刘洁
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胚胎干细胞对A549、HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2018年
- 本研究以探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,h ESCs）对肿瘤细胞A549、Hep G2增殖与凋亡的影响为目的,以h ESCs、A549细胞、Hep G2细胞作为研究对象,采用transwell小室在体外分别建立h ESCs与A549、Hep G2细胞的非接触式共培养的方法,设置Co-A549、Co-Hep G2作为实验组,单独培养的A549、Hep G2细胞作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,Hochest33258染色和流式细胞术检测细胞的凋亡,q RT-p CR和Western blotting检测Bcl2、Bax及Caspase-3的m RNA转录水平和蛋白表达水平。CCK-8检测显示,实验组细胞的增殖受到显著抑制（p〈0.05）,Hochest33258染色观察到实验组细胞出现核固缩、变形,流式细胞术检测到实验组细胞的凋亡率显著高于对照组（p〈0.05）,q RT-p CR和Western blotting显示h ESCs可上调实验组细胞Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl2的表达（p〈0.05）。由此我们得到人胚胎干细胞对肿瘤细胞A549、Hep G2有明显的增殖抑制作用并可诱导A549、Hep G2肿瘤细胞的凋亡的结论,为干细胞治疗肿瘤的研究奠定了实验基础。
- 霍本念刘洁刘洁张婷刘梦楠王薛
- 关键词：人胚胎干细胞凋亡
- 人胚胎干细胞抑制人肝癌细胞系SK-Hep1增殖并促进凋亡
- 2017年
- 目的探究在人胚胎干细胞hESCs与人肝癌细胞系SK-Hep1共培养微环境中,hESCs对SK-Hep1人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法建立hESCs与SK-Hep1人肝癌细胞系的非接触式共培养体系,将与hESCs共培养的SK-Hep1细胞作为实验组,单独培养的SK-Hep1细胞作为对照组。MTT法检测SK-Hep1细胞的增殖能力;Transwell小室法检测SK-Hep1的侵袭与迁移能力;Hoechst33258染色后观察共培养后SK-Hep1细胞核的变化;流式细胞术检测SK-Hep1细胞凋亡率。结果与hESCs共培养后,SK-Hep1细胞的增殖能力受到抑制,随着时间增加,抑制效果越显著(P<0.05);细胞侵袭、迁移穿过Transwell小室的数量显著减少(P<0.05);发生核固缩、变形和浓染的SK-Hep1细胞较对照组增多;细胞凋亡比率较对照组显著增加(P<0.05)。结论人胚胎干细胞对SKHep1人肝癌细胞系有抑制作用。
- 张婷霍本念刘洁刘梦楠冯涛
- 关键词：胚胎干细胞肝癌细胞
- 胚胎干细胞对急性髓系白血病细胞KG-1a的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:研究人胚胎干细胞H9在体外对人急性髓系白血病细胞KG-1a增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外将人胚胎干细胞H9和白血病细胞KG-1a进行接触式共培养,用CCK8检测KG-1a的增殖情况;用流式细胞术检测共培养后细胞的凋亡以及周期改变;荧光定量PCR检测BAX、BCL-2、caspase-3的m RNA表达;Western blot分析BAX、BCL-2、caspase-3的蛋白表达。结果:H9能明显抑制KG-1a细胞的增殖,将细胞阻滞于G2/M期,共培养后的KG-1a细胞的凋亡率高于对照组。BAX、Caspse-3的m RNA和蛋白表达均上调,BCL-2的m RNA和蛋白表达下调。结论:胚胎干细胞能抑制KG-1a细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与BCL-2表达下调和BAX、Caspse-3表达上调有关。
- 刘洁刘洁张婷张婷刘梦楠王薛
- 关键词：胚胎干细胞急性髓系白血病细胞共培养
- 人胚胎干细胞对肝癌HepG2细胞体外抑制作用的研究
- 2017年
- 目的:研究体外共培养情况下人胚胎干细胞H9对肝癌HepG2细胞的抑制作用。方法:建立人胚胎干细胞(H9)与肝癌HepG2细胞共培养体系,显微镜下观察胚胎干细胞对肿瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞仪检测H9细胞对肿瘤细胞的凋亡与周期的影响,Transwell小室法检测H9细胞对HepG2细胞侵袭和迁移的影响,基因芯片分析共培养后HepG2细胞全基因组的表达谱变化。结果:结果发现共培养过程中,肝癌HepG2细胞生长受到抑制,随共培养时间延长,细胞数量逐渐减少,出现老化或凋亡迹象;流式细胞术检测发现HepG2细胞凋亡率显著增加,细胞周期被阻滞于G0/G1期;Transwell实验发现HepG2细胞侵袭、迁移力均降低;基因芯片结果发现HepG2细胞全基因组表达谱发生了显著变化,差异基因涉及多条信号通路。结论:人胚胎干细胞H9体外对人肝癌细胞HepG2有一定程度的抑制作用。
- 郑良栋何雪梅张婷刘洁霍本念刘梦楠王薛冯涛
- 关键词：胚胎干细胞肝癌共培养
- 感染HBVx的肝前体细胞的小鼠体内稳定表达模型构建被引量：3
- 2017年
- 为了探究HBVx是否累及其他组织器官,本研究构建了携带HBVx基因的慢病毒表达载体,感染14-19肝前体细胞,使其能稳定表达HBVx基因,并构建了门静脉动物模型,使肝前体细胞在小鼠体内存活并能够进一步分化,并在不同时间段分别检测小鼠各个组织中HBVx目的基因的表达情况。通过PCR扩增HBVx目的基因,使之与逆转录病毒表达载体(p Lenti-CMV-HA-3FLAG-PGK-EGFP-F2A-Puro)连接,后通过酶切、菌落PCR、测序验证质粒是否构建成功。构建成功后用携带HBVx逆转录病毒感染14-19肝前体细胞,嘌呤霉素(puromycin)连续筛选4周后进行细胞HBVx目的基因检测。同时进行门静脉动物模型构建,分别在第3天、7天、14天、30天、60天进行检测小鼠各个组织器官中的HBVx的表达情况。成功构建携带HBVx的慢病毒表达质粒、稳定携带HBVx的14-19肝前体细胞、门静脉动物模型。同时检测了各个组织器官HBVx的表达情况,HBVx可在肝脏内生长分化且可在肝脏内长时间高表达,其余组织不表达。携带HBVx的肝前体细胞可在肝内生长分化,且HBV具有嗜肝性,不累及其他脏器。构建了一个长期表达HBVx的动物模型,为本课题组后续研究HBVx导致肝癌发生发展奠定了良好基础。
- 刘梦楠张婷刘洁张杰霍本念冯涛
- 关键词：HBVX肝前体细胞慢病毒动物模型
