梁盼盼
- 作品数：2 被引量：14H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立被引量：5
- 2011年
- 目的构建pneo-CH9/3091真核表达质粒,并建立其稳定表达的HepG2细胞系。方法质粒pCH9/3091包含HBV1.1倍体和CMV启动子,将PCR扩增出的带有新霉素(neo)抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091。重组质粒经酶切,测序验证正确后,通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2。G418筛选后,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),PCR检测细胞上清液的病毒颗粒,Western blot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southern blot检测细胞内核心颗粒HBV DNA的复制情况。结果有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性,且HBV C区片段可通过PCR扩增出来,West-ern bot结果提示只有细胞株HepG2-H7可以表达HBV核心蛋白。Southern blot结果说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合,并且能在细胞内检测出HBV DNA复制中间体。结论成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7,能持续产生HBV病毒颗粒。
- 罗强苏怀彬梁盼盼袁作为张文露黄爱龙胡接力
- 关键词：乙肝病毒HEPG2细胞
- 慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗中的病毒准种演变被引量：9
- 2011年
- 目的探讨拉米夫定耐药后换用恩替卡韦补救治疗的慢性乙型肝炎患者的病毒准种演变。方法提取1例慢性乙型肝炎患者治疗中的7个不同时间点（0、24、48、60、72、96、152周）血清中的HBV DNA，巢式聚合酶链反应法扩增HBV DNA聚合酶基因逆转录酶区，克隆测序法对逆转录酶区氨基酸替换形式及准种分布进行分析，并采用扩增耐药突变系统聚合酶链反应法对患者病毒种群中野毒株与病毒总量进行定量检测。结果患者在治疗过程中主要存在rtM204V、rtLl80M＋rtM204V和rtM204I3种拉米夫定耐药相关的病毒株变异形式，各病毒株所占比例不断发生变化，基线时HBV野毒株为优势病毒株，在病毒学突破时，种群中全部为耐药突变株；换用恩替卡韦治疗后，随着病毒载量的下降，拉米夫定耐药突变株被抑制，野毒株在种群中比例逐渐上升，并成为优势病毒株（79．3％）。扩增耐药突变系统聚合酶链反应检测结果显示，在基线和发生病毒学突破时，野毒株在种群中的比例分别为68．55％和0．21％，换药治疗后24周，野毒株比例开始上升，此后野毒株占种群的比例波动于16．01％～26．93％。结论慢性乙型肝炎患者在核苷（酸）类药物序贯治疗过程中，HBV种群的准种分布一直处于动态变化中。不同的HBV准种演变模式可能在恩替卡韦补救治疗中对恩替卡韦耐药发生的作用也不相同。
- 梁盼盼郭进军李青岭罗强石小枫黄爱龙
- 关键词：肝炎病毒乙型拉米夫定病毒准种
