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NKT细胞在动脉粥样硬化中的作用: 2011年; 然杀伤T细胞(natural killer T cell,NKT细胞)是一种特殊的淋巴细胞亚群,具有部分T细胞和NK细胞的特征。与这些细胞不同的是,NKT细胞不仅能够识别醣脂类抗原,还在激活后产生促炎症因子和抗炎症因子。由于这些特性,NKT细胞在炎症和免疫方面的研究越来越热。动脉粥样硬化是一种受免疫调节的炎性疾病,因此对NKT细胞在该疾病中作用的研究也逐渐开展起来。; 王伟杜美陈正望; 关键词：自然杀伤T细胞免疫反应动脉粥样硬化

BK通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布被引量：1: 2014年; 目的:研究大电导、钙离子和电压激活的钾离子通道(BK通道)在HEK293细胞膜上的单分子定位及其总体空间分布情况。方法:分别用mEos2、Dronpa等荧光蛋白标记BK通道的α亚基和辅助性β2亚基,将这些质粒在HEK293细胞内瞬时转染以表达通道蛋白,然后用激光共聚焦荧光显微成像、全内反射荧光显微成像、光敏定位荧光成像等技术观察BK通道的亚细胞定位及单分子分布,并用电生理实验技术检测荧光蛋白对BK通道有影响。结果:激光共聚焦荧光显微成像和全内反射荧光显微成像技术只能在亚细胞水平定位通道蛋白,BK通道在细胞膜上聚集并形成不规则的蛋白簇,它的α亚基和β2亚基在细胞膜上完全共定位;光敏定位荧光成像技术成功定位BK通道蛋白簇里面的单分子,虽然α和β2亚基紧紧靠在一起,它们之间依然存在空间距离;BK通道的质膜表达和功能特性不受荧光蛋白的影响。结论:BK通道蛋白簇里面包含大量的α和β2亚基的蛋白单分子,它们紧密地聚集在一起,但是并没有完全共定位,在分子水平上揭示了BK通道α和β亚基功能耦合的结构基础,为以后研究大分子蛋白质间的相互作用机制提供了很好的分子模型,光敏定位荧光成像技术作为一种全新的单分子荧光成像手段,在基因表达、信号通路、蛋白质相互作用等许多重要生命活动的研究中发挥重要作用。; 刘永锋侯盼盼夏程龙王伟孔文娟丁久平; 关键词：BK通道共定位

AIF-1原核载体的构建及表达纯化: 人异体移植炎症因子1/( human allograft inflammatory factor 1,hAIF-1,Daintain/)是上世纪90年代中后期欧美几个研究小组从不同的研究目标中鉴定出的一个由巨噬细胞和活化...; 王伟; 关键词：原核表达; 文献传递

BK通道功能性复合体的研究进展被引量：1: 2014年; 离子通道可以与其他蛋白质耦合形成稳定的大分子复合物,以确保信号转导的效率和准确性。大电导、钙离子激活的钾离子通道(BK通道)的核心是由形成孔区的α亚基组成的四聚体,它具有BK通道的基本生理功能。在不同的组织内,BKα可以与不同的辅助性亚基结合,使通道功能变得复杂多样。BK通道可以将细胞兴奋性与细胞内的钙离子信号联接在一起,在血流、泌尿、免疫、神经递质释放等许多生命过程中发挥着重要的调节作用。近年来,大量的研究工作表明,BK通道可以与钙离子通道、细胞骨架蛋白、蛋白激酶等生物大分子形成功能性复合物,这对通道功能调控和信号转导等生命活动具有重要的生理意义。本文综述了这些BK通道功能复合体的主要分类、功能特性以及生理学意义,并对其未来的研究前景进行展望。; 刘永锋孔文娟王伟; 关键词：BK通道

硫氧还蛋白:一个肿瘤治疗的新靶点被引量：2: 2009年; 硫氧还蛋白1(Thioredoxin-1,Trx-1)在多种肿瘤细胞和组织中均有过量的表达,它可以调节肿瘤细胞中凋亡通路、转录因子和某些功能蛋白酶的活性,进而影响着肿瘤的发生、发展、增殖、凋亡及血管发生等生理过程。而且,过量表达的Trx-1导致肿瘤细胞对多种治疗药物产生耐药性。近年来Trx-1已成为肿瘤研究的热点,是一个极有价值的肿瘤治疗的新靶点。; 唐文心王伟陈正望陈孝平; 关键词：硫氧还蛋白肿瘤靶点

生物活性肽Lunasin的原核表达和分离纯化被引量：4: 2011年; 目的:利用基因工程的方法在大肠杆菌中表达并纯化生物活性肽Lunasin。方法:将合成的Lunasin基因插入原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点Nde I和Xho I之间,然后将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白的表达。然后利用亲和层析技术将含有6×His标签的蛋白分离纯化、脱盐、冻干。结果:①鉴定结果表明在6kDa位置出现目的条带Lunasin重组蛋白。②亲和层析在100mM咪唑时得到了洗脱的重组蛋白。结论:在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并且纯化出了生物活性肽Lunasin。; 盖文丽颜冬菁王伟陈孝平陈正望; 关键词：原核表达 IPTG

人胱硫醚β合成酶原核表达纯化及鉴定被引量：3: 2011年; 目的:构建人胱硫醚β合成酶(human cystathionineβ-synthase,hCBS)基因原核表达载体,在E.coli BL21(DE3)中表达,并进行纯化和酶活性检测。方法:以胰腺细胞cDNA文库为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增hCBS基因蛋白编码区的全序列,克隆入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-hCBS。经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因后与人CBS基因(基因bank号:BT007154.1)完全一致,转入E.coli BL21(DE3)中,由IPTG诱导表达融合蛋白。结果:经SDS-PAGE、Western blot分析,证明诱导表达的蛋白为重组人CBS(rhCBS)。再由Ni-NTA树脂亲和层析,并脱盐冷冻干燥后获得重组rhCBS(约19 mg/L培养物),并测得其比活力约为57 kU/g。结论:成功地表达纯化出具有功能活性的重组蛋白rhCBS,为进一步研究该酶的相互作用蛋白以及其在生物学和临床科学的作用奠定了基础。; 王伟杜美陈欢陆婕; 关键词：胱硫醚Β合成酶同型半胱氨酸酶活力原核表达

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王伟

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