑制经典wnt通路可以促进其骨向分化;而10 ng/mL的AGEs可通过激活wnt经典通路从而抑制其成骨分化。; 崔晓霞杨琨伍燕邓超刘琪金岩; 关键词：糖基化终末产物人牙周膜干细胞骨向分化

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杨琨

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