黄秉仁
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人神经生长因子低亲和力受体（p^（75）NGFR）cDNA的克隆及其在神经细胞中表达活性的初步研究被引量：1
- 1996年
- 利用酸性异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总ＲＮＡ，用逆转录与聚合酶链反应相结合的ＲＴ－ＰＣＲ法，扩增出人神经生长因子低亲和力受体ｐ^（７５）ＮＧＦＲ基因ｃＤＮＡ，在限制性内切酶ＳｍａⅠ存在下的连接体系中，将扩增出的ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１２的ＳｍａⅠ位或，经限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＰｓｔⅠ酶切鉴定是否插入以及ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮＡ再次亚克隆至ｐＵＣ１２载体中后，以其双链ＤＮＡ为模板，用末端终止法测出其全部核苷酸顺序，证实其核苷酸编码的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ除两个碱基突变外，其余与文献完全一致。完整的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮＡ分两步克隆到逆转录病毒表达载体ｐＸＴ－１，经ＰＡ３１７包装细胞株体外包装后、收集病毒上清转染条件不死性大鼠小脑神经细胞系Ｒ２．初步结果表明转染了ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的Ｒ２细胞株去除ＮＧＦ培养时出现程序化死亡的典型特征梯型ＤＮＡ带。
- 易明顾继杰黄秉仁蔡良琬
- 关键词：神经生长因子神经细胞
- 包涵体中重组人神经生长因子的纯化、复性及鉴定被引量：2
- 1998年
- 目的利用简单的纯化工艺，获得具有生物活性的重组人神经生长因子（rhNGF）。方法利用PET－11d－NGF／BL21工程菌表达rhNGF，通过改变培养基成份优化发酵条件。建立了一种在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析的简单、快速、重复性好的rhNGF纯化方法。纯化产物用鸡胚背根神经节伸长法测定其生物学活性。结果优化发酵条件后，表达量提高至约占总菌体的10．9％。经一步层析，重组蛋白的纯度可达到80％以上。1BU（生物活性单位）约为0．5μg／mL。结论包涵体复性表明，包涵体的复性与复性液中氧化型与还原型含疏基化合物的比例密切相关。抑制杂菌生长，可明显提高rhNGF的表达量。纯化的rhNGF为分析NGF结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。
- 王欣马晓骊黄秉仁黄秉仁
- 关键词：神经生长因子包涵体纯化复性
- EGF抑制BT325细胞生长的相关基因分离、克隆被引量：2
- 2002年
- 目的 寻找抑制胶质瘤细胞生长的新的相关基因。方法 应用mRNA差异显示技术与cDNAarray反向Northern杂交相结合 ,分离、克隆表皮生长因子 (EGF ,10 0ng/ml)作用后生长抑制的人脑多形性胶质母细胞瘤BT32 5细胞与对照组 (不加EGF)相比新表达或表达明显上调的基因。结果克隆了 6个BT32 5细胞生长抑制后表达明显增高的EST (expressedsequencetag) ,其中 1个为新基因序列 ,另 5个分别与CGI 5 1、转醛缩酶 (Transaldolase、TAL)、核糖蛋白L35a、 4 0s核糖相关蛋白基因及BC 2蛋白mRNA有不同程度的同源性 ,其中功能分析提示TAL表达增加可诱导细胞凋亡。 6个EST均投递GenBank ,分别获得了接受号 :AW4 0 884 4～ 4 0 884 8。结论 所分离、克隆的基因可能与胶质瘤的生长抑制有关。
- 周明锐任祖渊王欣黄秉仁苏长保王任直蔡良婉
- 关键词：表皮生长因子脑肿瘤
- VEGF基因表达载体的构建及其表达被引量：2
- 2002年
- 为构建血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达载体,以人胎肝cDNA库为模板,应用多聚酶链反应(PCR)技术,扩增全长的VEGF165cDNA序列,定向连接进质粒pcDNA3.1/Zeo(+)的多克隆位点中,以重组质粒转染体外培养的293细胞,收集不同时相细胞裂解液进行蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳,以抗人VEGF165单克隆抗体行Westen blotting检测,观察VEGF基因的表达情况。结果显示选择合适的退火温度和引物,可以自人胎肝cDNA库中特异性地扩增VEGF165的cDNA序列。所构建的pcDNA3.1/Zeo(+)-VEGF165真核表达载体系统能较好地转染体外培养的293细胞,Westen blotting检测到特异性表达条带。提示重组的VEGF165基因表达载体能够成功转染哺乳动物细胞,并表达目的基因,为解决组织移植中血运重建问题提供了一条基因治疗途径。
- 王法刚赵敏黄秉仁
- 关键词：基因PCR技术质粒转染
- 全文增补中
- 人乳铁转运蛋白的克隆及表达
- 乳铁转运蛋白(LF)是一种多功能的糖蛋白,具有进行离子转运、抗菌、抗肿瘤、调节免疫及转录调节的功能。LF能够与免疫细胞表面的受体结合,从而发挥免疫调节的功能,同时还能够调节机体细胞因子的水平,并且可以抑制由于TNF-从头...
- 苑玉和黄秉仁
- 关键词：克隆真核表达
- 文献传递
